Název: HPLC stanovení neopterinu, tryptofanu, kynureninu a kreatininu v lidském séru
Překlad názvu: HPLC Determination of Neopterin, Tryptophan, Kynurenine and Creatinine in Human Serum
Autoři: Prokopová, Veronika ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Typ dokumentu: Rigorózní práce
Rok: 2010
Jazyk: cze
Abstrakt: [cze] [eng]
V rigorózní práci byla vyvinuta nová HPLC metoda pro současné stanovení neopterinu, tryptofanu, kynureninu a kreatininu v krevním séru a následně byla metoda plně validována. Pro separaci byly použity dvě sériově zapojené monolitní kolony Chromolith Speed ROD RP-18e, 50 x 4,6 mm a Chromolith Performance RP-18e, 100 x 3,0 mm. Ke zlepšení separační účinnosti a odstranění rušivých proteinů séra byla před sériové zapojení kolon přidána předkolona Chromolith Guard RP-18e, 10 x 4,6 mm. Neopterin a tryptofan byly detekovány fluorescenčním detektorem. Pro detekci neopterinu byla použita excitační vlnová délka 353 nm a emisní 438 nm, tryptofan byl detekován při excitační vlnové délce 245 nm a emisní 404 nm. Detekce kreatininu a kynureninu byla prováděna pomocí diode array detektoru při vlnových délkách 235 nm pro kreatinin a 230 nm pro kynurenin. Mobilní fází byl 15 mmol/l fosfátový pufr o pH 4,51 s průtokem 1 ml/min v čase 0 - 3 minuty, poté byl průtok skokově zvýšen na 2,3 ml/min. Celková doba analýzy byla 9,5 minuty. Nástřik vzorku na kolonu byl 1 µl. Metoda byla vypracována a validována se standardy stanovovaných analytů a pomocí lidského krevního séra. In this work the new HPLC method for simultaneous determination of neopterin, tryptophan, kynurenine and creatinine was developed and validated. For separation of analytes two monolithic columns (Chromolith Speed ROD RP-18e, 50 x 4.6 mm and Chromolith Performance RP-18e, 100 x 3.0 mm) were connected together. In front of this connection Chromolith Guard RP-18e, 10 x 4.6 mm disc for better separation and serum proteins elimination was used. Neopterin and tryptophan were monitored using fluorescent detection. Neopterin was monitored at 353 nm excitation and 438 nm emission wavelength, for tryptophan 245 nm excitation and 404 emission wavelength was used. The detection of creatinine and kynurenine was carried out with help of diode array detector at wavelength 235 nm for creatinine and 230 nm for kynurenine. As the mobile phase 15 mmol/l phosphate buffer at pH 4.51 was used with the flow rate 1 ml/min in time 0 - 3 minutes, then the flow rate was changed to 2.3 ml/min. The total time of analysis was 9.5 minutes including the column equilibration. The injection volume of sample was 1 µl. This method was developed and validated using the standards of analytes and also in human serum.

Instituce: Fakulty UK (VŠKP) (web)
Informace o dostupnosti dokumentu: Dostupné v digitálním repozitáři UK.
Původní záznam: http://hdl.handle.net/20.500.11956/35766

Trvalý odkaz NUŠL: http://www.nusl.cz/ntk/nusl-300040


Záznam je zařazen do těchto sbírek:
Školství > Veřejné vysoké školy > Univerzita Karlova > Fakulty UK (VŠKP)
Vysokoškolské kvalifikační práce > Rigorózní práce