Název: Objevování molekul terpenů pomocí in silico a molekulárně-biologických metod
Překlad názvu: Terpene discovery combining in silico and molecular biology approaches
Autoři: Smrčková, Helena ; Pluskal, Tomáš (vedoucí práce) ; Hodek, Petr (oponent)
Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok: 2023
Jazyk: eng
Abstrakt: [eng] [cze]
Terpenoids are the largest class of natural products with remarkable chemical and structural diversity, making them a significant source of compounds for drug discovery. Terpenoids are used as food flavours, therapeutics, cosmetics, hormones or fuel. The starting scaffolds for terpenoid biosynthesis are condensed and, in some cases, cyclic carbohydrates synthesized from linear isoprenyl pyrophosphate precursors by terpene synthases. The enzyme family of terpene synthases is extensive and possesses well-characterized motifs and function-determining domains that can be used to search for homologous proteins with unknown catalytical function that might produce new compounds. Thanks to a bioinformatic pipeline developed in the Pluskal Lab in the Institute of Organic Chemistry and Biochemistry CAS, candidate terpene synthases with the potential to produce new terpene scaffolds were mined in silico from large protein sequence repositories. I expressed nine selected proteins originating from plants, bacteria, and fungi in the engineered budding yeast strains JWY501 and ZX178-08 that overproduce isoprenyl pyrophosphates. I then analysed the resulting yeast cell culture extracts using gas chromatography- and liquid chromatography-mass spectrometry. Five out of nine proteins exhibited terpene synthase... Terpenoidy představují rozsáhlou a chemicky i strukturně rozmanitou skupinu metabolitů, což z nich činí významný zdroj potenciálních terapeutik. Terpenoidy jsou běžně využívány v potravinářství, farmacii, kosmetice či jako paliva. Výchozí látky pro biosyntézu terpenů jsou kondenzované a v některých případech cyklické uhlovodíky syntetizované z lineárních isoprenyl pyrofosfátů enzymy terpensynthasami. Tato rozsáhlá proteinová rodina sdílí společné motivy a domény určující funkci, které lze použít jako matrici pro hledání homologů mezi proteiny s dosud neznámou funkcí. Potenciál necharakterizovaných proteinů produkovat dosud nepopsané terpenové struktury byl hodnocen in silico pomocí metody vyvinuté v laboratoři Mgr.Tomáše Pluskala, Ph.D. na Ústavu organické chemie a biochemie Akademie věd ČR. Devět proteinů pocházejících z rostlin, bakterií a hub bylo podrobeno heterologní expresi v upravených kvasinkových kmenech JWY501 a ZX178-08, které nadměrně produkují nezbytné isoprenyl pyrofosfátové prekurzory. Výsledné extrakty kvasinkových kultur byly analyzovány pomocí plynové chromatografie-hmotnostní spektrometrie a kapalinové chromatografie- hmotnostní spektrometrie, přičemž pět z devíti proteinů vykazovalo terpensynthasovou aktivitu. Bylo zjištěno, že dva seskviterpeny produkované houbovým enzymem...
Klíčová slova: heterologní exprese; modifikované kvasinky; terpenoidy; terpensynthasy; terpeny; engineered yeast; heterologous expression; terpene synthases; terpenes; terpenoids

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/181562

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-528829


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Bakalářské práce