|
|
Studium vybraných flavonoidů jako modulátorů cytochromu P450 3A4
Skotnicová, Aneta ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblihová, Jitka (oponent)
Flavonoidy jsou sekundární metabolity rostlin vykazující širokou škálu biologických aktivit. Velká pozornost jim je v nována hlavn pro jejich antioxida ní vlastnosti. Proto se v sou asné dob zvyšuje konzumace t chto p írodních látek p edevším ve form potravních dopl k . Navíc tyto slou eniny vykazují antivirové, protizán tlivé i hepatoprotektivní ú inky a n které z nich mají také mutagenní a/nebo prooxida ní vlastnosti. Mimo jiné jsou d ležité interakce flavonoid s biotransforma ními enzymy, nap . cytochromy P450, ímž mohou zasahovat do metabolismu lé iv nebo proces kancerogenese. V této bakalá ské práci byl studován vliv vybraných flavonoidních slou enin dihydromyricetinu a myricetinu na expresi a aktivitu cytochromu P450 3A4. Po premedikaci potkan t mito flavonoidy nebyla zjišt na indukce CYP3A4. Dihydromyricetin i myricetin však inhibují CYP3A4. Byla stanovena jejich koncentrace, p i které je dosaženo 50% maxima inhibi ního efektu, pro dihydromyricetin IC50 = 25 µM a pro myricetin IC50 = 24 µM. Klí ová slova: Imunodetekce, HPLC, inhibice, indukce
|
|
|
Molární poměr cytochromu b5 k jeho reduktasam ovlivňuje aktivitu cytochromu P450 1A1 vůči Sudanu I
Netolický, Jakub ; Martínek, Václav (vedoucí práce) ; Dračínská, Helena (oponent)
Cytochromy P450 jsou evolučně velmi starou skupinou enzymů, která zahrnuje celou řadu isoforem a její zástupce lze najít u živočichů, rostlin, hub, bakterií i některých virů. Patří mezi enzymy katalyzující první fázi biotransformace léčiv, polutantů a jiných xenobiotik. Právě z tohoto důvodu patří mezi jedny z nejvíce zkoumaných enzymů a je snahou zmapovat jeho účinky na xenobiotika a léky. Cytochrom P450 potřebuje pro svou funkci donory elektronů, mezi hlavní patří NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktasa a cytochrom b5. Alternativní reduktasou která v tomto procesu také participuje je NADH:cytochrom b5 oxidoreduktasa, který je schopná redukovat cytochrom b5. Všechny tyto tři enzymy nacházíme v membránách endoplasmatického retikula, kde spolu přirozeně interagují. Tato práce se zaměřuje na aktivitu lidského rekombinantního cytochromu P450 1A1 vůči karcinogennímu azobarvivu Sudan I, konkrétně mapuje tvorbu hlavních metabolitů v závislosti na vzájemném poměru cytochromu b5 k NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktase a také k NADH:cytochrom b5 oxidoreduktase. Klíčová slova: cytochrom P450 1A1, NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktasa, cytochrom b5, NADH:cytochrom b5 oxidoreduktasa, Sudan I, HPLC
|
|
|
Stanovení základních jakostních charakteristik vybraných vzorků kávy, zelené kávy a kávovin
Burianová, Žaneta
Diplomová práce byla rozdělena do dvou částí. První teoretická část se zabývá popisem surovin pro výrobu kávy a kávovin. Charakterizuje důležité obsahové látky v kávě jako je kyselina chlorogenové a kofein nebo inulin v kávových náhražkách a popisuje jejich účinky na lidský organismus. Druhá praktická část se zabývá stanovením celkových polyfenolyckých látek pomocí Folin-Ciocalteuova činidla v 9ti vybraných vzorcích pražené kávy, zelené kávy a směsi kávoviny s přídavkem instantní kávy. U těchto vzorků byl následně změřen obsah kofeinu a kyseliny chlorogenové pomocí HPLC s UV-VIS detektorem. Z naměřených hodnot vyplynulo, že nejvyšší obsah kyseliny chlorogenové byl u vzorků zelené kávy a to průměrně 200 mg/ 100 ml šálku kávy (7g). Kofein dosahoval nejvyššího množství u kávy pražené a to průměrně kolem 85 mg/100 ml kávy. Rovněž byla u vzorků provedena senzorická analýza, kde byl nejlepší celkový dojem zjištěn u vzorků pražené kávy. Nejhorší celkový dojem byl evidován u vzorku kávoviny s přídavkem instantní kávy.
|
|
|
Stanovení přírodních antioxidantů v ovocných džusech
Pelcová, Lucie
V závěrečné práci byl sledován obsah vybraných polyfenolů v následujících džusech: jablečný z koncentrátu, jablečný vyrobený přímým lisováním z jablek, pomerančový s dužinou, pomerančový bez dužiny, grepový z koncentrátu, dále džusy z červených hroznů, z granátového jablka a z fialové karotky. K měření byla požita metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie. Polyfenol s celkově nejvyšší hodnotou a zároveň nejvýznamnější polyfenol džusů z citrusového ovoce byl hesperidin. V jablečných džusech byl významný obsah kryptochlorogenové kyseliny a hyperosidu, v jablečném džusu vyrobeného přímým lisováním z jablek bylo také velké množství katechin. Epigallokatechin, epikatechin a gallová kyselina byly látkami s nejvyšší naměřenou hodnotou v džusu z granátového jablka. V džusu z hroznového vína byly nejvíce zastoupeny katechin, epikatechin a epigallokatechin. Kvantitativně nejvýznamnějšími látkami džusu z fialové karotky byly kávová a kryptochlorogenová kyselina.
|
|
|
Méně běžné metabolity hormonálních steroidů ve fyziologii a patofyziologii člověka.
Máčová, Ludmila
Méně běžné metabolity hormonálních steroidů ve fyziologii a patofyziologii člověka Není tomu dlouho, co byly méně běžné metabolity steroidů považovány za pouhé degradační produkty steroidního metabolismu. Až v posledních desetiletích se ukazuje, že se tyto látky, vyskytující se v lidském organismu v nanomolárních koncentracích, zapojují do regulace fyziologických pochodů v organismu, jako je např. regulace imunitní odpovědi, termoregulace, rozvoj onkologických onemocnění nebo účinky proti majoritním steroidům. Práce v úvodu podává přehled o dosud publikovaných poznatcích zabývající se méně běžnými metabolity steroidů. Vlastní experimentální část se opírá o dílčí studie, jejichž cíle byly voleny takovým způsobem, aby pomohly objasnit aspoň některé z chybějících mezičlánků ve složitém mechanismu účinků steroidních hormonů na lidský organismus. Vzhledem k nanomolárním koncentracím sledovaných steroidů bylo nutné použít velice citlivých a specifických metod jaké představují raioimunoanalýza (RIA), plynová chromatografie spojená s hmotnostní spektrometrií (GC-MS) a vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC). V případě metabolitů 16α-hydroxy- dehydroepiandrosteronu a 7-oxo-dehydroepiandrosteronu se podařilo vyvinout a statisticky zhodnotit dvě nové RIA metody, které pro svou rychlost, relativní...
|
|
|
Vývoj HPLC-FLD metody pro stanovení žlučových kyselin ve žluči myší
Kacerovská, Veronika ; Nesměrák, Karel (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent)
Cílem diplomové práce byl vývoj a optimalizace HPLC metody s fluorescenční detekcí pro stanovení vybraných žlučových kyselin v myší žluči. Bylo vybráno osm žlučových kyselin (cholová kyselina, glykocholová kyselina, deoxycholová kyselina, glykodeoxycholová kyselina, chenodeoxycholová kyselina, glykochenodeoxycholová kyselina, α-muricholová kyselina a λ-muricholová kyselina) pro které byla na základě literatury navržena a následně optimalizována HPLC metoda s fluorescenční detekcí pro jejich kvantifikaci v uvedeném biologickém materiálu. Vhodným derivatizačním činidlem pro označení žlučových kyselin je 1,2-benzo-3,4-dihydro-karbazol-9-ethyl-p-toluensulfonát. Pro všechny žlučové kyseliny byly změřeny kalibrační závislosti a stanoveny limity kvantifikace a limity detekce (v rozsahu 0,88-1,78 μmol dm -3 ). V biologickém vzorku se vypracovanou metodou podařilo identifikovat a následně stanovit pět žlučových kyselin (cholová kyselina, glykocholová kyselina, glykodeoxycholová kyselina, glykochenodeoxycholová kyselina a α-muricholová kyselina). Klíčová slova: žlučové kyseliny, HPLC, fluorescenční detekce, derivatizace žlučových kyselin, žluč
|
|
|
Sulfobutylether-β-cyklodextrin jako chirální selektor pro separace aminokyselin a dipeptidů v HPLC
Procházková, Hana ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Vozka, Jiří (oponent)
Předkládaná diplomová práce je zaměřena na přípravu nové chirální stacionární fáze (CSF) dynamickým "coatingem" sulfobutylether-β-cyklodextrinu (SBE-β-CD) na iontově výměnnou stacionární fázi (SF) a otestování separačních schopností, selektivity a stability této CSF. Pro zjištění těchto parametrů byly použity achirální a chirální sady analytů. Dalším testovaným separačním systémem bylo použití C18 SF s přídavkem SBE-β-CD jako chirálního selektoru (CS) do mobilní fáze (MF). Sada testovacích chirálních analytů obsahovala aminokyseliny fenylalanin, tyrosin, tryptofan, jejich deriváty a dipeptidy glycyl-DL-tryptofan a glycyl-DL- fenylalanin. Pro studium selektivity pomocí achirálních analytů byly vybrány čtyři sady blokovaných a neblokovaných dipeptidů. Dipeptidy ve směsi byly tvořeny stejnými aminokyselinami, avšak s obráceným pořadím. Směs byla tvořena dvěma dipeptidy, např. H-alanylfenylalanin-OH/H-fenylalanylalanin-OH. Pro analýzu byl použit reverzní mód vysokoúčinné kapalinové chromatografie (RP-HPLC) a hydrofilní interakční kapalinová chromatografie (HILIC). Mobilní fáze byly tvořeny: (i) MeOH/deionizovaná voda, (ii) MeOH/kyselina mravenčí (pH 2,10), (iii) MeOH/20mM octan amonný (pH 4,70) a (iv) MeOH/10mM octan amonný (pH 8,80) v různých objemových poměrech. Připravená SBE-β-CD CSF byla vhodnější...
|
|
|
Stanovení steviových glykosidů metodou HPLC
Hollá, Marcela ; Drastík, Martin (vedoucí práce) ; Kubíček, Vladimír (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikálnej chémie Kandidát: Marcela Hollá Vedúci diplomovej práce: Ing. Martin Drastík, Ph.D. Názov diplomovej práce: Stanovení steviových glykosidů metodou HPLC Vyvinuli a validovali sme metódu HPLC na súčasné stanovenie hlavných stéviových glykozidov stéviozidu a rebaudiozidu A v potravinových doplnkoch. Separácia prebieha v móde hydrofilnej interakčenej chromatografie na kolóne s povrchovo poréznymi časticami. Metódu sme aplikovali na analýzu sladidiel s obsahom stéviových glykozidov Valosun, SlaDIA, Solia a na analýzu extraktu zo sušených listov stévie. Separácia prebiehala na kolóne Kinetex 2,6u HILIC 100Å (100×2,1 mm; 2,6 µm) Phenomenex, s izokratickou elúciou mobilnou fázou so zložením acetonitril/0,05 M pufor mravčanu amónneho okysleného kyselinou mravčou na pH=3, v pomere 90:10, rýchlosťou prietoku mobilnej fázy 0,7 ml/min, teplotou kolóny 30 řC, tlakom 19,8 MPa, UV detekciou pri 203 nm a objemom nástreku 1 µl. Výsledky analýz sme porovnali s obsahom stéviových glykozidov deklarovaným výrobcom. Vyninutá metóda umožňuje rýchlu analýzu potravinových doplnkov a rastlinných extraktov s obsahom stéviových glykozidov. Kľúčové slová: stéviové glykozidy, stéviozid, rebaudiozid A, Stevia rebaudiana Bertoni, vysokoúčinná...
|
|
|
Stanovení chlorfenolů ve vodách metodou HPLC
Kadlecová, Zuzana ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Tato bakalářská práce pojednává o problematice chlorfenolů ve vodách. Teoretická část shrnuje informace o jejich vlastnostech, toxicitě, původu a výskytu v životním prostředí. Dále je popsán osud chlorfenolů - bioakumulace, transformace a způsoby degradace v životním prostředí. Důraz je kladen na metody stanovení těchto látek ve vodných vzorcích, především metodou HPLC s předchozím zakoncentrováním extrakcí tuhou fází. Experimentální část se zaměřuje na separaci vybraných isomerů metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie v reversním módu. Byly stanoveny meze detekce těchto isomerů v optimalizovaných podmínkách. Nalezené podmínky byly aplikovány na analýzu vzorku vody odebraného v Ústí nad Labem.
|
|
|
Fytoextrakce metforminu a guanylmočoviny
Kovářová, Kristýna ; Smrček, Stanislav (vedoucí práce) ; Petrová, Šárka (oponent)
Farmaceuticky aktivní látky zahrnují také metformin, nejčastěji předepisované léčivo k léčbě diabetu mellitu 2. typu. Metformin je užíván ve vysokých denních dávkách (až 3000 mg/den) a je vylučován ledvinami v původní nemetabolizované formě. Metformin se degraduje až v čistírnách odpadních na guanylmočovinu. Čistírny odpadních vod nejsou zcela schopny vyčistit odpadní vodu a tak se metformin i guanylmočovina dostávají do životního prostředí, zejména do povrchových vod. V diplomové práci byla studována schopnost odstranění metforminu a jeho environmentálního metabolitu guanylmočoviny prostřednictvím fytoextrakčních technologií. Nejprve byla studována fytoextrakce metforminu pomocí 5 druhů rostlin - kukuřice seté, hrachu setého, ovsa obecného, plevuňky Reineckovy a staurogynu plazivého. V druhém experimentu byla studována fytoextrakce guanylmočoviny pomocí kukuřice seté a hrachu setého. Ve třetím experimentu byla studována fytoextrakce metforminu a guanylmočoviny najednou pomocí kukuřice seté. Media rostlin byla kontaminována metforminem nebo guanylmočovinou o různých koncentracích. Během jejich kultivace byly odebírány vzorky medií ve 24 - hodinových intervalech a v nich sledován pokles koncentrace xenobiotik pomocí HPLC s UV detekcí při 233 nm u metforminu a 210 nm u guanylmočoviny. Nejlepší...
|
host ::
RSS.