Original title: Příprava rozpustné formy myšího NKR-P1A proteinu pro NMR analýzu
Translated title: Preparation of the soluble form of a mouse NKR-P1A protein for the NMR study
Authors: Skála, Kristián ; Chmelík, Josef (advisor) ; Adámková, Lyubina (referee)
Document type: Bachelor's theses
Year: 2014
Language: cze
Abstract: [cze] [eng]
Přirození zabíječi (NK buňky) patří mezi lymfocyty a funkčně jsou definováni jako buňky schopné cytotoxicky usmrtit cílové buňky bez předchozí senzibilizace. Jednou z rodin povrchových receptorů NK buněk je rodina NKR-P1. Členové této rodiny patří mezi receptory C-lektinového typu, přičemž některé plní funkci aktivační a jiné inhibiční. Rozpustná forma myšího proteinu Nkr-p1a je izoformou aktivačního receptoru Nkr-p1a. V jeho aminokyselinové sekvenci chybí významná část transmembránové domény, proto je vysoká pravděpodobnost jeho výskytu v cytoplazmě. Tato práce se zaměřuje na optimalizaci podmínek produkce rozpustné formy myšího Nkr-p1a proteinu v bakteriálním kmeni E. coli BL21(DE3) Gold, jeho izolaci ve formě inkluzních tělísek a purifikaci pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Byla optimalizována koncentrace induktoru exprese, doba a teplota produkce. Cílem optimalizace pracovního postupu je jeho využití pro přípravu izotopově značeného proteinu pro strukturní studium metodou nukleární magnetické rezonance. Natural killer cells (NK cells) are a type of lymphocyte. According to their function they are defined as cytotoxic cells which cause cell death without prior sensitization. NKR-P1 is one of the families of NK surface receptors. This family belong to C-type lectin like with inhibitory or activatory function. In this work we concern of soluble form of mouse protein Nkr-p1a, that is isoform of activatory receptor Nkr-p1a. This receptor is expected to be intracellular due to lack of major part of its transmembrane domain. We focus on the optimization of Nkr-p1a production parameters. As production system we used bacterial strain E. coli BL21(DE3) Gold, in which the target protein is produced and subsequently isolated in the form of inclusion bodies. Obtained recombinant protein was refolded and purified. As purification step we used high-performance liquid chromatography. We optimized concentration of inductor of expression, production time and temperature. The objective is to set up protocol for preparation of isotopically labeled protein for nuclear magnetic resonance structure characterization. (in czech)
Keywords: NK cell receptors; NK cells; soluble form of mouse protein NKR-P1A; NK buňky; receptory NK buněk; rozpustná forma myšího proteinu NKR-P1A

Institution: Charles University Faculties (theses) (web)
Document availability information: Available in the Charles University Digital Repository.
Original record: http://hdl.handle.net/20.500.11956/69952

Permalink: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-339079


The record appears in these collections:
Universities and colleges > Public universities > Charles University > Charles University Faculties (theses)
Academic theses (ETDs) > Bachelor's theses