|
|
Replikační bloky viru Rousova sarkomu v savčích buňkách
Koslová, Anna ; Hejnar, Jiří (vedoucí práce) ; Ruml, Tomáš (oponent) ; Weber, Jan (oponent)
Jedním z důležitých úkolů virologie i imunologie je odhalit mezidruhové a buněčné bariéry bránící horizontálnímu přenosu virů a určit, jakým způsobem mohou viry překonat tyto překážky a adaptovat se na jiný živočišný druh. Tato práce je založena na dobře zavedeném retrovirovém modelu - ptačím viru Rousova sarkomu (RSV) a zkoumá, jakým způsobem je blokována replikace tohoto viru v savčích buňkách. Vstup viru do buňky je zprostředkován vazbou virového obalového glykoproteinu (Env) na specifický buněčný receptor. Ačkoliv savčí orthology popsaných ptačích receptorů neumožňují vstup RSV do buňky, u některých kmenů RSV byl pozorován tropismus pro savčí buňky a byly popsány různé savčí linie transformované RSV. Analýza proviru H20-RSV v jedné z těchto linií (křeččí nádorová linie H-20) odhalila několik mutací včetně dvou zásadních aminokyselinových záměn v rozdílných částech Env. Záměny D32G a L378S umožnily virový přenos na křeččí, lidské i kuřecí buňky postrádající příslušný receptor. Pozměněná konformace Env H20-RSV byla podobná jako v případě aktivovaného stavu Env po interakci s receptorem. Toto pozorování ukazuje, že viry mohou infikovat buňky i nezávisle na původním receptoru díky spontánní aktivaci Env, pro kterou je dostatečná záměna jedné aminokyseliny. Ačkoliv je v některých případech RSV...
|
|
|
Protease Inhibitors as a Research Tool: Design, Synthesis and Evaluation of HIV PR and GCPII Inhibitors
Schimer, Jiří ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Obšil, Tomáš (oponent) ; Ruml, Tomáš (oponent)
Hlavním cílem teto práce je příprava inhibitorů jako nástroje pro studium a potenciální zásah do procesů regulovaných proteasami. V této práci jsem se zaměřil na dvě významné proteasy: HIV protreasu (HIV PR), která hraje nepostradatelnou roli během dozrávaní virových částic, a glutamátkarboxypeptidasu II (GCPII), důležitý marker rakoviny nádorů prostaty. Racionální návrh inhibitorů medicínsky významných enzymů slouží hned dvěma účelům: za prvé, jak se ukázalo, jsou inhibitory účinnými virostatiky (HIV proteasa je pravděpodobně vůbec nejlepším příkladem úspěšného vývoje léčiv pomocí racionálního návrhu) a za druhé, - v kontextu této disertační práce pravděpodobně i důležitěji - inhibitory mohou sloužit též jako nástroje pro rozšifrování základních biologických otázek týkajících se regulace, načasování a časoprostorové kontroly takových zásadních procesů, jako je maturace virových částic či vznik rakovinových buněk. Proteasa viru lidské imunitní nedostatečnosti Virus lidské imunitní nedostatečnosti (HIV) způsobující AIDS zabil v průběhu posledních čtyř desetiletí vice než 40 milionů lidí, z čehož 1,5 milionu zemřelo jen v minulém roce. Nakažených pacientů je v současné chvíli více než 35 milionů a toto číslo se stále zvyšuje, zejména v méně rozvinutých zemích sub-saharské Afriky. Především kvůli...
|
|
|
Modulation of HIV-1 Protease Activity
Pokorná, Jana ; Konvalinka, Jan (vedoucí práce) ; Šedo, Aleksi (oponent) ; Ruml, Tomáš (oponent)
HIV-1 proteasa hraje zásadní roli v pozdní fázi životního cyklu HIV viru, kdy štěpí virové polyproteinové prekursory na strukturní a funkční proteiny. Pokud je účinně inhibována, HIV partikule zůstávají nezralé a neinfekční. Použití vysoce účinné antiretrovirové léčby (HAART) zahrnující proteasové inhibitory může snížit hladinu HIV-1 v plasmě pacientů pod detekční limit, a tak velmi významně zlepšit prognózu jejich onemocnění. Použití prvních inhibitorů bylo poznamenáno vážnými vedlejšími účinky, nízkou biologickou dostupností, nutnými vysokými dávkami léčiv a především rychlým rozvojem virové rezistence pod selekčním tlakem léčiv. Ve snaze překonat tyto komplikace byla vyvinuta druhá generace inhibitorů. Navzdory nespornému zlepšení, které přinesly do antiretrovirové léčby, je další vývoj nových velmi účinných HIV-1 proteasových inhibitorů s optimálními farmakokinetickými vlastnostmi, vysokou metabolickou stabilitou, minimalizovanými vedlejšími účinky a především s příznivým rezistenčním profilem vysoce žádoucí. V předkládané disertační práci je uveden přehled léků k léčbě HIV spolu s vývojem substituovaných metallakarboranů, nové třídy účinných, neobvyklých, nepeptidických inhibitorů HIV proteasy s terapeutickým potenciálem. Dále je analyzován vliv substitucí v protease na vývoj rezistence vůči...
|
|
|
Improvement of retroviral vectors for efficient gene transfer
Šenigl, Filip ; Hejnar, Jiří (vedoucí práce) ; Šmahel, Michal (oponent) ; Ruml, Tomáš (oponent)
Souhrnvýsledků Retrovirovévektory, kteréjsou sďropnéefektivně přenášetgenetickou informaci do cilových buněk a integrovď se do jejich DNd jsou velice užitečrrépro mnoho experimentri ďe poúý stabitnípřenos geirůještěnemuslbý dostačující.V expresi přenesenýchgenůhrají významnou roli takéepigenetickémodifikace. Exprese mužebý přerrršenajiž v momantě integrace DNA vektoru nebo můžedochrázetkpostupnémuvypinaní kopii vektoru během ďouhodobých experimentů.Rebovirové vektory se mohou ve stabilitě exprcse výzrramně lišit ďe posfupnémutranskripčnímuumlčováni poďéhají všechny. Proto je zapotřebí mďifikovat retovirové vektory za účelemstabilizace jejich exprese v ciloých buňkóch. stabi|ní expreseje důIeátrizejmerravoblasti genovéterapie,kde je opakovrini bansdukce častonemožnénebove|mi komplikované. Retrovirovévektory odvozenéod ASLV jsou v savčíchbuňkách velmi účinně umlčovárry.Testova|ijsme moŽnoststabilizovatexpresi těchto vektorůinzerci vnitřního elementuCpG ostrovu (IE). cpc ostrovyjsou aliímésvou schopnostiudržovatpřilehlé promotorytranskripčněaktivní'Konstruova|ijsme vnitřní elementCpG' ostrovagenu pro adenosinfosforibosyltransferrázuo déIcel20bp' Tentoe|ementbyl vloŽenv sensei antisense orientacido tříruznýchm|stuvnitř LTR (nazačátekoblastiU3, mezi enhancerya pÍomotora na začátekoblasti U5)' Týo vektory...
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.