|
|
Functional studies of selected members of the Arabidopsis formin family
Oulehlová, Denisa ; Cvrčková, Fatima (vedoucí práce) ; Binarová, Pavla (oponent) ; Černý, Jan (oponent)
Souhrn Forminy jsou multidoménové proteiny obsahující konzervovanou FH2 doménu (forminhomology 2 domain), která je schopna katalyzovat nukleaci aktinových filament de novo. Funkce forminu, stejne jako jejich regulace, byly podrobne studovány predevším u kvasinek a živocichu, zatímco mnohem méne je známo o rostlinných forminech, které se od kvasinkových i živocišných zástupcu znacne liší v doménovém usporádání. Forminy vyšších rostlin se delí do dvou skupin, trídy I a trídy II a experimentální údaje jsou doposud k dispozici pouze pro první skupinu. V této dizertaci predkládám výsledky z experimentální studie nekolika zástupcu velké rodiny forminu u Arabidopsis, vcetne charakterizace forminu AtFH16 z trídy II. Genom Arabidopsis obsahuje 21 genu kódujících forminy, a prestože se hladina a rozložení jejich exprese znacne liší, všechny jsou transkripcne aktivní. V celkem 14-ti forminových genech jsme získali 17 homozygotních mutantu s T-DNA inzercí. Za standartních kultivacních podmínek jsme nenašli zjevné odlišnosti ve fenotypech mutantu v porovnání s kontrolami. Abychom vyradili z funkce dva dominantní pylové forminy, pripravili jsme dvojitého mutanta atfh3atfh5, avšak i v tomto prípade se vývoj mikrospor a následné klícení a rust pylových lácek nezmenily. Stejne tak nedošlo k narušení polarizovaného rustu...
|
|
|
Farmakologicky aktivní účinné látky chmele
Pýchová, Kateřina ; Cvrčková, Fatima (vedoucí práce) ; Mašková, Petra (oponent)
Chmel otáčivý (Humulus lupulus) se využívá mimo pivovarnictví i ve fytofarmakologii a fytoterapii. Mezi látky, které se za účelem léčby izolují nebo i chemicky vyrábějí, patří xanthohumol, 8-prenylnaringenin a α a β-hořké kyseliny. Mnoho pozornosti se věnuje jejich účinkům na lidský organismus - v dnešní době hlavně protirakovinným účinkům -, ale málo se toho ví o jejich významu pro produkující rostlinu. Většina sekundárních metabolitů rostlin je produkována za účelem ochrany rostliny samé proti patogenům a herbivorům, tyto vybrané sekundární metabolity chmele nejsou výjimkou. Cílem této práce bylo shrnout publikované údaje o biologickém významu vybraných chmelových sekundárních metabolitů a jejich účincích na nerostlinné organismy, především člověka.
|
|
|
Analysis of WASH complex member strumpellin
Pácalt, Ondřej ; Libusová, Lenka (vedoucí práce) ; Cvrčková, Fatima (oponent)
Polymerizace aktinu zprostředkovaná komplexem Arp2/3 je zásadní pro řadu buněčných procesů, jako je například pohyb, endocytóza či recyklace nákladu. Lokalizace a vazba komplexu Arp2/3 je závislá na tzv. faktorech zahajujících nukleaci (NPF). WASH komplex je hlavním NPF na membráně endozómů a hraje zde zásadní roli v recyklaci nákladu zpět do trans-Golgi (TGN) nebo na plasmatickou membránu. WASH komplex se skládá z pěti podjednotek: WASH1, SWIP, FAM21, CCDC53 a strumpellinu. V minulosti byly studovány především podjednotky WASH1 a FAM21. Naopak o strumpellinu není mnoho známo, a to i přesto, že souvisí se vznikem dědičné spastické paraplegie (HSP). Tato práce se zaměřuje na roli strumpellinu v buňce. Ukazuje, že pro úspěšné začlenění strumpellinu do WASH komplexu jsou potřeba všechny jeho části. Pomocí buněčné linie zbavené strumpellinu jsme dále ukázali, že ztráta strumpellinu vede k destabilizaci ostatních podjednotek WASH komplexu. To však nebrání sestavování částečného WASH komplexu v nepřítomnosti strumpellinu. Delece strumpellinu také vedla ke zvětšení endozomálních subdomén a ke snížení aktivity WASH komplexu, pozorovatelné jako úbytek aktinových teček. V buňkách zbavených strumpellinu navíc docházelo k akumulaci glukózového přenašeče 1 (GLUT1) a transferinového receptoru (TfR) v oblasti...
|
|
|
Rostlinný tubulinový kód
Ničová, Klára ; Schwarzerová, Kateřina (vedoucí práce) ; Cvrčková, Fatima (oponent)
Mikrotubuly, které jsou tvořeny polymery α- a β-tubulinu, jsou základní složkou cytoskeletu. Oba typy tubulinů vykazují napříč eukaryotickými organismy značnou sekvenční homologii. Tubuliny jsou kódovány poměrně rozsáhlými genovými rodinami, obzvláště u mnohobuněčných organismů. Expresí těchto genů vznikají tubulinové izotypy, které mohou vykazovat odlišné vlastnosti. Jednotlivé izotypy mohou být dále posttranslačně modifikovány. Mezi nejznámější posttranslační modifikace tubulinu patří acetylace, fosforylace, tyrozinace, polyglutamylace a polyglycylace. Díky kombinaci exprese různých tubulinových izotypů a jejich různých posttranslačních modifikací vzniká v buňkách "směs" heterogenních tubulinů, které mohou vykazovat odlišné vlastnosti a vykonávat různé funkce. Tento jev nazýváme tubulinový kód. Ačkoliv byla existence tubulinového kódu prokázána u většiny modelových organismů včetně rostlin, pochopení přesného významu zabudování různých tubulinu do mikrotubulů je stále předmětem výzkumu. Velká část výzkumu tubulinového kódu byla provedena na živočišných modelech. Oproti tomu v rostlinách se toho o významu tubulinového kódu ví relativně málo. Tato práce shrnuje současné poznatky o výskytu a regulaci tubulinových izotypů a jejich posttranslačních modifikací v rostlinách.
|
|
|
Protein HSP90 a jeho funkce v rostlinné buňce
Machek, Petr ; Krtková, Jana (vedoucí práce) ; Cvrčková, Fatima (oponent)
Heat shock protein 90 (Hsp90) je chaperonový protein, který se účastní mnoha buněčných funkcí. V práci je stručně popsána jeho struktura, a jeho role v teplotním šoku. Dále je popsána úloha v imunitních reakcích, signalizaci v rostlinné buňce a jeho úloha v transportu některých proteinů. Klíčová slova: Hsp90, rostlinná buňka, rostlinná imunita, stres
|
|
| |
|
|
Analysis of WASH complex member strumpellin
Pácalt, Ondřej ; Libusová, Lenka (vedoucí práce) ; Cvrčková, Fatima (oponent)
Polymerizace aktinu zprostředkovaná komplexem Arp2/3 je zásadní pro řadu buněčných procesů, jako je například pohyb, endocytóza či recyklace nákladu. Lokalizace a vazba komplexu Arp2/3 je závislá na tzv. faktorech zahajujících nukleaci (NPF). WASH komplex je hlavním NPF na membráně endozómů a hraje zde zásadní roli v recyklaci nákladu zpět do trans-Golgi (TGN) nebo na plasmatickou membránu. WASH komplex se skládá z pěti podjednotek: WASH1, SWIP, FAM21, CCDC53 a strumpellinu. V minulosti byly studovány především podjednotky WASH1 a FAM21. Naopak o strumpellinu není mnoho známo, a to i přesto, že souvisí se vznikem dědičné spastické paraplegie (HSP). Tato práce se zaměřuje na roli strumpellinu v buňce. Ukazuje, že pro úspěšné začlenění strumpellinu do WASH komplexu jsou potřeba všechny jeho části. Pomocí buněčné linie zbavené strumpellinu jsme dále ukázali, že ztráta strumpellinu vede k destabilizaci ostatních podjednotek WASH komplexu. To však nebrání sestavování částečného WASH komplexu v nepřítomnosti strumpellinu. Delece strumpellinu také vedla ke zvětšení endozomálních subdomén a ke snížení aktivity WASH komplexu, pozorovatelné jako úbytek aktinových teček. V buňkách zbavených strumpellinu navíc docházelo k akumulaci glukózového přenašeče 1 (GLUT1) a transferinového receptoru (TfR) v oblasti...
|
|
|
Comparative phenotypic study of selected Arabidopsis formin mutants
D'Agostino, Viktoria ; Cvrčková, Fatima (vedoucí práce) ; Tylová, Edita (oponent)
Aktinová vlákna a mikrotubuly se podílejí na vývoji a tvaru buňky. Rostlinné forminy třídy II regulují oba typy cytoskeletárních polymerů. Nicméně jejich funkce zatím nebyla zcela popsána. Tato studie se zaměřuje na efekty ztrátových mutací v genech FH13 (AT5G58160) and FH14 (AT1G31810) Arabidopsis thaliana, konkrétně na vývoj kořenového systému s použitím farmakologických postupů. Vzhledem k tomu, že měření kořenů rostlin za různých podmínek je pracné a časově náročné, tato diplomová práce se také zaměřuje na optimalizaci tohoto procesu, s cílem vytvořit metodu rychlé vizualizace a měření růstu semenáčků Arabidopsis v laboratorních podmínkách. Kromě toho bylo též nutné optimalizovat statistickou analýzu pro velké množství dat shromážděných za různých typů podmínek. Zatímco za standartních podmínek nebyl nalezen statisticky významný fenotyp, co se týče délky kořenů mutantů fh13, fh14 a dvojtého mutanta fh13 fh14 působení cytoskeletárních drog odhalailo změny ve vzniku laterárních kořenů mutanta fh14. Nicméně specifická funkce FH13 a FH14 zůstává otázkou.
|
|
| |
|
|
Transcriptional response of plants to genotoxic stress and water deficit
Libus, Jiří ; Štorchová, Helena (vedoucí práce) ; Cvrčková, Fatima (oponent) ; Kovařík, Aleš (oponent)
7 Conclusions 1) cDNA array was prepared and used to assay transcript abundances of 376 selected Ara- bidopsis transcripts following various treatments with MMS. a) LoTrEC, clustering algorithm based on local trends of expression profiles, was de- signed and applied to the data. It succeeded to discover functionally rellevant clusters of expression profiles. b) Transcriptional responses to various MMS treatment regimes were investigated. While high MMS concentration seemed only to induce nonspecific stress reaction, the low and combined MMS resulted in a set of more specific expression changes. c) Expression levels of five transcripts were estimated by qRT-PCR. Trends of most of the profiles were confirmed. 2) Expression of 3 genes related to drought stress and/or response to cytokinin were mea- sured by qRT-PCR in wild type and ZOG1 transgenic plants. Transcript levels of all the genes were altered by water deficit. a) Although there are no significant macroscopic differences between wild type and ZOG1 transgenic plants, the mRNA abundances appeared to be influenced by the genotype. b) Leaf position (age) significantly influenced the expression of cig1 and ZOG1 driven by SAG12 promoter. c) RT primed with oligo-dT appeared more eficient than random hexanucleotide-primed reaction for 3 out of 5 mRNAs...
|
host ::
RSS.