|
Improvement of retroviral vectors for efficient gene transfer
Šenigl, Filip ; Hejnar, Jiří (vedoucí práce) ; Šmahel, Michal (oponent) ; Ruml, Tomáš (oponent)
Souhrnvýsledků Retrovirovévektory, kteréjsou sďropnéefektivně přenášetgenetickou informaci do cilových buněk a integrovď se do jejich DNd jsou velice užitečrrépro mnoho experimentri ďe poúý stabitnípřenos geirůještěnemuslbý dostačující.V expresi přenesenýchgenůhrají významnou roli takéepigenetickémodifikace. Exprese mužebý přerrršenajiž v momantě integrace DNA vektoru nebo můžedochrázetkpostupnémuvypinaní kopii vektoru během ďouhodobých experimentů.Rebovirové vektory se mohou ve stabilitě exprcse výzrramně lišit ďe posfupnémutranskripčnímuumlčováni poďéhají všechny. Proto je zapotřebí mďifikovat retovirové vektory za účelemstabilizace jejich exprese v ciloých buňkóch. stabi|ní expreseje důIeátrizejmerravoblasti genovéterapie,kde je opakovrini bansdukce častonemožnénebove|mi komplikované. Retrovirovévektory odvozenéod ASLV jsou v savčíchbuňkách velmi účinně umlčovárry.Testova|ijsme moŽnoststabilizovatexpresi těchto vektorůinzerci vnitřního elementuCpG ostrovu (IE). cpc ostrovyjsou aliímésvou schopnostiudržovatpřilehlé promotorytranskripčněaktivní'Konstruova|ijsme vnitřní elementCpG' ostrovagenu pro adenosinfosforibosyltransferrázuo déIcel20bp' Tentoe|ementbyl vloŽenv sensei antisense orientacido tříruznýchm|stuvnitř LTR (nazačátekoblastiU3, mezi enhancerya pÍomotora na začátekoblasti U5)' Týo vektory...
|
|
Určování poloh dvojných vazeb u vyšších uhlovodíků.
Jersáková, Jana ; Barek, Jiří (vedoucí práce) ; Valterová, Irena (oponent)
Uhlovodíky, včetně alkenů jsou vedle voskových esterů, alkoholů, ketonů a kyselin jednou z hlavních sloučenin hmyzí kutikuly. Jejich praktický význam spočívá především v ochraně hmyzího těla před vysoušením, vodou a UV zářením. U vybraných druhů hmyzu plní funkci chemické komunikace a druhového rozpoznávání. Profil uhlovodíků může rovněž v některých případech sloužit jako tzv. otisk prstu definující specifitu druhu. Proto hraje poloha dvojné vazby alkenů obsažených ve svrchní části hmyzího těla důležitou roli. Tato práce popisuje využití katalytické hydroxylace oxidem osmičelým vázaným na polymerním nosiči, jako derivatizační metodu k určení polohy dvojné vazby. Byly optimalizovány reakční podmínky derivatizace na standardu obsahujícím jednu dvojnou vazbu a vzniklý derivát byl podroben fragmentačním experimentům. Optimální podmínky derivatizace a fragmentací nenasycených uhlovodíků byly aplikovány na reálných vzorcích ze švába amerického Periplaneta americana a masařky Neobellieria bullata.
|
|
Deriváty kyseliny methylen-bis(fosfonové) pro modifikaci biomolekul
David, Tomáš ; Lorenc, Miroslav (oponent) ; Kubíček, Vojtěch (vedoucí práce)
4 Název: Deriváty kyseliny methylen-bis(fosfonové) pro modifikaci biomolekul Řešitel: Tomáš David Ústav: Katedra anorganické chemie, Přírodovědecká fakulta Školitel: RNDr. Vojtěch Kubíček, Ph.D. E-mail školitele: vvvojta@seznam.cz Abstrakt Tato práce se zabývá přípravou derivátů methylen-bis(fosfonové) kyseliny. Bylo připra- veno a plně charakterizováno (pomocí NMR, MS) celkem 30 sloučenin (z toho 29 nových) ve středně vysokých až vysokých výtěžcích. Pomocí difrakce RTG na monokrystalu byly získány 4 nové krystalové struktury. Byl připraven derivát obsahující 4-nitrobenzylový zbytek, vhodný pro studium adsorpčních vlastností bis(fosfonátových) kyselin na hydroxyapatit (s kvantifikací pomocí UV-Vis spektroskopie). Dále byla připravena sada "building blocks" s charakteristickými funkčními skupinami (-NH2, -COOH, -NCS) v postranních řetězcích vhodných pro připojení ke složitějším skeletům pomocí amidické vazby nebo thiomo- čovinového můstku. Konjugačními reakcemi byly připraveny sloučeniny obsahující v postran- ním řetězci fluorescenční sondu (fluorescein a dansyl) pro sledování těchto látek při biologických aplikacích. Další modifikací derivátu s dansylovým zbytkem byla připravena trifunkční molekula, obsahující bis(fosfonát) jako vektor ke kostní tkáni, fluorescenční sondu pro detekci optickými metodami a...
|
|
Možnosti krasovění v přechodní facii České křídové pánve
Balák, František ; Bruthans, Jiří (vedoucí práce) ; Knížek, Martin (oponent)
V České křídové pánvi (ČKP) se nachází mohutné prameny s vydatností přes 100 l/s. Nestor české hydrogeologie Prof. Hynie považoval některé z pramenů za krasové a za nejpropustnější oblast označil tzv. přechodní facii mezi mělkovodními kvádrovými pískovci a hlubokovodními slínovci a vápenci. Schopnost krasovění hornin dosud nebyla v ČKP rigorózně studována a vznik silně propustných cest v ČKP je předmětem spekulací. Tato diplomová práce se zabývá otázkou, jaké sedimentární horniny potenciálně umožňují tvorbu krasové propustnosti v České křídové pánvi. K tomu je na horninových jádrech odvrtaných z výchozů v ČKP používána zrychlená simulace rozpouštění pomocí jejich loužení v kyselině chlorovodíkové Obsah karbonátů je měřen standartní i vlastní metodou. Dále je zjišťováno mineralogické a zrnitostní složení a struktura vzorků pomocí SEM. Jak se ukázalo, hranice krasovění není určena pouze obsahem karbonátu ale i zrnitostí sedimentu, jeho strukturou a přítomností sekundární křemenné složky. Z hlediska rozpustné složky může hranice úplného rozpadu pro některé horniny představovat 30% obsah karbonátů, nejodolnější vesměs velmi jemnozrnné horniny s SiO2 tmelem se však nerozpadají ani při 80% podílu karbonátů. Práce ukázala, že z obsahu karbonátů v horninách nelze spolehlivě odhadnout, zda se materiál bude rozpadat...
|
|
Syntéza 3-fenyl-5-hydroxy-2H-1,3-benzoxazin-2,4(3H)-dionů a jejich sirných analogů
Růžková, Barbora ; Macháček, Miloš (vedoucí práce) ; Palát, Karel (oponent)
Syntéza 3-fenyl-5-hydroxy-2H-1,3-benzoxazin-2,4(3H)-dionů a jejich sirných analogů Barbora Růžková V této diplomové práci jsem se zabývala přípravou 3-fenyl-5-hydroxy-2H-1,3-benzoxazin- 2,4(3H)-dionů, 3-fenyl-5-hydroxy-4-thioxo-2H-1,3-benzoxazin-2-onů a 3-fenyl-5-hydroxy-2H- 1,3-benzoxazin-2,4(3H)-dithionů jako cyklických analogů 2,6-dihydroxybenzanilidů. Výchozí 2,6-dihydroxybenzanilidy jsem syntetizovala reakcí 2,6-dihydroxybenzoové kyseliny a anilinu (nesubstituovaného, nebo substituovaného v poloze 4 chlorem, methylem, butylem a methoxyskupinou) v přítomnosti chloridu fosforitého prováděnou v mikrovlnném rektoru. Působením methyl-chlorformiátu jsem je převedla na 3-fenyl-5-hydroxy-2H-1,3- benzoxazin-2,4(3H)-diony ve výtěžku 77 - 94 %. 3-Fenyl-5-hydroxy-4-thioxo-2H-1,3- benzoxazin-2-ony a 3-fenyl-5-hydroxy-2H-1,3-benzoxazin-2,4(3H)-dithiony jsem získala thionací Lawessonovým činidlem ve výtěžku 31 - 42 % v případě monosirných a 24 - 33 % v případě disirných analogů. Struktura připravených látek byla potvrzena IČ a NMR spektry. Žádná z látek nevykazovala antimykotickou aktivitu (při testování proti Candida albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. glabrata, Trichosporon asahii, Trichophyton mentagrophytes, Aspergillus fumigates a Absidia corymbifera) ani antimykobakteriální aktivitu (proti M....
|
|
Změny ve složení a lokalizaci gangliosidů u cholestázy v návaznosti na markery signalizující patologické procesy v jaterních buňkách.
Petr, Tomáš ; Muchová, Lucie (vedoucí práce) ; Mičuda, Stanislav (oponent) ; Befekadu, Asfaw (oponent)
Předkládaná disertační práce je zaměřena na studium glykosfingolipidů v jaterní tkáni potkana u různých typů cholestatického onemocnění a vlivu oxidačního stresu na změny ve složení a lokalizaci gangliosidů. Nejprve byly optimalizovány metodické podmínky pro imunochemickou detekci GM1 gangliosidu (zástupce glykosfingolipidové rodiny). Zjistili jsme, že zcela klíčovým faktorem při fixaci histologických řezů je minimalizace obsahu vody ve fixačním činidle. Optimalizovanou metodiku jsme poté využili při in vivo experimentech. Na modelu cholestázy indukované estrogeny jsme prokázali, že působením vysoké koncentrace žlučových kyselin a oxidačního stresu dochází ke změnám v syntéze a distribuci gangliosidů v játrech. Pokud u experimentálních zvířat indukujeme antioxidační enzym hemoxygenázu a snížíme tak oxidační stres, dojde k posunu glykosfingolipidového spektra zpět ke kontrolním hodnotám. Analogickým experimentem na potkanech s mikrochirurgickým podvazem segmentálních jaterních žlučovodů jsme zjistili, že změny v lokalizaci a syntéze gangliosidů nejsou přísně specifické pro určitý typ cholestatického poškození, ale pravděpodobně se jedná o obecnější mechanismus hepatoprotekce. Rovněž jsme potvrdili významnou roli bilirubinu, vznikajícího z hemu účinkem hemoxygenázy, v ochraně hepatocytů před...
|
| |
|
Hmotnostně-spektrometrické zobrazování metforminu v řezech vybraných tkání
Strnad, Štěpán ; Sýkora, D. ; Vrkoslav, Vladimír ; Cvačka, Josef ; Maletínská, Lenka ; Pirník, Zdenko
Cílem této práce byla optimalizace postupu přípravy vzorku a následné hmotnostně spektrometrické zobrazení metforminu v tkáňových řezech ledvin. Byla nalezena vhodná matrice DHB, která poskytovala dostatečnou mez detekce, a zároveň nedocházelo k interferenci iontů analytu s matričními ionty. Tato matrice byla na řezy nanášena sublimací. Při MALDI MSI analýzách na reálných vzorcích myší, kterým byl perorálně podán metformin, bylo zjištěno, že v ledvinách byla nejvyšší relativní koncentrace metforminu ve vnitřní zóně dřeně 30 min po podání léčiva. Jednu hodinu po podání se již koncentrace metforminu začala snižovat. Pro potvrzení těchto výsledků bude tato studie dále rozšířena o kvantifikaci metforminu v ledvinách, která bude provedena analýzou homogenátů tkání ledvin pomocí LC-MS.
|
| |
| |
host ::
