|
Chirální separace acyklických nukleosid fosfonátů a stanovení asociačních konstant jejich komplexů s cyklodextriny kapilární elektroforézou
Mikysková, Hana ; Jelínek, Ivan (oponent) ; Coufal, Pavel (vedoucí práce)
Kapilární elektroforéza byla využita pro chirální separaci acyklických nukleosid fosfonátů, které patří mezi nejvýznamnější již používaná nebo potenciální antivirotická léčiva. Pro enantioseparaci acyklických nukleosid fosfonátů byly jako chirální selektory použity nativní a derivatizované cyklodextriny: -cyklodextrin, -cyklodextrin, -cyklodextrin, heptakis(2,6-dimethyl)--cyklodextrin, 2-hydroxypropyl--cyklodextrin a kvartérní amonium -cyklodextrin. Nejvyššího rozlišení (R,S)-enantiomerů acyklických nukleosid fosfonátů bylo dosaženo v základním elektrolytu obsahujícím 35 mM tetraboritan sodný (pH 10) s přídavkem 17,6 mM -cyklodextrinu nebo 10 mM kvartérního amonium -cyklodextrinu. Metodou kapilární elektroforézy byly stanoveny asociační konstanty komplexů enantiomerů acyklických nukleosid fosfonátů s výše uvedenými chirálními selektory cyklodextrinového typu. Asociační konstanty byly vypočítány nelineární regresní analýzou z experimentálně změřené závislosti efektivní pohyblivosti analytů na koncentraci chirálního selektoru v základním elektrolytu. Efektivní elektroforetické pohyblivosti acyklických nukleosid fosfonátů byly předem korigovány na referenční teplotu 25 řC. Předmětová slova: analytická chemie, separační metody, kapilární elektromigrační metody, acyklické nukleosid fosfonáty...
|
|
Stanovení cytokinů v supernatantu homogenátu jater u potkanů s jaterní steatózou
Burešová Nedvídková, Jaroslava ; Živný, Pavel (oponent) ; Dršata, Jaroslav (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Jaroslava Burešová Nedvídková Školitel: Doc. MUDr. Pavel Ţivný, CSc. Název diplomové práce: Stanovení cytokinů v supernatantu homogenátu jater u potkanů s jaterní steatózou Zaměřením této práce bylo stanovení cytokinů, a to IL-6, TNF-alfa a leptinu v supernatantu homogenátu jater u potkanů s jaterní steatózou. Tato vyšetření byla vykonána v rámci rozsáhlé experimentální práce orientované na schopnost jater regenerovat po indukci steatózy. Stanovení byla provedena pomocí enzymové imunoanalýzy na imunosorbentech. Výsledky byly porovnávány s koncentracemi cytokinů kontrolních skupin potkanů kmene Wistar a kmene PHHP, kteří byli krmeni standardní laboratorní dietou. U kontrolní skupiny potkanů kmene Wistar byly koncentrace IL-6, leptinu i TNF-alfa v supernatantu jaterní tkáně vyšší než u kontrolní skupiny potkanů kmene PHHP. Příjem steatogenních diet vedl spíše k poklesu IL-6 u všech souborů potkanů. U pokusné skupiny kmene Wistar byly koncentrace leptinu signifikantně nižší oproti kontrolám téhož kmene. U kmene PHHP podávání orotové kyseliny vedlo ke statisticky významnému zvýšení koncentrace leptinu. Přijímání diet vyvolávajících steatózu vedlo u obou kmenů potkanů k poklesu koncentrací TNF-alfa...
|
|
Analytické hodnocení léčiv s využitím chromatografických metod V
Raindlová, Martina ; Sochor, Jaroslav (oponent) ; Mokrý, Milan (vedoucí práce)
Souhrn Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Analytické hodnocení léčiv s využitím chromatografických metod V Diplomová práce Martina Raindlová V této práci byly vypracovány optimální podmínky pro HPLC analýzu risperidonu v tabletách. Součástí bylo nalezení vhodné mobilní fáze a vnitřního standardu, validace celé metody a její aplikace při stanovení obsahu léčiva u léčivého přípravku. Pro mobilní fázi byla použita směs ve složení : hydrogenfosforečnan amonný (0,1 mol/l ; pH 6,0 - upraveno přídavkem H3PO4 0,1 mol/l) : methanol 30:70 (v/v) při průtokové rychlosti 0,7 ml/min za použití kolony LiChroCART 250-4 s navázanou reverzní fází C 18 a průměrné velikosti částic 5μm. Detekce byla provedena pomocí UV detektoru při nastavené vlnové délce 280 nm. Jako vnitřní standard byl použit fenacetin. Validace metody byla ověřena pomocí linearity a přesnosti. Pro linearitu byla použita kalibrační křivka, která byla sestavena z výsledků pěti roztoků o vzrůstající koncentraci. Jejími parametry jsou rovnice : y = 4,38x + 0,191. Koeficient korelace se rovná 0,9998. Metoda je lineární v celém rozsahu pracovních koncentrací. Pomocí HPLC analýzy byl stanoven obsah risperidonu v tabletě. Deklarované množství v tabletách bylo 2 mg, skutečný obsah byl...
|
|
Stanovení propylgallátu pomocí uhlíkové pastové elektrody
Vysoká, Marie ; Fischer, Jan (oponent) ; Zima, Jiří (vedoucí práce)
Propylgallát (PG) je významný syntetický antioxidant a konzervant. K jeho stanovení na uhlíkové pastové elektrodě (CPE) byla použita metoda diferenční pulsní voltametrie (DPV) a vysokoúčinná kapalinová chromatografie s elektrochemickou detekcí (HPLC-ED) a HPLC s UV spektrometrickou detekcí (HPLC-UV). Metodou DPV v prostředí Brittonova- Robinsonova pufru (pH 5) a methanolu (20 %, V/V) byly proměřeny koncentrační závislosti a mez detekce stanovena na 0,6110-7 moldm-3 . Pomocí HPLC v mobilní fázi o složení 0,01 moldm-3 fosfátový pufr (pH 4) a methanol (50 %, V/V), s potenciálem pracovní elektrody E = +0,8 V a detekční vlnovou délkou λ = 280 nm byly proměřeny kalibrační závislosti a mez detekce stanovena na 0,39 moldm-3 pro HPLC-ED a 4,95 moldm-3 pro HPLC-UV. Následně byl PG po ověření extrakčního postupu stanoven ve vzorku rostlinného oleje. Zjištěná koncentrace odpovídá 3,2 mgkg-1 oleje a je v souladu s povolenými limity.
|
|
Vývoj a validace HPLC metody pro stanovení účinných látek a nečistoty v přípravku Valetol
Maroušková, Alena ; Sklenářová, Hana (oponent) ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce)
Tato práce navazuje na diplomovou práci (1) , ve které byly nalezeny optimální chromatografické podmínky pro stanovení účinných látek léčivého přípravku Valetol, paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu, a nečistoty p-aminofenolu, metodou HPLC. Součástí rigorózní práce bylo nalezení vhodného vnitřního standardu pro přesnou kvantifikaci účinných látek a nečistoty, kyseliny benzoové. Následně byla provedena validace analytické metody, včetně testu vhodnosti chromatografického systému. V rámci testu vhodnosti chromatografického systému byla testována: účinnost kolony vyjádřená počtem teoretických pater N asymetrie chromatografických píků vyjádřená faktorem T rozlišení chromatografických píků opakovatelnost vyjádřená relativní směrodatnou odchylkou V rámci validace analytické metody byla testována: přesnost linearita správnost selektivita robustnost stabilita Test robustnosti prokázal citlivost analýzy na změnu složení mobilní fáze. Byly testovány dva parametry mobilní fáze: pH a změna obsahu triethylaminu. Bylo dokázáno, že změna pH mobilní fáze má vliv především na retenční časy p-aminofenolu a kyseliny benzoové. Změna obsahu triethylaminu v mobilní fázi má výrazný vliv jak na retenční čas p-aminofenolu, tak na velikost plochy píku p-aminofenolu (na jeho kvantifikaci). Požadavek na...
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení vitaminu E v přípravku geladrink
Švestková, Petra ; Chocholouš, Petr (oponent) ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce)
Byla vyvinuta HPLC metoda pro stanovení obsahu vitaminu E acetátu v přípravku Geladrink Forte práškový nápoj - ananas. Metoda je založena na využití kolony Chromolith Performance RP-18e (100 x 4,6 mm) a UV detekce p_i 290 nm. Vitamin E acetát byl separován v přítomnosti tokolu jako vnitřního standardu od matrice přípravku. Byla využita izokratická eluce mobilní fází methanol:voda (98:2), pr_toková rychlost mobilní fáze byla 1,5 ml/min. Měření probíhalo p_i 30 řC. Systém umožnil úspěšnou separaci v čase pod 5 min. Retenční _as tokolu byl 2,337 min a vitaminu E acetátu 4,271 min. Rozlišení chromatografických píků tokolu a vitaminu E acetátu bylo 7,515. Metoda byla dále využita pro analýzu vitaminu E acetátu v přípravku Chondrotin - MSM 2600. Stanovené koncentrace vitaminu E acetátu byly přepočítány na obsah vitaminu E, který deklaruje výrobce. Klíčová slova: vitamin E acetát, HPLC, Geladrink, Chondrotin - MSM 2600
|
|
Vyhodnocení vlivu elektrolytů na CMC pomocí iontově-selektivní elektrody
Syrovátková, Jana ; Kubíček, Vladimír (vedoucí práce) ; Šnejdrová, Eva (oponent)
V rigorózní práci bylo použito iontově selektivní elektrody k měření CMC pěti kationických tenzidů a k vyhodnocení vlivu elektrolytů na hodnoty CMC těchto tenzidů. Byly využity komerčně dostupné katonické tenzidy: benzalkonium chlorid, benzethonium chlorid, cetyltrimethylamonium bromid, cetylpyridinium chlorid a carbethopendecinium bromid. V roli elektrolytu, který zvyšoval iontovou sílu roztoků, byl použit chlorid sodný. Byla vyhodnocena opakovatelnost stanovení CMC a provedena matematická korelace naměřených závislostí hodnot CMC na koncentraci (iontové síle) chloridu sodného.
|
|
Kultury léčivých rostlin in vitro - VII
Machačková, Jana ; Martin, Jan (oponent) ; Tůmová, Lenka (vedoucí práce)
Kultury léčivých rostlin in vitro - VII Elicitace je jednou z metod používaných ke zvýšení produkce nebo hromadění sekundárních metabolitů v explantátových kulturách. Jako kultura byla využita kalusová a suspenzní kultura Silybum marianum (L.) Gaertn. Jako abiotický elicitor byl využit derivát N- fenylpyrazin-2-karboxamid v koncentracích c1=1,159x10-3 mol/l, c2=1,159x10-4 mol/l a c3=1,159x10-5 mol/l. Vliv elicitoru na produkci (flavonolignanů silymarinového komplexu a flavonoidu taxifolinu) byl hodnocen vždy po 6, 12, 24, 48, 72 a 168h. Kultury byly kultivovány na médiu připraveného dle Murashigeho a Skooga s přídavkem 10 mg/l kys. α-naftyloctové (α-NAA). Pro stanovení obsahu byla zvolena metoda HPLC. Maximální zvýšení obsahu flavonolignanů způsobil elicitor o koncentraci c2=1,159x10-4 po 168h elicitace u kalusové kultury (0,08 %). Nejvyšší obsah silydianinu byl však zaznamenán po aplikaci elicitoru o koncentraci c1=1,159x10-3 (0,11 %) u suspenzní kultury. Maximální obsah flavonoidu taxifolinu byl detekován v roztocích živného média u suspenzních kultur.
|
|
Použití metodiky sekvenční extrakce pro zjištění speciace antimonu v kontaminovaných půdách
Tejnecký, Václav
Příbram, tradiční průmyslové a hutnické centrum, je za dobu svého hospodářského rozmachu znečištěna řadou kontaminantů, jedním z nich je i antimon. Antimon (Sb) je toxický polokov, jehož tolerovatelné koncentrace pro půdy jsou okolo 5 mg.kg-1 . V oblasti Příbrami však koncentrace Sb v půdě dosahuje až dvousetnásobek této hodnoty. Hlavním zdrojem Sb jsou emise z primární (zpracování Pb rudy) a sekundární (recyklace Pb akumulátorů) metalurgie olova ve Lhotě u Příbrami. Z důvodu vysokých koncentrací Sb je lokalita vhodná pro bližší zkoumání vazby a mobility Sb pomocí sekvenční extrakce (SEA). Byla použita modifikovaná SEA podle Wenzela et al. (2001) užívaná pro stanovení speciace As z důvodu předpokladu podobnosti chování As a Sb. Vzorky byly odebírány v prostředí lesní a zemědělské půdy ve vzdálenosti cca 1 km od hlavního zdroje kontaminace - hutního závodu. V zalesněné oblasti byly kromě jednotlivých půdních horizontů odebrány také vzorky opadu smrku (Picea abies), v místě odběru polní půdy byla také vzorkována kukuřice (Zea mays) s kořínky za účelem zjištění obsahu Sb v pletivech rostlin. Pro kontrolu pozaďových koncentrací Sb byly odebrány i vzorky podložních hornin. Výsledky celkových rozkladů prokázaly předpoklad, že tyto půdy budou značně kontaminovány Sb i As a to v maximálním případě až 1720...
|
|
Možnosti ovlivnění produkce sekundárních metabolitů u kultury Silybum marianum in vitro
Kunzová, Lucie ; Martin, Jan (oponent) ; Tůmová, Lenka (vedoucí práce)
Mgr. Lucie Kunzová Možnosti ovlivnění produkce sekundárních metabolitů u kultury Silybum marianum in vitro Elicitace je metoda využívající obranných mechanizmů rostlin ke zvýšení produkce sekundárních metabolitů v rostlinách i kulturách in vitro. V této práci byl sledován vliv 6, 12, 24, 48, 72 a 168 hod působení tří koncentrací abiotického elicitoru (3-jod-4-methylfenyl)amidu 5-methylpyrazin-2-karboxylové kyseliny na produkci flavonolignanů kalusovou a suspenzní kulturou Silybum marianum. Kultura byla kultivována na médiu podle Murashigeho a Skooga s přídavkem 10 mg/l kyseliny α-naftyloctové (α-NAA). Pro stanovení obsahu flavonolignanů v kalusové i suspenzní kultuře byla zvolena metoda HPLC. Maximální obsah flavonolignanů (0,03 %) v kalusové kultuře byl prokázán po 24 hod působení elicitoru o koncentraci c1 = 2,83 · 10-3 mol/l. Maximální obsah flavonolignanů (0,04 %) v suspenzní kultuře byl zjištěn po 48 hodinovém působení elicitoru o koncentraci c3 = 2,83 · 10-5 mol/l.
|
host ::
