| |
|
Fyzikálně-chemická charakterizace peptidů a bílkovin kapilárními elektromigračními metodami
Kašička, Václav ; Koval, Dušan ; Šolínová, Veronika ; Sázelová, Petra ; Prusík, Zdeněk
Vysokoúčinné kapilární elektromigrační metody, zónová elektroforéza, izotachoforéza, izoelektrická fokusace, afinitní elektroforéza a elektrokinetická chromatografie, jsou prezentovány jako mocné nástroje pro fyzikálně chemickou charakterizaci peptidů a bílkovin.
|
| |
|
Syntéza asymetrických derivátů azaftalocyaninů a tvorba jejich komplexů s pyridinem
Žižkovská, Jana ; Zimčík, Petr (vedoucí práce) ; Miletín, Miroslav (oponent)
1. Souhrn Syntéza asymetrických derivátů azaftalocyaninů a tvorba jejich komplexů s pyridinem Mgr. Jana Žižkovská Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Univerzita Karlova v Praze Statistickou kondenzací ze dvou různých prekurzorů - 5,6-bis(diethylamino)pyrazin-2,3- dikarbonitrilu (A) a 5-diethylamino-6-[2-(4,4'-dimethoxytrifenylmethoxy)-ethylamino]pyrazin- 2,3-dikarbonitrilu (B) - jsem připravila směs šesti různých kongenerů (AAAA, AAAB, ABAB, AABB, ABBB, BBBB). Ze směsi byla separována pomocí sloupcové chromatografie pouze látka AAAB, která byla následně charakterizována za použití NMR, IČ, MS a UV-vis spekter. Poté jsem zaměnila prekurzor (B) za 5-diethylamino-6-[2-(4,4'- dimethoxytrifenylmethoxy)-ethylmethylamino]pyrazin-2,3-dikarbonitril a statistickou kondenzaci provedla stejným způsobem. Bohužel výsledný produkt AAAB nebyl příliš stabilní, proto jsem dále nepokračovala. V další části této práce jsem sledovala tvorbu proton-transfer komplexu AzaPc s dvěma molekulami pyridinu. K měření jsem použila 3 různé AzaPc s hydroxylovými skupinami na periferii. Toto měření vliv OH skupiny na změnu rychlostní konstanty neprokázalo. Dále jsem vybraný AzaPc - 2,3,9,10,16,17,23,24-oktakis(diethylamino)-1,4,8,11,15,18,22,25- (oktaaza)ftalocyanin - rozpustila v odlišném...
|
|
Sperm protein profiles of different mammalian species
Pohlová, Alžběta ; Zigo, Michal ; Jonáková, Věra ; Postlerová, Pavla
Proteins are a substantial equipment of the spermatic cell; therefore, the characterization of sperm proteins is crucial for explanation of molecular mechanisms in the reproduction process. We isolated sperm proteins from different mammalian species - pig, bull, human, mouse, dog and cat. Extracted proteins were separated by SDS-electrophoresis and protein/glycoprotein profiles from epididymal or ejaculated sperm were compared. Additionally, we tested cross-reactivity of antibodies prepared to sperm boar proteins on spermatozoa of other mammalian species using immunofluorescent technique. Our future plan is to compare the protein profiles of sperm during their functional development (epididymal, ejaculated, capacitated) in various mammalian species and identify species-specific sperm proteins with zona pellucida binding activity.
|
|
Role of Psb28 proteins in the biogenesis of the Photosystem II complex in the cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803
BEČKOVÁ, Martina
The thesis focuses on the role of Psb28 proteins, namely the Psb28-1 and its homolog Psb28-2, in the biogenesis of the Photosystem II complex (PSII) in the cyanobacterium Synechocystis PCC 6803. The aims of this work were to localize the proteins within the cells, and to determine their function. A fraction of both Psb28 proteins was identified in the monomeric PSII core complexes but most proteins were found in the unassembled protein fraction associated with thylakoid membranes. Psb28-1 was mostly detected as a dimer while Psb28-2 as a monomer. Psb28-1 also differed from Psb28-2 by its higher affinity to the PSII core complex lacking CP43 antenna. Characterization of Psb28-less mutants suggested regulatory function of the proteins in PSII biogenesis in connection with chlorophyll biosynthetic pathway. Analysis of preparations isolated using FLAG-tagged versions of Psb28 proteins showed their association with Photosystem II - Photosystem I supercomplexes, especially under increased irradiance, and supported a role of Photosystem I in the PSII biogenesis.
|
| |
| |
|
Biochemické motody jako nástroj pro studium proteinů v reprodukci
Postlerová, Pavla ; Zigo, Michal ; Pohlová, Alžběta ; Jonáková, Věra
Studium molekulárních mechanismů rerodukce je důležité pro pochopení tohoto děje. pro extrakci proteinů ze spermií využíváme různé přístupy a specializované kity, které izolují proteiny z různých částí a povrchu spermatické buňky. Proteiny z reprodukčních tekutin dělíme pomocí chromatografických metod. Charakterizaci a porovnání proteinů získaných odlišnými extrakčními metodami nebo proteinů různých savčích druhů a proteinů spermií, které jsou v rozdílných stádiích svého vývoje, provádíme pomocí SDS a 2D elektroforézy. Elektroforeticky separované proteiny přenesené na NC membránu využíváme pro detekci pomocí protilátek nebo k vazebnýcm studiím s biotinem značenými ligandy. Izolace proteinů z reprodukčních tkání a tekutin a jejich detekce pomocí protilátek je nezbytná pro určení původu proteinů reprodukčního traktu. Lokalizace proteinů na povrchu a uvnitř spermatických buněk a v sekreční tkáni reprodukčních orgánů studujeme pomocé imunofluorescenční mikroskopie. Cílená izolace určitých proteinů spermatické buňky, jejich lokalizace na spermiích nebo v tekutinách a tkáních reprodukčního traktu slouží jako nepostradatelné nástroje pro studium molekulárních mechanismů reprodukčního procesu.
|
|
Possible role of spermatogenic protein glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDHS) in mammalian sperm
Margaryan, Hasmik ; Dorosh, Andriy ; Čapková, Jana ; Postlerová, Pavla ; Philimonenko, Anatoly ; Hozák, Pavel ; Pěknicová, Jana
Sperm proteins are important for the structure and function of these specific, highly differentiated cells. Certain of these proteins play a role in sperm-egg recognition during primary or secondary binding at zona pellucida glycoprotein matrix. The aim of this study was to characterize the acrosomal sperm protein recognized by a monoclonal antibody (MoAb) Hs-8, prepared in our laboratory by immunization of BALB/c mice with human ejaculated sperm, and to test the possible role of this protein in gamete interaction. MoAb Hs-8 specifically labelled a 45 kDa protein from the sperm extract in the immunoblotting test. Sequence analysis identified this Hs-8 protein as GAPDHS. In order to perform a control tests, a commercial mouse anti-GAPDHS MoAb was applied. Both antibodies showed similar staining patterns using immunofluorescence labelling, transmission electron microscopy and immunoblot analysis. Moreover, both Hs-8 and commercial anti-GAPDHS antibodies blocked the secondary sperm-zona pellucida binding. Generally, GAPDHS was considered mainly as sperm-specific glycolytic enzyme involved in energy production during spermatogenesis and sperm motility and its role in the sperm head was unknown. In this study, we confirmed the potential additional role of GAPDHS as a binding protein that is involved in the sperm-zona pellucida interaction.
|
host ::
