|
| |
|
|
Separace hepcidinu na magnetických sorbentech s následnou analýzou pomocí MALDI-TOF-MSí
Vávrová, Jana ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Tichá, Marie (oponent)
Hepcidin je peptid, který se tvoří v hepatocytech a který je sekretován do krevní plazmy a vylučován močí. Předpokládá se, že tento peptid hraje důležitou regulační úlohu v metabolismu železa a určení změn jeho hladiny v moči a krevním séru má význam pro diagnózu závažných onemocnění. Dosud popsané metody pro stanovení hepcidinu v moči a séru mají omezení a nelze je obecně používat. V současné době se pro konečnou analýzu hepcidinu používá MALDI-TOF MS. Před tímto závěrečným krokem je však nutná separace peptidu ze vzorků moči nebo séra. Předmětem diplomové práce bylo studium separačních metod, které by následně umožnily MALDI-TOF MS analýzu hepcidinu. V naší práci jsme použili magnetické sorbenty lišící se gelovou matricí a funkčními skupinami. Byly použity jednak komerční magnetické sorbenty obsahující -COOH skupiny a jednak hydrofilní polymetakrylátové mikročástice P(HEMA-co-GMA)-IDA s imobilizovanými kovovými ionty (připravené na Ústavu makromolekulární chemie AV ČR). Naše výsledky prokázaly, že pro adsorpci hepcidinu při pH 6,8 je možné použít komerční magnetické částice fluidMAG-CMX, SiMAG-Carboxyl a SiMAG-Silanol. Magnetické částice P(HEMA-co-GMA)-IDA s imobilizovanými měďnatými ionty jsou pro adsorpci standardu hepcidinu použitelné v širokém rozmezí pH, zatímco v případě imobilizovaných...
|
|
|
Pharmaceutical application of high performance ion chromatography in analysis of organic anions and cations
Čujová, Sabína ; Čabala, Radomír (oponent) ; Pacáková, Věra (vedoucí práce)
Tato práce je zaměřena na aplikaci iontové chromatografie v analýze organických iontů pro farmaceutické účely. V oblasti farmaceutické analýzy se iontová chromatografie používá stále časteji. Její použití zahrnuje analýzu nečistot a metabolitů. Práce se nejprve věnuje srovnání iontové chromatografie s běžnými separačními technikami použivanými ve farmacii, jako je například plynová nebo vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Dalším cílem práce byl vývoj a validace metod iontové chromatografie pro určení čistoty a kontrolu kvality účinných látek Rivastigmine hemitartrate a Pramipexole hydrochloride. Klíčová slova: iontová chromatografie, chromatografie na reverzní fázi, iontově-párová chromatografie, iontově-vylučovací chromatografie, ionexová chromtografie, GC and HPLC
|
|
|
Stanovení lipidového profilu v biologickém materiálu metodou HPLC-ELSD
Vaindlová, Petra ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Feltl, Ladislav (oponent)
Byla optimalisována metoda kapalinové chromatografie s evaporativním detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) pro stanovení neutrálních a polárních lipidů. Jako stacionární fáze byla využita kolona plněná silikagelem s chemicky vázaným diolem. Jako mobilní fáze sloužil ternární gradient o složení A: hexan-tetrahydrofuran 99:1 (v/v), B: isopropanol-chloroform- kyselina octová 82:20:0,01 (v/v/v), C: isopropanol-voda-triethylamin 47:47:6 (v/v/v). Kalibrační závislosti byly měřeny v rozsahu 2-200 μg v nastřikované dávce a pro jednotlivé lipidové třídy odpovídalo optimální proložení experimentálních bodů těmto funkcím: triacylglyceroly - polynom 3. stupně (R=0,998), estery cholesterolu - mocninná závislost (R=0,998), volný cholesterol - polynom 3. stupně (R=0.9998), ceramid - mocninná závislost (R=0,992), kardiolipin - kvadratická závislot (R=0,998), fosfatidylethanolamin - mocninná závislost (R=0,999), fosfatidylcholin - kvadratická závislost (R=0,997), fosfatidylserin - polynom 3. stupně (R=0,9985), sfingomyelin - polynom 3. stupně (R=0,9997), lysofosfatidylcholin - mocninná závislost (R=0,9986). Analysa synthetického kontrolního vzorku ukázala výtěžnost v rozmezí 82-95%. Na základě těchto měření byly pak stanoveny koncentrace jednotlivých lipidových tříd v mozkové tkáni u myších samic a třicetidenních...
|
|
|
Využití monolitických kolon v kapilární kapalinové chromatografii
Holdšvendová, Petra ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
UVOD od 90. let minulého století [1]' kdy se objevily první zmínky o novémtypu stacionámifáze pro HPLC, o monolitech, se staly objektem zájmu mnoha vědeckých skupin [2-a]. Jejich nespornou qýhodou oproti klasickým náplňovým kolonám je jejich stabilita při pH v rozmezi 2 - 12, pÍi kterém není možné klasické kolony používat.Dalšímivyhodami je pakjejich snadná a levná příprava a nepřítomnost frit na koncích separačního media' jelikož monolit je kovalentné vázán na vnitřní stěnu kapiláry [5]. Jejich nevýhodou ovšem zatím zistává horší opakovatelnost přípravy stacionární fáze, neŽ je tomu u klasických kolon. Tato disertaění práce se zabývá monoliý na bázi organichých polymeru' a to zejména methakrylátové monolity. Týo monolity byly poprvé představeny Petersem a kol. [6], od tédoby bylo vyrobeno mnoho monoliticloých fází srozdílnými separaěními vlastnostmi [7-10]. Methakrylátové monolity jsou vhodné pro separaci jak nízkomolekulárníchlátek |7f, tak pro separaci vysokomolekulárních látek jako jsou proteiny, oligonukleotidy, peptidy ěi sacharidy [ 1 0- i 2].
|
|
|
Použití moderních analytických metod ke stanovení biologicky aktivních látek
Vránková, Alice ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Bosáková, Zuzana (oponent) ; Navrátil, Tomáš (oponent)
E E€€ !Ěa E€ií € p'*ÉÉE"ÉH.E Ě E -: ::t i'3E* iT; -ngE g š'*tx F! p E=;;'E Ť.ĚTešŇ ě.íÉTÉ€;ĚgF*1šj*E$IE.Éá *? E : -o'' c € .í.='E € u ax Ě :,; á.'á EšEB r: FE Hů.ť;,es Éě.g9.-E;á8 1ěeg i íiia= itury Ěi[i*íuĚE:EÉšsí g E€ Ťnsgt g šš; *s6.s :ta= š]í€ řE ě É.E E!Ěř E ššÉiĚa€ ĚE"€ Pá;řĚ0s.í €;;aáe se ;l;* Ět at í:ÉřE: : E ",í: €š É ;E..g; €€s € e šĚsš€Ě F ; E E: š E]Eř; ] ř'* E E >.=.P = l,š P 8 t ó F' E= ": ÉĚ € € ťšě Ě E : 5 .g; E E ÉE €;žÉs :iĚ* a É'gEEE! HEE'E€ ĚÉ2 = o-.Ú r o.LJ o..c.Y y' Ji U) tr o.5 a C a
|
|
| |
|
| |
|
|
Moderní reverzní stacionární fáze na bázi silikagelu, oxidu zirkoničitého a organických monolitů:využití v analýze biologicky aktivních látek
Soukupová, Klára ; Sobotníková, Jana (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Cvačka, Josef (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta Katedra analytické chemie Moderní reverzní stacionární fáze na bázi silikagelu, oxidu zirkoničitého a organických monolitů; využití v analýze biologicky aktivních látek Synopse k disertační práci Praha 2008 Klára Soukupová Tato disertační práce byla vypracována na Katedře analytické chemie Přírodovědecké fakulty Univerzity Karlovy v Praze v letech 2003 - 2008. Autor: Mgr. Klára Soukupová Školitelé: RNDr. Jana Suchánková-Sobotníková, Ph.D Doc. RNDr. Eva Tesařová, CSc. Praha 2008 1 OBSAH 1. Úvod 2 2. Cíle disertační práce 3 3. Výsledky a diskuze 4 4. Shrnutí 12 5. Citace 14 Příloha 1: Seznam publikací, přednášek a plakátových sdělení 15 Příloha 2: Curriculum Vitae 17 2 1. Úvod Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je moderní instrumentální metodou se širokým spektrem využití převážně v oblasti aplikací analytické chemie. Z běžně používaných separačních módů je nejdominantnější reverzní kapalinová chromatografie (RP HPLC). Tato metoda je velmi žádaná především díky své separační účinnosti, spolehlivosti a velkému výběru stacionárních fází s odlišnými vlastnostmi. Nejpoužívanější stacionární fáze v RP HPLC jsou chemicky vázané fáze, které mají řadu výhod, mezi které patří jejich dobrá dostupnost, velké aplikační pole, rychlé ustavování rovnováhy a...
|
|
| |
host ::
RSS.