|
| |
|
| |
|
|
Studium nových lipidovaných analogů peptidu uvolňujícího prolaktin in vitro
Šatrová, Lucie ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Tichá, Anežka (oponent)
Bakalářská práce se zabývá neuropeptidy ovlivňujícími příjem potravy anorexigenním účinkem (snižujícím příjem potravy), které jsou potenciálními Mezi tyto neuropeptidy se řadí peptid uvolňující prolaktin (PrRP), který se váže s itou ke svému receptoru GPR10, a také k afinitou jen o řád nižší než laboratoři RNDr. Lenky Maletínské, CSc. byly navrženy a syntetizovány nové lipidované analogy PrRP, které mají podobnou afini receptorům GPR10 i NPFF2 přirozený PrRP a snižují příjem potravy po periferním podání. Na základě skutečnosti, že GPR10 má vysoko jedním receptorem označovaným jako Y1 a receptor Y1 je homologický s dalšími íněných peptidů Y2 a Y5, byla této bakalářské práci stanovena afinita přirozeného a jeho dvou palmitovaných analogů k receptorům Na buňkách U2OS s transfekovanými pomocí saturačních vazeb . Ty sloužily k výpočtu kompetitivních vazebných experimentech, kde přirozený a jeho dva palmitoylované měly velmi nízkou buňkám U2OS s transfekovanými receptory Y1 nebo Y2. Na druhé straně přirozený PrRP vázal buňkám transfekovaným receptorem řádu 10 a jeho palmitoylované analogy s až stokrát nižší Součástí bakalářské práce byla i optimaliz a přítomnosti inhibitorů proteáz stanovení K buněčn sfekovaným NPFF2 Stanovená K řádu 10 mol/l podobná hodnotám pro přirozené ligandy receptorů Zkoumání vazby...
|
|
|
Charakterizace molekulárních komponent kanabinoidní signalizace
Hájková, Alena ; Blahoš, Jaroslav (vedoucí práce) ; Vyklický, Ladislav (oponent) ; Maletínská, Lenka (oponent)
Kanabinoidní receptor 1 (CB1R), hlavní mediátor endokanabinoidní signalizace v mozku, patří do rozsáhlé skupiny receptorů spřažených s G-proteiny. CB1R se vyskytuje v neuronech, především presynapticky, kde moduluje synaptickou plasticitu. Detailní pochopení molekulárního mechanismu synaptické neurotransmise je klíčové pro odhalení příčin mozkových dysfunkcí a k vývoji nových terapeutických přístupů. Molekulární interakce CB1R jsou zkoumány především v souvislosti s poruchami příjmu potravy (obezita, anorexie), drogovou závislostí, vnímáním bolesti, nespavostí a některými psychickými onemocněními. Tato práce odhaluje nového interakčního partnera CB1R, kterým je protein Src homology 3- domain growth factor receptor-bound 2-like (endophilin) interacting protein 1 (SGIP1). Jedná se o intracelulární protein lokalizovaný, stejně jako CB1R, převážně v axonálních zakončeních, kde je zapojen do procesu klathrinové endocytózy. U myší je jeho zvýšená exprese spojována s disregulací energetické rovnováhy a vývojem obezity. Výsledky práce prokazují vliv přítomnosti SGIP1 na signalizaci CB1R prostřednictvím ERK1/2, zatímco G-proteinová signalizace zůstává nezměněna. SGIP1 brání internalizaci CB1R z buněčného povrchu a prodlužuje jeho interakci s β-arrestinem2. Zároveň se nám podařilo prokázat in vivo...
|
|
|
Nové analogy anorexigenních neuropeptidů ovlivňujících příjem potravy
Pražienková, Veronika ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Novotný, Jiří (oponent) ; Skálová, Lenka (oponent)
Disertační práce je zaměřena na studium anorexigenních neuropeptidů, peptidu kokainem a amfetaminem regulovaného transkriptu (CART) a peptidu uvolňujícího prolaktin (PrRP), které snižují příjem potravy a tělesnou hmotnost. Peptid CART je anorexigenní neuropeptid, u kterého přes všechny snahy nebyl nalezen jeho receptor. Peptid CART se specificky váže se na buněčnou linii PC12. Buňky PC12 diferencované v neuronový fenotyp vykazují vyšší počet vazebných míst oproti nediferencovaným buňkám. Buňky PC12 diferencované dexametasonem na chromafinní buňky vykazují vysokou nespecifickou vazbu a tím velmi nízký počet vazebných míst. Pro objasnění důležitosti disulfidových můstků ve struktuře peptidu CART byly syntetizovány analogy s jedním či dvěma disulfidovými můstky. Biologická aktivita byla u analogu se dvěma disulfidovými můstky v pozici 74-94 a 88-101. Při zkoumání buněčné signalizace u buněk PC12 peptid CART významně zvýšil aktivaci c-Jun a fosforylaci JNK, která předchází dráze c-Jun. PrRP patří do rodiny RF-amidových peptidů a byl u něj potvrzen anorexigenní účinek. PrRP se váže na svůj receptor GPR10 a vykazuje vysokou afinitu i k receptoru pro neuropeptid FF (NPFF2). V naší laboratoři byly navrženy lipidované analogy PrRP, které po periferním podání snižují příjem potravy, a u kterých je...
|
|
|
Impact of different types of antidiabetic interventions on the development of neurodegenerative changes in brains of diabetic mice and rats
Popelová, Andrea ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Mareš, Pavel (oponent) ; Hölscher, Christian (oponent)
Alzheimerova nemoc (AN) je neurologické onemocnění způsobené dvěma patologickými znaky; extracelulárními plaky amyloidního beta peptidu a intracelulárními neurofibrilárními shluky tvořených hyperfosforylovaným proteinem Tau. Jelikož diabetes mellitus druhého typu (DM2T) je rizikovým faktorem pro rozvoj AN, byl v první části mé disertační práce zkoumán možný vztah mezi hyperfosforylací proteinu Tau a centrální inzulínovou rezistencí, a to v hipokampech fa/fa potkanů a MSG myší, zvířecích modelů pre-diabetu, který je vyvolán obezitou. U 8 měsíců starých fa/fa potkanů a 6 měsíců starých MSG myší docházelo ke snížené fosforylaci inzulínové signalizační kaskády, která vedla ke zvýšené aktivaci glykogensynthasy kinázy-3Beta (GSK-3β), což je hlavní kináza způsobující hyperfosforylaci proteinu Tau. Následně byla pozorována zvýšená fosforylace proteinu Tau na Ser396 a Thr231. Tento jev nebyl pozorován u 2 měsíců starých MSG myší. Druhá část mé práce byla zaměřena na nové analogy potenciálně neuroprotektivního anorexigenního neuropeptidu, peptidu uvolňujícího prolaktin (PrRP), které byly navrženy na ÚOCHB AV ČR. Palmitoylace umožnila přechod PrRP přes hematoencefalickou bariéru, čímž byl umožněn jeho centrální anorexigenní účinek. Ve třetí části byl zkoumán vliv 14denního subkutánního (SC) podávání...
|
|
|
Vliv stabilních agonistů a antagonistů ghrelinového receptoru na regulaci příjmu potravy
Holubová, Martina ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Kopecký, Jan (oponent) ; Sobotka, Luboš (oponent)
Dizertační práce se zabývá vlivem agonistů a antagonistů ghrelinového receptoru (GHS-R1a) na regulaci příjmu potravy. Ghrelin je doposud jediný známý periferní orexigenní hormon a jediný acylovaný hormon. Agonisté GHS-R1a by mohli být využiti k léčbě kachexie, antagonisté GHS-R1a by mohli sloužit k léčbě obezity. V první části dizertační práce byli charakterizováni nově navržení peptidoví agonisté GHS-R1a. Agonisté byli stabilizováni náhradou Ser3 s esterově vázaným oktanoylem za kyselinu diaminopropionovou, k níž je mastná kyselina vázána stabilní amidovou vazbou, a dále začleněním dalších nekódových aminokyselin. Analogy ghrelinu byly modifikovány záměnou oktanoylu za jiné mastné kyseliny, začleněním druhé mastné kyseliny či zkrácením peptidového řetězce. Většina agonistů GHS-R1a se s vysokou afinitou (Ki = 10-9 -10-10 nM) vázala k receptoru GHS-R1a, aktivovala signalizační dráhy ghrelinu a po podkožním (SC) podání myším signifikantně a dlouhodobě zvyšovala příjem potravy. Ve druhé části dizertační práce byly testovány akutní a dlouhodobé účinky pseudopeptidového agonisty GHS-R1a JMV1843. Jednorázové SC podání JMV1843 sytým myším C57BL/6 vedlo k dávkově závislému zvýšení příjmu potravy (ED50 = 1.94 mg/kg). Při inkubaci v krevním séru in vitro byl JMV1843 stabilní po dobu 24 hod. 10-denní SC...
|
|
|
Charakterizace analogů peptidu CART v testech in vitro a in vivo
Nagelová, Veronika ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Vybíral, Stanislav (oponent)
Peptid CART (cocaine- and amphetamine- regulated transcript) je neuropeptid nacházející se především v hypothalamu, který snižuje příjem potravy (anorexigenní peptid). Přes všechny snahy u něj ještě nebyl nalezen receptor a neví se jeho přesné působení. Vyskytuje se ve dvou přirozených formách CART(55-102) a CART(61-102). Peptid CART je schopen vázat se na feochromocytomální buněčnou linii PC12. Buňky PC12 diferencované v neurální fenotyp pomocí NGF (nerve growth factor) vykazovaly vyšší počet vazebných míst (11250 ± 2520 vazebných míst/buňka) oproti nediferencovaným buňkám (3600 ± 570 vazebných míst/buňka). Buňky PC12 diferencované dexametasonem na chromafinní buňky vykazovaly vysokou nespecifickou vazbu a tím nestanovitelný počet vazebných míst. Peptid CART ve své struktuře obsahuje tři disulfidové můstky. Pro objasnění důležitosti disulfidových můstků pro zachování biologické aktivity, byly syntetizovány analogy s jedním (analog 3, 4 a 5) či dvěma (2, 6, 7 a 8) disulfidovými můstky a analog 1 peptidu CART(61-102), který měl methionin v pozici 67 vyměněn za norleucin. Lze konstatovat nezměněnou biologickou aktivitu u analogu 1 a dále u analogu 7 s disulfidovými můstky v pozici 74-94 a 88-101. Při zkoumání buněčné signalizace u buněk PC12 jsme testovali, zda-li dochází k aktivaci c-Fos, c-Jun,...
|
|
| |
|
|
Nové farmakologické intervence ovlivňující příjem potravy se zaměřením na anorexigenní neuropeptidy: peptid CART (cocaine-and amphetamine-regulated transcript) a peptid uvolňující prolaktin (PrRP)
Maixnerová, Jana ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Zorad, Štefan (oponent) ; Skálová, Lenka (oponent)
Disertační práce je zaměřena na charakterizaci biologické aktivity dvou nedávno objevených anorexigenních neuropeptidů: peptidu CART (cocaine- and amphetamineregulated transcript) a peptidu uvolňujícího prolaktin (PrRP). Strukturně-aktivitní studie fragmentů reprezentujících různé části CART(61-102) charakterizovala jak jejich vazbu k feochromocytomálním buňkám PC12, tak jejich schopnost ovlivnit příjem potravy. Výsledky ukázaly, že pro uchování biologické aktivity peptidu CART je nezbytná kompaktní struktura obsahující disulfidické můstky. V druhé části práce byl prokázán synergistický účinek periferně podaného cholecystokininu (CCK) a centrálně podaného peptidu CART na příjem potravy u hladových myší. Anorexigenní účinek peptidu CART byl zvýšen podprahovou dávkou CCK, zatímco antagonista receptoru CCK1 účinek blokoval. Ve třetí části práce byl testován příjem potravy po simultánním podání orexigenního neuropeptidu Y s peptidem CART nebo CCK jak u štíhlých myší, tak u myší obézních po působení glutamátem sodným (MSG). U obézních MSG myší s lézemi v nucleu arcuatu bylo prokázáno, že anorexigenní účinek centrálně podaného peptidu CART zůstává zachován, zatímco periferně podaný CCK u těchto myší na příjem potravy nepůsobí z důvodu nefunkční signalizace leptinu. V závěrečné části byla ve třech...
|
host ::
RSS.