Název: Klinicky relevantní protein-proteinové interakce v procesu bakteriální patogeneze B. pertusis
Překlad názvu: Clinically relevant protein-protein interactions participating in process of bacterial pathogenesis B. pertusis
Autoři: Málek, Albert ; Šulc, Miroslav (vedoucí práce) ; Černá, Věra (oponent)
Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok: 2020
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Výskyt černého kašle v lidské populaci byl v průběhu 20. století díky vakcinaci silně potlačen. V posledních letech však začala inicidence černého kašle opět narůstat. Původcem této nemoci je patogenní gramnegativní bakterie Bordetella pertussis, která začíná být rezistentní vůči dosud používaným antibiotikům či vakcínám. B. pertussis napadá dýchací cesty člověka. Jedním z jejích virulentních faktorů je adenylátcyklázový toxin (ACT). Ten je sekretován z bakteriálních buněk do extracelulárního prostoru, váže se na plasmatickou membránu hostitelské buňky a translokuje do jejího cytosolu adenylátcyklázovou doménu (dAC). Tato enzymatická doména se aktivuje nekovalentní interakcí s eukaryotním kalmodulinem (CaM) a syntetizuje cAMP, jehož nadbytek má za následek apoptózu hostitelské buňky. Proteinovou interakci dAC s CaM jsme studovali pomocí metody PIXL (fotochemické zesítění, z angl. "Photo Induced Cross Linking") a hmotnostní spektrometrie (MS). Mutantní protein dAC, s inkoroporovaným foto-Methioninem (pM) na pozici Leucinu 240 (dACL240pM), jsme exprimovali v transformovaných buňkách E. coli B834 v minerálním médiu s pM. Exprimovaný protein jsme izolovali afinitní chromatografií a pomocí MS stanovili inkorporaci pM do primární struktury dAC na přibližně 50 % ve finálním preparátu. S izolovaným... Whooping cought in human population was strongly suppressed during the 20th century. But in the past few years, the incidence of whooping cough began to rise. The origin of this disease is a pathogenic gram-negative bacteria Bordetella pertussis, which is becoming resistang to currecently used antibiotics or vaccination. B. pertussis attacks human respiratory system. One of it's virulent factors is adenylate cyclase toxin (ACT). It's secreted extracellularly from bacteria and binds to cytoplasmic membrane of host cells and translocates adenylatecyclase domain (dAC) to cytosol. This enzymatic domain is activated by non- covalent interaction with eukaryotic Calmodulin (CaM). After it's activation, dAC in high concentrations synthesizes cAMP, triggering host cell's apoptosis. We studied protein interaction of dAC with CaM by the PIXL method (Photo Induced Cross Linking) and mass spectrometry (MS). Mutant of dAC, with photo-methionine (pM), incorporated in position of Leucine 240 (dACL240pM) was expressed in transformed E.coli cells B834 in mineral medium containing pM. Expressed protein was isolated by affinite chromatography and characterized by MS (determined incorporation of pM was approximately 50 % in the final protein preparation). We performed a photochemical cross-linking with isolated...
Klíčová slova: B. pertusis; bakteriální patogeneze; foto-Met; hmotnostní spektrometrie; technika fotochemického zesítění (PIXL); B. pertusis; bacterial pathogenesis; mass spectrometry; photo-induced cross-linking (PIXL); photo-Met

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/117146

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-411433


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Bakalářské práce