|
|
Charakterizace nových chirálních separačních systémů pro použití v HPLC
Vozka, Jiří ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Sýkora, David (oponent) ; Petr, Jan (oponent)
Souhrn Dizertační práce je zaměřena na fyzikálně-chemickou charakterizaci interakčních mechanizmů chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů. Správná interpretace retenčních a enantiodiskriminačních interakcí usnadní vývoj, validaci a optimalizaci enantioselektivních metod využívajících tyto fáze. Nejdříve byly studovány interakční mechanizmy tří komerčně dostupných chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů v podmínkách normálního separačního módu kapalinové chromatografie. Jednalo se o stacionární fáze na bázi dimethylfenyl karbamátu cyklofruktanu 7, R-naftylethyl karbamátu cyklofruktanu 6 a izopropyl karbamátu cyklofruktanu 6. Jako výchozí přístup byl zvolen model lineárních vztahů volných energií. Na základě tohoto modelu byly jako hlavní interakce přispívající v různé míře k retenci ve všech separačních systémech s cyklofruktanovými stacionárními fázemi určeny: schopnost poskytovat vodík pro tvorbu vodíkové interakce a dipolarita/polarizibilita, disperzní interakce pak retenci v různé míře snižují. Pro objasnění vlivu sacharidového skeletu na chirální separace byly následně cyklofruktanové stacionární fáze porovnány s cyklodextrinovými analogy. Cyklofruktanové chirální stacionární fáze prokázaly v podmínkách normálního módu mimořádnou...
|
|
|
Liquid chromatography methods for analysis of microbial secondary metabolites of bioactive nature
Tylová, Tereza ; Olšovská, Jana (vedoucí práce) ; Cvačka, Josef (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
(CZ) Tato disertační práce je zaměřena na vývoj nových analytických metod sestávajících z extrakce tuhou fází (SPE) použité pro purifikaci a zkoncentrování analytů a jejich stanovení pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) s detektorem diodového pole (DAD) a/nebo hmotnostní detekcí za použití analyzátoru doby letu (ToFMS). Většina předkládaných výsledků byla publikována v prestižních mezinárodních časopisech. Součástí práce jsou také významná dosud nepublikovaná data. Kromě modelových srovnání různých typů kolonových materiálů pro ultra-vysokoúčinné separace představuje práce také významné aplikace vyvinutých metod. Zatímco první část práce je věnovaná stanovení antibiotik jakožto kontaminantů životního prostředí zodpovědných za vývoj a šíření bakteriální rezistence, druhá část se věnuje analýze a hledání biologicky aktivních sekundárních metabolitů z přírodních zdrojů, které mohou být v budoucnu využity jako nová antibiotika. První část disertační práce je zaměřena na stanovení reziduálních antibiotik v různých matricích (prasečí mrva, odpadní voda, povrchová voda). Jako analyty byla vybrána nejpoužívanější humánní a veterinární antibiotika. Metody sestávající z UHPLC-DAD a UHPLC-ToFMS a dále z SPE nebo extrakce kapalina-kapalina (LLE) byly validovány a pro kvantifikaci byly...
|
|
|
Využití moderních separačních a spektrometrických metod k identifikaci lipidomu z biologického vzorku
Havelková, Eva ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Sýkora, David (oponent)
Lipidomika je jedna z oblastí metabolomiky, která se v poslední době, díky rozvoji chemicko-analytických metod hlavně pak spektrometrických, těší velké pozornosti. Tato práce se věnuje testování extrakčních technik lipidů, optimalizaci preseparace lipidů a jejich chromatografie pro hmotnostní spektrometrii. Byly získány fragmentační vzory zástupců čtyř nejvíce zastoupených tříd glycerolipidů (PC, PE, TG, DG) v navrhovaném systému a srovnány s dostupnou literaturou. Pro extrakci byla určena jako vhodnější Folchova metoda využívající směs chloroformu a methanolu. Preseparační technika SPE napomáhá k identifikaci lipidů. Optimalizace této metody proběhla ve smyslu zvýšení její výtěžnosti a to zejména ve frakci polárních lipidů. HPLC metoda je založena na mobilních fázích methanolu s amonným pufrem, vodě a isopropanolu. Separace byla testována na třech kolonách založených na různých typech sorbentů (Gemini, Syncronis a Kinetex) a byla hodnocena z hlediska opakovatelnosti, tvaru a šířky peaků jednotlivých analytů. Jako nejlepší byla vybrána varianta, která využívala vmíchání 20% vody do systému. Kolona Kinetex se osvědčila jako nejlepší. Robustnost navržené metody a kolony byla testována na vzorcích rybího masa se zaměřením na detekci omega-3 nenasycených mastných kyselin. Hlavním výsledkem bylo zjištění, že...
|
|
|
Hmotnostně-spektrometrické zobrazování metforminu v řezech vybraných tkání
Strnad, Štěpán ; Sýkora, D. ; Vrkoslav, Vladimír ; Cvačka, Josef ; Maletínská, Lenka ; Pirník, Zdenko
Cílem této práce byla optimalizace postupu přípravy vzorku a následné hmotnostně spektrometrické zobrazení metforminu v tkáňových řezech ledvin. Byla nalezena vhodná matrice DHB, která poskytovala dostatečnou mez detekce, a zároveň nedocházelo k interferenci iontů analytu s matričními ionty. Tato matrice byla na řezy nanášena sublimací. Při MALDI MSI analýzách na reálných vzorcích myší, kterým byl perorálně podán metformin, bylo zjištěno, že v ledvinách byla nejvyšší relativní koncentrace metforminu ve vnitřní zóně dřeně 30 min po podání léčiva. Jednu hodinu po podání se již koncentrace metforminu začala snižovat. Pro potvrzení těchto výsledků bude tato studie dále rozšířena o kvantifikaci metforminu v ledvinách, která bude provedena analýzou homogenátů tkání ledvin pomocí LC-MS.
|
|
|
Výpočtové modelování aerodynamického hluku při obtékání tělesa
Sýkora, Daniel ; Hájek, Petr (oponent) ; Švancara, Pavel (vedoucí práce)
Diplomová práce se zabývá výpočtovým modelováním aerodynamického hluku při obtékání těles. V úvodní části diplomové práce je na vzorové úloze nasimulováno proudění kolem statického válce. Simulace jsou provedeny pro různé hustoty sítě a časový krok. Výsledky ze simulací jsou porovnány mezi sebou a bude demonstrována konvergence výsledků v závislosti na hustotě sítě. Další řešenou úlohou je výpočet aerodynamického hluku při obtékání kolem statického válce. Tato úloha je složitějšího charakteru, jelikož zde dochází k turbulentnímu proudění. Výpočet aerodynamického hluku je proveden na základě dvou přístupů, a to akustické analogie a přímé metody založené na stlačitelném proudění. V diplomové práci jsou dále uvedeny a demonstrovány vybrané modely turbulence a analyzován vliv na přesnost výpočtu aerodynamického hluku. Všechny poznatky z předchozích úloh jsou aplikovány a využity při výpočtu aerodynamického hluku při obtékání zjednodušeného modelu zpětného bočního zrcátka automobilu. Byl vytvořen rovinný (2D) a prostorový (3D) model a aerodynamický hluk je počítán pomocí Ffowcs Wiliams and Hawkings akustické analogie s DES modelem turbulence. V poslední části diplomové práce je analyzován vliv upravené geometrie zpětného bočního zrcátka na vyzařovaný hluk. Použití uchycení zrcátka vedlo k lepším aerodynamickým vlastnostem a menšímu výslednému aerodynamickému hluku.
|
|
|
Moderní metody ověření identity uživatelů
Sýkora, Daniel ; Stančík, Peter (oponent) ; Hajný, Jan (vedoucí práce)
Diplomová práce se zabývá moderními metodami autentizace uživatelů. V první části práce jsou stručně popsány protokoly, které se používají v současnosti a shrnuty jejich výhody a nevýhody. V teoretickém úvodu jsou pak rozebrány principy autentizace s nulovou znalostí, password-based protokoly a popsán návrh hašovací funkce nové generace. V praktické části jsou popsány konkrétní implementace autentizačních protokolů - Ohta-Okamoto protokol jako zástupce protokolů s nulovou znalostí a SRP (Secure Remote Password), který zastupuje password-based protokoly. V obou případech je popsán postup instalace, proveden rozbor jejich implementace na úrovni zdrojových kódů a ten následně porovnán s přenášenými daty zachycenými programem Wireshark. U protokolu SRP je provedeno ověření bezpečnosti nástrojem AVISPA. V závěru je u obou protokolů shrnuta bezpečnostní analýza.
|
|
| |
|
|
Open-tubular capillary electrochromatography with bare gold nanoparticles-based stationary phase applied to separation of trypsin digested proteins
Mikšík, Ivan ; Lacinová, Kateřina ; Zmatlíková, Zdeňka ; Sedláková, Pavla ; Král, V. ; Sýkora, D. ; Řezanka, P. ; Kašička, Václav
Open-tubular capillary electrochromatography (OT-CEC) using bare gold nanoparticles-based stationary phase has been applied to separation of tryptic peptide fragments of native and glycated proteins, bovine serum albumin and human transferrin. OT-CEC with bare gold nanoparticles stationary phase was found to be a suitable technique for separation of complex peptide mixtures originating from enzymatic (tryptic) digestion of native and glycated bovine serum albumin and human transferrin, and for glycation studies of these proteins.
|
|
|
Analysis of antimicrobial peptides by capillary electrophoresis
Ehala, Sille ; Niederhafner, Petr ; Čeřovský, Václav ; Řezanka, P. ; Sýkora, D. ; Král, V. ; Kašička, Václav
Capillary electrophoresis was used for the purity degree determination of new antimicrobial peptides: octadecapeptide melectin and tetradecapeptide mastoparan PDD-B, and their synthetic analogues. Besides, four semiempirical models correlating electrophoretic mobilities of these peptides with their charge and size (relative molecular mass) were applied to predict their probable structures in solution. Additionally, capillaries coated with gold nanoparticles were employed for the separation of mixtures of antimicrobial peptides.
|
|
| |
host ::
RSS.