|
|
Porovnání in vitro metod pro studium cytotoxicity
Eliášová, Pavla ; Maixnerová, Jana (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Pavla Eliášová Školitel: RNDr. Jana Maixnerová, Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání in vitro metod pro studium cytotoxicity Lidé jsou vystaveni stále většímu počtu toxických látek z životního prostředí. Chemikálie narušující endokrinní systém (EDC) jsou širokou třídou molekul, u kterých se předpokládá, že způsobují nepříznivé účinky na endokrinní systém tím, že interferují se syntézou, transportem, degradací nebo působením endogenních ligandů. Jedním z cílů této práce bylo stanovení in vitro toxicity 17 vybraných endokrinních disruptorů na buněčné linii lidského hepatocelulárního karcinomu HepG2. Viabilita buněk byla stanovena pomocí kolorimetrické metody CellTiter96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, jejíž principem je redukce MTS na barevný produkt formazan pomocí mitochondrií v životaschopných buňkách. Cytotoxický potenciál látek byl vyjádřen pomocí toxikologického paramatru IC50, který byl měřen ve třech časových intervalech (6, 12 a 24 hodin). U 14 látek: Atrazin, DHEP, Bisphenol A, Carbofuran, 3-hydroxycarbofuran, Cypermethrin, DDE, DES, MEHP, PCB 118, PCB 153, PFOA, PFOS, Propiconazol bylo stanoveno IC50 > 100 µM (resp. > 250 µM), což znamená, že tyto látky jsou netoxické...
|
|
|
Stanovení ledvinné toxicity antineoplastik in vitro.
Zádrapová, Marie ; Maixnerová, Jana (vedoucí práce) ; Smutná, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Bc. Marie Zádrapová Školitel: RNDr. Jana Maixnerová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení ledvinné toxicity antineoplastik in vitro BRAF inhibitory patří mezi důležitá antineoplastika. Fungují na principu specifické inhibice určitých proteinkináz a ukázaly se jako velmi účinné při léčbě melanomu. Jejich nevýhodou je však relativně brzký nástup rezistence; je proto důležité hledat nové kombinace již zavedených léčiv nebo pracovat na vývoji nových struktur s podobnou inhibiční účinností na melanomové buňky. Velmi slibným léčivem ze skupiny BRAF inhibitorů se ukázal být encorafenib a jeho kombinace s binimetinibem, nicméně jeho terapeutickou limitací může být potenciální renální toxicita. Tato práce se zaměřovala na stanovení in vitro cytotoxicity encorafenibu na různé typy ledvinných buněk ve třech časových intervalech a na jejím porovnání se dvěma lékovými standardy amfotericinem B a paracetamolem. K tomuto účelu byly využity tři druhy morfologicky a funkčně odlišných buněk ledvin (PODO/TERT256, HK-2 a HEK293). Cytotoxický potenciál byl měřen kolorimetrickou metodou CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, která je založená na redukci činidla MTS a podle míry redukce se...
|
|
| |
|
|
Study of substance transport via membrane transporters
Kučerová, Zuzana ; Smutná, Lucie (vedoucí práce) ; Maixnerová, Jana (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Zuzana Halamová Školiteľ: PharmDr. Lucie Smutná, PhD. Názov diplomovej práce: Štúdium transportu látok pomocou membránových transportérov Široké spektrum špecializovaných transportných proteínov exprimovaných najmä v proximálnom tubule obličiek zabezpečuje exkréciu endogénnych i exogénnych látok. Na bazolaterálnej membráne proximálneho tubulu obličiek je lokalizovaný OCT2 (organic cation transporter 2) transportér prenášajúci široké spektrum štruktúrne odlišných látok. Vzhľadom na širokú substrátovú špecifitu môže na úrovni tohto transportéru dochádzať k liekovým interakciám. V rámci tejto diplomovej práce bola zisťovaná akumulácia rádioaktívne značeného antivirotika [3 H]lamivudínu a modelového substrátu hOCT2 [3 H]MPP+ prostredníctvom akumulačných a transportných štúdii. Modelovými bunkovými líniami boli psie obličkové bunky MDCKII alebo ľudská bunková línia HeLa, ktoré stabilne alebo tranzientne exprimovali ľudský OCT2 transportér. K inhibičným štúdiam bolo využité antibakterálne chemoterapeutikum trimetoprim. Z výsledkov vyplýva, že akumulácia lamivudínu u buniek s OCT2 transportérom je v porovnaní s MPP+ veľmi nízka. Akumulačnými štúdiami sa tiež zistilo, že lamivudín má vyššiu afinitu k...
|
|
|
Stanovení toxicity pomocí buněčného modelu.
Fojkesová, Karolína ; Maixnerová, Jana (vedoucí práce) ; Bárta, Pavel (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Karolína Fojkesová Školitel: RNDr. Jana Maixnerová, Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení toxicity pomocí buněčného modelu V této práci bylo cílem změřit a zhodnotit in vitro cytotoxicitu 22 nově syntetizovaných látek s potenciálním využitím pro své antimykotické, antibakteriální a antimykobakteriální působení na standardní buněčnou linii HepG2. Látky byly syntetizovány na Katedře organické a bioorganické chemie Farmaceutické fakulty Univerzity Karlovy, a jedná se o mafenidové deriváty MAF, MAF-4, MAF-8, MAF-9, MAF-10, MAF-11, MAF-12, MAF-13, MAF-14, MAF-16, A-5-F, A-3,5-F2, A-3-Br-5-Cl, A-3,5-Cl2, A-3,5-Br2, A-5-Br, A-THIOF, A-SA, A- 3,5-I2, A-5-Cl, A-3-I-5-Cl, A-5-I. Cytotoxicita byla změřena pomocí kolorimetrické metody CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, tato metoda je založena na redukci MTS na barevný rozpustný produkt formazan a látky byly srovnávány a hodnoceny dle parametru IC50. U 9 látek, konkrétně MAF, MAF-8, MAF-11, MAF-12, MAF-16, A-5-F, A- 3,5-F2, A-SA, A-5-Cl, bylo IC50 větší než 500 µM, tedy tyto látky můžeme označit za netoxické u HepG2 linie. Dalších 9 látek dosáhlo IC50 mezi hodnotami 168,1 a 470,3 µM, jednalo se o tyto látky: A-3-I-5-Cl, A-3-Br-5-Cl,...
|
|
|
Stanovení potenciálního cytotoxického působení experimentálních látek in vitro.
Osinková, Barbora ; Maixnerová, Jana (vedoucí práce) ; Smutná, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Barbora Osinková Školitel: RNDr. Jana Maixnerová Ph.D. Název diplomové práce: Stanovení potenciálního cytotoxického působení experimentálních látek in vitro Předmětem této diplomové práce bylo vyhodnocení cytotoxického potenciálu nově syntetizovaných látek in vitro na buněčném modelu HepG2, což je buněčná linie získaná z lidského jaterního karcinomu. Testované látky byly syntetizovány v rámci Univerzity Karlovy na Katedře organické a bioorganické chemie Farmaceutické fakulty v Hradci Králové (GUAM, GUAM-NH2, THIOSEMIK, GUAM-2, GUAM-6, GUAM- 11, GUAM-12, GUAM-18, GUAM-19, GUAM-2-1, GUAM-6-3). Tyto látky jsou zkoumány pro předpokládané antimikrobiální působení vůči G+ bakteriím a houbám nebo pro schopnost inhibovat cholinesterázy. Pro in vitro stanovení cytotoxicity bylo využito komerční kolorimetrické metody CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, jejíž principem je měření metabolické aktivity buněk na základě redukce tetrazoliové soli MTS na barevný formazan. Pro stanovení počtu životaschopných buněk a vyhodnocení cytotoxického potenciálu zkoumaných látek na HepG2 buněčnou linii bylo využito střední inhibiční koncentrace IC50. Získané hodnoty byly následně porovnávány s...
|
|
|
Stanovení stechiometrie komplexů 7,8-dihydroxykumarinů s mědí
Mocová, Klára ; Mladěnka, Přemysl (vedoucí práce) ; Maixnerová, Jana (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Klára Mocová Konzultant: Doc. PharmDr. Přemysl Mladěnka, Ph.D. Název rigorózní práce: Stanovení stechiometrie komplexů 7,8-dihydroxykumarinů s mědí Měď je díky své přítomnosti v řadě enzymů důležitá pro správné fungování organismu. Její zvýšená hladina může ovšem zapříčinit různé zdravotní komplikace. Kumariny jsou látky přírodního nebo syntetického původu, jejichž společnou charakteristikou je základní 1,2-benzopyronový skelet. Jsou známé mimo jiné svou antioxidační aktivitou, mezi níž lze zařadit schopnost chelatovat kovy a tvořit s nimi komplexy. Stechiometrie komplexu je pak jeho důležitou charakteristikou. Cílem této in vitro studie bylo stanovit stechiometrii komplexů 7,8- dihydroxykumarinů s mědí. Zabývali jsme se chelatační aktivitou 7,8-dihydroxy-4- methylkumarinu a 7,8-dihydroxykumarinu s Cu+ a Cu2+ ionty. K měření byla použita přímá UV-Vis spektrofotometrie při čtyřech (pato)fyziologicky významných hodnotách pH (4,5; 5,5; 6,8 a 7,5). Oba testované kumariny chelatovaly Cu2+ ionty ve stejném stechiometrickém poměru (od 2:1 k 1:1) - a to pouze v prostředí třech nejvyšších hodnot pH. Cu2+ ionty při pH 4,5, ani Cu+ ionty v žádném z testovaných pH nebyly uvedené kumariny schopny...
|
|
|
Nové farmakologické intervence ovlivňující příjem potravy se zaměřením na anorexigenní neuropeptidy: peptid CART (cocaine-and amphetamine-regulated transcript) a peptid uvolňující prolaktin (PrRP)
Maixnerová, Jana ; Maletínská, Lenka (vedoucí práce) ; Zorad, Štefan (oponent) ; Skálová, Lenka (oponent)
Disertační práce je zaměřena na charakterizaci biologické aktivity dvou nedávno objevených anorexigenních neuropeptidů: peptidu CART (cocaine- and amphetamineregulated transcript) a peptidu uvolňujícího prolaktin (PrRP). Strukturně-aktivitní studie fragmentů reprezentujících různé části CART(61-102) charakterizovala jak jejich vazbu k feochromocytomálním buňkám PC12, tak jejich schopnost ovlivnit příjem potravy. Výsledky ukázaly, že pro uchování biologické aktivity peptidu CART je nezbytná kompaktní struktura obsahující disulfidické můstky. V druhé části práce byl prokázán synergistický účinek periferně podaného cholecystokininu (CCK) a centrálně podaného peptidu CART na příjem potravy u hladových myší. Anorexigenní účinek peptidu CART byl zvýšen podprahovou dávkou CCK, zatímco antagonista receptoru CCK1 účinek blokoval. Ve třetí části práce byl testován příjem potravy po simultánním podání orexigenního neuropeptidu Y s peptidem CART nebo CCK jak u štíhlých myší, tak u myší obézních po působení glutamátem sodným (MSG). U obézních MSG myší s lézemi v nucleu arcuatu bylo prokázáno, že anorexigenní účinek centrálně podaného peptidu CART zůstává zachován, zatímco periferně podaný CCK u těchto myší na příjem potravy nepůsobí z důvodu nefunkční signalizace leptinu. V závěrečné části byla ve třech...
|
|
|
Development of insecticides inhibiting acetylcholineseterase
Mányová, Brigita ; Vopršalová, Marie (vedoucí práce) ; Maixnerová, Jana (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakológie a toxikológie Študentka: Brigita Mányová Školiteľ: PharmDr. Marie Vopršalová, CSc. Školiteľ-špecialista: PharmDr. Vendula Hepnarová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Vývoj insekticídov inhibujúcich acetylcholínesterázu Škodný hmyz spôsobuje problémy a škody po celom svete. Sú vektormi závažných chorôb, ako napríklad malária, horúčka dengue, žltá zimnica, ochorenie spôsobené vírusom Zika a ochorenie chikungunya. Spôsobujú obrovské škody na poľnohospodárskych plodinách a znepríjemňujú každodenný život v obytných priestoroch. Cieľom tejto diplomovej práce bolo in vitro testovanie vybraných zlúčenín zo skupiny bis-isochinolíniových a bis-pyridíniových inhibítorov acetylcholínesterázy ako potenciálnych insekticídov. Ďalším cieľom bolo taktiež vytvoriť vzťahy medzi štruktúrou a účinkom. Hodnotila sa schopnosť týchto zlúčenín inhibovať ľudskú (hAChE), aj mušiu acetylcholínesterázu (MdAChE). Používala sa modifikovaná spektrofotometrická Ellmanova metóda. Získali sa hodnoty polovičnej inhibičnej koncentrácie (IC50) pre oba enzýmy a následne sa vypočítali indexy selektivity (SI). Za najnádejnejšie sa považovali zlúčeniny, ktoré mali IC50 v mikromolárnom, alebo nanomolárnom rozmedzí a vykazovali selektivitu voči MdAChE. Počas...
|
|
|
Příprava geneticky modifikované buněčné linie jakožto modelu pro akumulační studie
Rückelová, Alexandra ; Smutná, Lucie (vedoucí práce) ; Maixnerová, Jana (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakologie a toxikologie Studentka: Alexandra Rückelová Školitel: PharmDr. Lucie Hyršová, Ph.D. Název diplomové práce: Příprava geneticky modifikované buněčné linie jakožto modelu pro akumulační studie Námi studovaný transportér megalin patří do skupiny lipoproteinových receptorů, konkrétně se jedná o low density lipoprotein receptor-related protein 2 (LRP2). Jedná se o transportér, jež je schopný přenášet do buňky velké organické molekuly prostřednictvím receptorem zprostředkované endocytózy. Mezi jeho substráty patří celá řada peptidických látek včetně albuminu, hemoglobinu, vitaminů, hormonů a také aminoglykosidová antibiotika (gentamicin atd.), polymyxin B, kadmium a jiné látky. Tato diplomová práce se zaměřuje na vytvoření buněčných modelů pro studium transportu velkých organických molekul přes membrány buněk. Konkrétně se v této práci věnuji snižování exprese megalinu ve dvou modelových buněčných liniích pomocí siRNA proti LRP2 genu. Snížení exprese bylo stanoveno s využitím metody RT-PCR a následně ověřena funkčnost vytvořených modelů s využitím známého substrátu gentamicinu. Jedná se o aminoglykosidové antibiotikum s nefrotoxickým působením. Principem těchto ověřovacích experimentů bylo snížení toxického působení...
|
host ::
RSS.