Název:
Exprese a purifikace N-koncové části filamentózního hemaglutininu z Bordetella Pertussis v E. Coli
Překlad názvu:
Expression and purification of N-terminal fragment of filamentous hemagglutinin from Bordetella Pertussis in E. Coli
Autoři:
Jurnečka, David ; Stiborová, Marie (vedoucí práce) ; Kavan, Daniel (oponent) Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok:
2013
Jazyk:
cze
Abstrakt: [cze][eng] : Černý kašel je vysoce nakažlivé onemocnění způsobené gramnegativní bakterií Bordetella pertussis. V průběhu infekce bakterie produkuje celou řadu toxinů a adhezivních molekul, mezi něž patří i filamentózní hemaglutinin (FHA). FHA je 220 kDa povrchový protein, jenž je také produkován ve velkém množství do média, a hraje klíčovou úlohu v interakci mezi bakterií a hostitelskými buňkami. Cílem této práce bylo vytvořit heterologní expresní systém na produkci N-koncové části B. pertussis FHA (FHA1-862) v buňkách Escherichia coli. Pro sekreci proteinu FHA1-862 do media byl vytvořen plasmid skládající se ze systému dvou nezávislých T7/Lac promotorů, první pro gen fhaB kódující FHA1-862, a druhý pro gen fhaC kódující transportní protein, jenž umožňuje přenos FHA z periplasmatického prostoru do extracelulárního média. Protein byl úspěšně sekretován v buňkách E. coli BL21 nesoucí plasmid pMM100 (LacIq ) při 30 řC a přečištěn pomocí afinitní kapalinové chromatografie na nosiči Cellufine. Tyto výsledky naznačují, že protein FHA862 může být produkován expresním systémem E. coli, nicméně tento systém poskytuje malou výtěžnost proteinu.: Whooping cough is highly contagious disease caused by gram-negative bacteria Bordetella pertussis. During infection the bacteria produces many types of toxins and adhesive molecules including a filamentous hemagglutinin(FHA). FHA is 220 kDa surface-exposed and secreted protein, which plays a key role in host-cell interactions. The project aims at construction of heterologous expression system for production of the N-terminal part of B. pertussis FHA (FHA1-862) in E. coli. The expression vector is composed of system of two independent T7/Lac promoters and enables secretion of FHA1-862 into the culture media. Downstream of the first promoter is fhaB gene encoding FHA1-862 and the letter is followed by fhaC gen encoding the FhaC transport protein, which allows translocation of FHA from periplasmic space to extracellular milieu. FHA1-862 was successfully secreted in E. coli strain BL21 carrying plasmid pMM100 (Laclq) at 30 řC and purified by affinity chromatography on Cellufine resin. These results indicate that FHA1-862 protein can be produced in E. coli, however, the system is inefficient and the yield of the protein is very low. (In Czech)
Klíčová slova:
Bordetella pertussis; Escherichia coli; filamentózní hemaglutinin; Bordetella pertussis; Escherichia coli; filamentous hemagglutinin