|
|
Regulace aktivity cholesterol-7alfa-hydroxylázy
Cejpková, Monika ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Leníček, Martin (oponent)
Cílem této bakalářské práce je charakterizovat mechanismy, které se podílejí na regulaci aktivity cholesterol-7α-hydroxylázy (CYP7A1) - klíčového enzymu klasické dráhy biosyntézy žlučových kyselin. V úvodu práce je podrobněji popsána funkce a metabolismus cholesterolu a žlučových kyselin (BA). Cholesterol je substrátem pro CYP7A1 a žlučové kyseliny jsou produktem reakce katalyzované tímto enzymem. Biosyntéza BA představuje hlavní cestu odstraňování cholesterolu z těla. Hlavní část práce se zabývá zpětnovazebnou inhibicí CYP7A1 žlučovými kyselinami a popisuje jednotlivé regulační dráhy, které jí uskutečňují. Pro expresi CYP7A1 jsou esenciální elementy odpovídající na žlučové kyseliny (BARE) v promotoru tohoto genu. Centrální úlohu zde hraje farnesoidní X receptor aktivovaný žlučovými kyselinami, který v játrech indukuje expresi proteinu označovaného jako malý heterodimerní partner (SHP). SHP následně reaguje s transkripčními aktivátory v BARE a dochází k inhibici transkripce CYP7A1. V tenkém střevě FXR indukuje fibroblastový růstový faktor 19 (FGF19), který aktivuje dráhy vedoucí k inhibici transkripce CYP7A1 v játrech. V regulaci aktivity CYP7A1 se uplatňují i mechanismy na aktivaci FXR nezávislé - regulační úlohu mají v těchto procesech hormony (inzulín, glukagon), glukóza, aktivace prozánětlivých...
|
|
|
Molecular mechanisms of apoptosis regulation by fatty acids in pancreatic β-cells
Němcová, Vlasta ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Anděra, Ladislav (oponent) ; Mělková, Zora (oponent)
Incidence diabetu 2. typu velmi rychle narůstá a představuje velkou hrozbu pro zdravotnictví i ekonomiku 21. století. Diabetes 2. typu je jasně asociován s obezitou a dysfunkce a apoptóza pankreatických β buněk v důsledku zvýšené hladiny mastných kyselin v krvi je považována za důležitý faktor přispívající k rozvoji tohoto onemocnění. Molekulární mechanismy zodpovědné za neblahé účinky mastných kyselin však nejsou dostatečne známy. Cílem tohoto výzkumného projektu bylo přispět k objasnění mechanismů, kterými nasycené a nenasycené mastné kyseliny regulují viabilitu a indukci apoptózy u lidských pankretických β buněk in vitro. U lidské β-buněčné linie NES2Y jsme ukázali, že zvýšené hladiny nasycených mastných kyselin přijímaných potravou (kyselina palmitová a stearová) indukují apoptózu pankreatických β buněk, narozdíl od příslušných nenasycených mastných kyselin (např. kyselina palmitolejová a olejová). Zjistili jsme, že apoptóza indukovaná kyselinou stearovou je doprovázena signifikantní aktivací kaspázy 2, 6, 7, 8 a 9, ale ne signifikantní aktivací kaspázy 3. Nebyla však spojena s vyléváním cytochromu c, změnou exprese proteinů PIDD, Fas a FasL a s aktivací proteinu p53. Působení kyseliny stearové vedlo k rychlé aktivaci signálních drah stresu endoplazmatického retikula (ER) (tj. IRE1α, PERK a...
|
|
|
Mechanismy invazivity a transkripční regulace nádorových buněk
Tolde, Ondřej ; Folk, Petr (vedoucí práce) ; Kovář, Jan (oponent) ; Brdička, Tomáš (oponent)
Mechanismy invazivity a transkripční regulace nádorových buněk Nádorové onemocnění má svůj původ v normálních tělních buňkách, které se vymknuly kontrole mateřského organismu. Nádorové buňky se pak mohou uvolnit z místa svého vzniku a šířit se po organismu. Pro průchod mezibuněčnou hmotou nebo vrstvou jiných buněk mohou tyto buňky využít mechanismy, které vedou k efektivnější migraci a invazivitě. Výzkum mechanizmů, které nádorové buňky využívají pro migraci, má význam pro pochopení vzniku a šíření metastáz a následně pro protinádorovou léčbu. V rámci mé disertační práce jsem se podílel na výzkumu vlastností invazivních nádorových buněk. Porovnávali jsme vlastnosti neinvazivní sarkomové buněčné linie a z ní odvozené, vysoce metastatické linie. Ukázali jsme, že buňky invazivní linie využívají améboidní způsob migrace a vykazují zvýšenou aktivitu Rho/ROCK signalizace. Na vedoucím okraji mají tyto buňky nabohacený aktin a myosin a dochází zde ke generování síly. Buňky neinvazivní linie využívají mezenchymální způsob migrace a generují sílu převážně na zatahujícím se konci. Dále jsme porovnávali buňky dvou linií odvozených od prsního karcinomu. Ukázali jsme, že invazivnější linie, odvozená od méně invazivní, vykazuje větší dynamičnost v přestavbě aktinového skeletu. Rovněž jsme u těchto linií popsali přítomnost...
|
|
|
Role signálních drah a redoxních dějů v biologii nádorových buněk
Vališ, Karel ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Anděra, Ladislav (oponent) ; Kozubík, Alois (oponent)
4 Souhrn Specifická indukce apoptózy v nádorových buňkách představuje nadějný způsob protinádorové terapie, který je současně netoxický pro zdravé tkáně. Z tohoto důvodu je důležité pátrat po molekulárních cílech schopných specificky indukovat apoptózu v nádorových buňkách, neboť ty mohou otevřít cestu k novým a efektivním protinádorovým terapiím. Jedním z nadějných cílů se jeví metabolismus nádorových buněk (1) a to zejména metabolismus mitochondriální (2). Mitochondrie jsou organely zásadní pro život buňky, ale současně mohou aktivovat buněčnou smrt, která je často spojená se zvýšenou produkcí volných kyslíkových radikálů (ROS; reactive oxygen species). V této práci jsme identifikovali analogy vitamínu E jako inhibitory komplexu II a potentní induktory mitochondriálních ROS v nádorových buňkách in vitro i in vivo. Dále jsme prokázali aktivaci konzervované Hippo/Mst1 kinázy účinkem analogů vitamínu E, která má za následek translokaci FoxO1 proteinu do jádra, transaktivaci NOXA genu, aktivaci Bak proteinu, permeabilizaci mitochondrií a aktivaci apotózy. Dále jsem pátrali po membránových proteinech jejichž exprese je aktivována v nádorových buňkách během deprivace železa, neboť tyto proteiny mohou hrát důležitou úlohu v metabolismu železa nádorových buněk, který se jeví jako efektivní cíl protinádorové...
|
|
|
Vliv tetrabrombisfenolu A (TBBPA) na reprodukční parametry, spermatogenezi a aktivitu vybraných genů u myší in vivo.
Žatecká, Eva ; Pěknicová, Jana (vedoucí práce) ; Kovář, Jan (oponent)
4 Abstrakt: Tetrabrombisfenol A je látka, které je využívána v průmyslu jako zpomalovač hoření. V současné době patří k těm nejpoužívanějším, jeho spotřeba činí 210 000 tun/rok a stále roste. Bylo prokázáno, že TBBPA se může uvolňovat do prostředí, byl nalezen v životním prostředí a dokonce i v lidském těle. Byly prokázány negativní účinky TBBPA na různé buněčné linie in vitro včetně TM4 Sertoliho buněk. Dále bylo prokázáno, že je schopen ovlivnit thyroidní hormonální systém a předpokládá se, že by mohl být schopen ovlivnit i androgení/estrogení hormonální systém. Z těchto důvodů byl TBBPA zařazen na seznam látek potencionálně nebezpečných lidskému zdraví. V této studii byl studován vliv TBBPA na reprodukční parametry, spermatogenezi a aktivitu vybraných genů na myších in vivo. Nejprve byla provedena dvougenarační studie na outbrední myší linii - CD1. U experimentálních zvířat byl detekován zvýšený počet apoptotických buněk v testes a dále byla zjištěna změna exprese u genů kódujících vybrané proteiny, které hrají důležitou roli během spermatogeneze. Naproti tomu kvalita spermií a reprodukceschopnost myší ovlivněných látkou TBBPA ovlivněny nebyly. Jako dodatková studie byla provedena jednogenerační in vivo studie na inbrední myší linii - C57BL/6. Tato studie převážně potvrdila výsledky obdržené z předešlé...
|
|
|
Stanovení exprese molekul transportu a metabolismu železa u vybraných chronických onemocnění.
Chmelíková, Jitka ; Kovář, Jan (vedoucí práce) ; Truksa, Jaroslav (oponent)
9 1 Abstrakt Železo je nezbytné pro lidský organismus vzhledem k jeho účasti jako kofaktoru enzymů v mnoha metabolických drahách. Je součástí hemoglobinu, čili je nepostradatelné pro přenos kyslíku do tkání. Má schopnost existovat ve dvojmocné i trojmocné formě. Dvojmocná forma se však účastní tvorby vysoce reaktivních hydroxylových aniontů, které organismus poškozují. Nehemové železo je přijímáno do cirkulace přes duodenální enterocyt. Vylučování železa se děje pouze deskvamací těchto buněk nebo krvácením. Proto musí být příjem železa přísně regulován. Nadměrný příjem železa je pozorován u některých chronických onemocnění (hereditární hemochromatóza, alkoholové onemocnění jater). Nedostatečný příjem železa může být naopak příčinou sideropenické anemie. Tato diplomová práce má za cíl stanovit expresi molekul transportu železa v duodenu u chronických onemocnění, která vznikají právě narušením regulace příjmu železa. Expresi molekul transportu železa (DMT1, Dcytb, ferroportin, hefestin) jsme stanovili na úrovni mRNA pomocí metody qPCR a na úrovni proteinu pomocí western blotu. Hladina sérového hepcidinu byla stanovena metodou ELISA. Naše výsledky ukazují zvýšení exprese mRNA transportérů DMT1 a ferroportinu, dále ferrireduktázy Dcytb a ferroxidázy hefestinu ve skupině anemiků. U exprese na úrovni proteinů...
|
|
|
Úloha kaspázy 2 v indukci apoptózy nádorových buněk.
Schmiedlová, Martina ; Horníková, Lenka (oponent) ; Kovář, Jan (vedoucí práce)
Kaspáza 2 v prámci buňky pravděpodobně plní několik funkcí. Kaspáza 2 má schopnost podílet se na indukci apoptózy, dále pak schopnost podílet se na reparaci poškozené DNA či regulaci buněčného cyklu. Kaspáza 2 má znaky iniciačních i exekučních kaspáz. Podnětem pro aktivaci kaspázy 2 bývá mimo jiné oxidační stres a poškození DNA buňky. Kaspáza 2 je aktivována štěpením při interakci s proteinovými komplexy. Jeden z proteinových komplexů tvoří prokaspáza 2 s proteiny RAIDD a PIDD, čímž vznikne PIDDozóm, v jehož rámci se prokaspáza 2 aktivuje. Aktivní kaspáza 2 existuje ve dvou formách a to v krátké S formě a dlouhé L formě. Dlouhá L forma působí proapoptoticky na rozdíl od S formy, která má antiapoptotické účinky. S forma kaspázy 2 byla zatím prokázána pouze na úrovni mRNA, nikoli na úrovni proteinu. Hlavní úloha L formy kaspázy 2 spočívá v indukci apoptózy u normálních i nádorových buněk. Kaspáza 2 se v nádorových buňkách aktivuje vnější i vnitřní drahou indukce apoptózy. Indukce apoptózy kaspázou 2 se např. studuje v souvislosti s terapií nádorů prsu taxany. Schopnost kaspázy 2 indukovat apoptózu u nádorových buněk i v nepřítomnosti proteinu p53 se využívá v terapii nádorů včetně překonání rezistence k indukci apoptózy, která je podmíněná ztrátou aktivity proteinu p53. Kaspáza 2 se účastní indukce apoptózy...
|
|
| |
|
| |
|
|
Význam a možnosti ovlivnění apoptózy v terapii hematologických malignit
Mánková, Marie ; Kovář, Jan (vedoucí práce)
Téma své diplomové práce "Význam a možnosti ovlivnění apoptózy v terapii hematologických malignit" jsem si vybrala, protože je to téma zajímavé nejen z vědeckého hlediska, ale přináší též reálnou naději na lepší a šetrnější léčbu pro mnoho pacientů s obtížně léčitelnými typy nádorových onemocnění. V prvních dvou kapitolách jsme se snažila o definici a detailnější popis průběhu apoptózy a její regulace s využitím zahraničních studií (viz seznam literatury). Třetí kapitola je věnována mechanismu účinku tradičních postupů (chemoterapie a radioterapie) a zejména přehledu nových směrů v terapii nádorových onemocnění. Vzhledem k širokému spektru výsledků bádání a množství nových látek s nadějnými perspektivami uplatnění v klinické medicíně se práce zabývá pouze úzkým výběrem (zejména nejvíce citovaných) potencionálních léčiv.
|
host ::
RSS.