Název: Příprava rozpustné formy myšího NKR-P1A proteinu pro NMR analýzu
Překlad názvu: Preparation of the soluble form of a mouse NKR-P1A protein for the NMR study
Autoři: Skála, Kristián ; Chmelík, Josef (vedoucí práce) ; Adámková, Lyubina (oponent)
Typ dokumentu: Bakalářské práce
Rok: 2014
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
Přirození zabíječi (NK buňky) patří mezi lymfocyty a funkčně jsou definováni jako buňky schopné cytotoxicky usmrtit cílové buňky bez předchozí senzibilizace. Jednou z rodin povrchových receptorů NK buněk je rodina NKR-P1. Členové této rodiny patří mezi receptory C-lektinového typu, přičemž některé plní funkci aktivační a jiné inhibiční. Rozpustná forma myšího proteinu Nkr-p1a je izoformou aktivačního receptoru Nkr-p1a. V jeho aminokyselinové sekvenci chybí významná část transmembránové domény, proto je vysoká pravděpodobnost jeho výskytu v cytoplazmě. Tato práce se zaměřuje na optimalizaci podmínek produkce rozpustné formy myšího Nkr-p1a proteinu v bakteriálním kmeni E. coli BL21(DE3) Gold, jeho izolaci ve formě inkluzních tělísek a purifikaci pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Byla optimalizována koncentrace induktoru exprese, doba a teplota produkce. Cílem optimalizace pracovního postupu je jeho využití pro přípravu izotopově značeného proteinu pro strukturní studium metodou nukleární magnetické rezonance. Natural killer cells (NK cells) are a type of lymphocyte. According to their function they are defined as cytotoxic cells which cause cell death without prior sensitization. NKR-P1 is one of the families of NK surface receptors. This family belong to C-type lectin like with inhibitory or activatory function. In this work we concern of soluble form of mouse protein Nkr-p1a, that is isoform of activatory receptor Nkr-p1a. This receptor is expected to be intracellular due to lack of major part of its transmembrane domain. We focus on the optimization of Nkr-p1a production parameters. As production system we used bacterial strain E. coli BL21(DE3) Gold, in which the target protein is produced and subsequently isolated in the form of inclusion bodies. Obtained recombinant protein was refolded and purified. As purification step we used high-performance liquid chromatography. We optimized concentration of inductor of expression, production time and temperature. The objective is to set up protocol for preparation of isotopically labeled protein for nuclear magnetic resonance structure characterization. (in czech)
Klíčová slova: NK buňky; receptory NK buněk; rozpustná forma myšího proteinu NKR-P1A; NK cell receptors; NK cells; soluble form of mouse protein NKR-P1A

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/69952

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-339079


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Bakalářské práce