|
|
Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek.
Novák, Martin ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Student: Bc. Martin Novák Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant Mgr. et Mgr. Rafael Doležal, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek Diplomová práce se zaměřuje na vývoj HPLC - UV metody pro stanovení enantiomerů látky K 1277 se strukturním vzorcem N - (2 - ((6 - chlor - 1,2,3,4 - tetrahydroakridin - 9 - yl) amino) hexyl - 2 - amino - 3 - (1H - indol - 3 - yl) propylamid dihydro - chlorid, která je vybraným zástupcem ze skupiny hybridních sloučenin takrinu a tryprofanu. Hybridy syntetizované z molekul takrinu a tryptofanu je možné zařadit mezi velmi slibné kandidáty potenciálních léčiv působících v terapii Alzheimerovy choroby. V teoretické části práce přináší seznámení se základní charakteristikou chirality molekul, možnostmi a principy chirálních separačních metod, patofyziologií a klinickými projevy Alzheimerovy nemoci, možnostmi léčby Alzheimerovy nemoci a se stručnou charakteristikou hybridních sloučenin takrinu a tryptofanu. Cílem diplomové práce je nalezení vhodné metody separace enantiomerů vznikajících syntézou z takrinového skeletu a tryptofanové části. Experimentální část práce se...
|
|
|
Extrakce nukleotidů z rostlinné matrice a jejich stanovení iontově výměnnou vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií
Konečná, Markéta ; Sobotníková, Jana (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
V této diplomové práci byly optimalizovány chromatografické podmínky pro HPLC analýzu ribonukleotidů AMP, ADP a ATP. Pro separaci byla využita chromatografická kolona Nucleogel SAX 1000-8, 50 x 4,6 mm, od německé firmy Marcherey-Nagel. Mobilní fázi tvořil roztok KH2PO4 o koncentraci 0,2 mol/L, jehož pH bylo upraveno 1mol/L hydroxidem draselným na hodnotu pH = 5,00. Jako nejvhodnější průtoková rychlost byl zvolen 1,0 mL/min. Analýza probíhala s využitím isokratické eluce. Detekce byla provedena DAD detektorem při vlnové délce λ = 260 nm. Látky byly eluovány v pořadí AMP (tr = 0,911 min), ADP (tr = 1,667 min) a ATP (tr = 7,262 min). Celková doba analýzy směsi standardů, za výše zmíněných podmínek, trvala 10 minut. Pro extrakci adenosin-5'-ribonukloetidů z reálné matrice byly použity mražené a lyofilizované listy tabáku virginského (Nicotiana tabacum L.). Byly využity dvě metody extrakce. První postup byl založen na extrakci AMP, ADP a ATP z listů rostliny tabáku vařící deionisovanou vodou. Druhá metoda využívala k extrakci, místo deionisované vody, 0,07mol/L HClO4. Klíčová slova: HPLC, adenosinové ribonukleotidy, AMP, ADP, ATP, tabák virginský
|
|
|
Analýza biologicky aktivních látek moderními separačními metodami
Bierhanzl, Václav ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Sýkora, David (oponent)
Disertační práce se věnuje stanovení fosfolipidů a jejich polárních částí metodami plynové a kapalinové chromatografie, kapilární elektroforézy a hmotnostní spektrometrie. Fosfolipidy jsou nejvýznamnějšími polárními lipidy a dělí se do tříd podle fosforylované funkční skupiny. Fosfolipidy jsou zastoupeny v buněčných membránách, a právě zastoupení fosfolipidových tříd či jeho změny slouží ke sledování vlivu vnějších podmínek na buňky. V současnosti se pro analýzu zastoupení fosfolipidových tříd používá TLC, jež pro svou časovou náročnost nevyhovuje potřebám pro výzkum např. mikrobů. Předkládaný soubor článků se zabývá klasifikací fosfolipidů, které produkuje kmen bakterie Bacillus subtilis, vybraný jako producent surfaktinu, potenciálního antibiotika s detergentními účinky. Publikované metody tak mohou být využity při výzkumu optimálních podmínek kultivace. Jelikož mohou mastné kyseliny fosfolipidových molekul ovlivňovat stanovení poměru fosfolipidových tříd, bylo nutno vyvinout metody pro stanovení odštěpených fosforylovaných částí (polárních hlavic). Byly vyvinuty metody kapilární elektroforézy a plynové chromatografie. Podmínky plynové chromatografie byly následně optimalizovány pro souběžné stanovení s mastnými kyselinami. Další část práce se zabývá alternativním přístupem, představujícím přímý...
|
|
|
Dispozice nových syntetických drog v organismu. Studium biotransformace a farmakokinetiky. Toxikologická detekce v biologických materiálech.
Židková, Monika ; Balíková, Marie (vedoucí práce) ; Šustková, Magdaléna (oponent) ; Šanda, Miloslav (oponent)
Cílem předkládané dizertační práce bylo studium biotransformace a farmakokinetiky vybraných stimulačních látek ze skupiny katinonů a aminoindanů na experimentálních potkanech. Práce je tematicky řazena do dvou okruhů: biotransformační studie mefedronu, methylonu, 5,6-methylendioxy-2-aminoindanu (MDAI) a studia časových distribučních profilů mefedronu, methylonu, MDAI a nafyronu. Dizertační práce shrnuje vlastní originální publikace z této oblasti. Po jednorázové subkutánní dávce studovaných drog potkanům byly v předem daných časových intervalech odebrány krev a orgány (mozky, plíce, játra). Pro biotransformační studii byla sbírána potkaní moč v časovém intervalu 0-24 hod. po subkutánním podání. Pro detekci metabolitů i kvantitativní analýzu byla použita LC- HRMS metoda. Výsledky biotransformačních studií přinesly nové poznatky o metabolismu studovaných látek. V moči po podání mefedronu bylo identifikováno, kromě původní látky, deset metabolitů fáze I a pět metabolitů fáze II porovnáním s MS2 spektry referenčních standardů a/nebo MS2 spektry dříve identifikovaných metabolitů. Hlavní metabolickou cestou byla N-demethylace vedoucí ke vzniku normefedronu, který se dále konjugoval s dikarboxylovými kyselinami jantarovou, glutarovou a adipovou. Další metabolické cesty fáze I zahrnovaly oxidaci...
|
|
|
Carotenoids of snow algae as biomarkers for exobiology: Raman spectroscopic perspective
Němečková, Kateřina ; Jehlička, Jan (vedoucí práce) ; Němec, Ivan (oponent)
Hlavním cílem této práce je kriticky zhodnotit Ramanovu spektroskopii při detekci karotenoidů extrémofilních sněžných řas. Extrémofilní mikroorganismy určují hypotetické hranice pro život na Zemi, a proto jsou pokládány za analogní organismy pro exobiologii. Ramanova spektroskopie se bude účastnit dvou planetárních misí na Mars s cílem najít život. V této práci, laboratorní Ramanův mikrospektrometr byl využit k analýze 11 vzorků sněžných řas získaných z různých lokací během let 2002-2017. Získaná spektra byla porovnána s výsledky HPLC/UV-VIS analýzy. Schopnost Ramanovy spektroskopie při detekci strukturně podobných karotenoidů nebo směsi více karotenoidů byla značně limitující. HPLC/UV-VIS analýza umožnila detekci i strukturně blízkých pigmentů. HPLC/UV-VIS analýza však vyžaduje celkové extrakty pigmentů, což může zapříčinit ztrátu určitých strukturních informací. Ramanův mikrospektrometr dovoluje detekci na úrovni jednotlivých buněk v různých životních stádií, což se ukázalo jako výhoda při studiu heterogenních vzorků. Klíčová slova karotenoidy, sněžné řasy, exobiologie, obyvatelnost, biomarkery, Ramanova spektrosckopie, HPLC/UV-VIS
|
|
|
Radioaktivní značení ramucirumabu s následnou studií jeho internalizace in vitro
Gajdoš, Jakub ; Bárta, Pavel (vedoucí práce) ; Kuchařová, Monika (oponent)
v českém jazyce Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikální chemie Student: Bc. Jakub Gajdoš Školitel: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D. Název diplomové práce: Radioaktivní značení ramucirumabu s následnou studií jeho internalizace in vitro. Proces angiogeneze zajišťuje tvorbu krevního řečiště v místě jeho zvýšené potřeby. Není proto překvapením, že je angiogeneze mnohdy zahrnuta do procesu tvorby nádorů, jelikož zajišťuje nádorovým buňkám přístup živin a odvod metabolitů. Cílení angiogeneze se tak stalo klíčovým tématem některých vědeckých výzkumů. Proces tvorby krevního zásobení nádorů zajišťuje rodina vaskulárních endoteliálních faktorů (VEGF) a jejich příslušných receptorů, které se tak staly cílem útlumu angiogeneze v onkologické léčbě. Jednou z mnoha terapeutik je i monoklonální protilátka ramucirumab cílená proti VEGF receptoru typu 2 (VEGFR-2). Radioaktivní značení ramucirumabu vhodným radionuklidem může přinést výhody ať už v radioterapii nebo radiodiagnostice. Cílem této diplomové práce bylo nepřímé radioaktivní značení monoklonální protilátky ramucirumabu pomocí radiodiagnostického nuklidu 99m Tc přes chelatační činidlo succinimidyl-6-hydrazino-nikotinamid (HYNIC) s následným stanovením radiochemické čistoty připraveného radiofarmaka a zejména jeho...
|
|
|
In vitro saturation study of 99mTc-HYNIC-ramucirumab on PC-3 cell line
Lach, František ; Bárta, Pavel (vedoucí práce) ; Hyršová, Lucie (oponent)
Abstakt v slovenskom jazyku Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biofyziky a fyzikálni chemie Študent: František Lach Školiteľ: Mgr. Pavel Bárta, PhD Konzultant: Mgr. Lucie Hyršová Názov diplomovej práce: In vitro saturačné štúdie 99m Tc-HYNIC-ramucirumabu na PC- 3 bunkách V posledných rokoch sa zvyšuje počet zhubných nádorov v populácií. Z dôvodu častých vážnych nežiadúcich účinkov chemoterapeutických liečiv na celý organizmus sa do popredia dostáva cielená protinádorová terapia. Vďaka svojmu špecifickému účinku na regulačné a signálne dráhy proteínových štruktúr, sú k cieľovej protinádorovej terapii využívané monoklonálne protilátky. Medzi základné vlastnosti rastúceho nádoru patria vaskulogenéza (schopnosť novotvorby ciev z endoteliálnych prekurzorov) a angiogenéza (proces vlastnej novotvorby ciev). Medzi endoteliálne progenitory nádoru patri vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF). VEGF svoj biologický účinok aktivuje prostredníctvom väzby na svoje transmembránové tyrozínkinázové receptory VEGFR. Práve inhibícia receptorov vaskulárneho endotelového faktoru je cieľom niektorých monoklonálnych protilátok. Ramucirumab je monoklonálna protilátka, ktorá selektívne inhibuje VEGF receptor typu 2 (VEGFR-2) a tým blokuje aktivačné a signalizačné dráhy. Cieľom...
|
|
|
In vitro saturation study of 99mTc-HYNIC-ramucirumab on SKOV3 cell line
Klimová, Juliána ; Bárta, Pavel (vedoucí práce) ; Maixnerová, Jana (oponent)
v slovenskom jazyku Univerzita Karlova v Prahe Farmaceutická fakulta v Hradci Králové
Katedra fyziky a fyzikálnej chémie
Študentka: Juliána Klimová Školitel: Mgr. Pavel Bárta, Ph.D.
Názov diplomovej práce: In vitro saturačné štúdie 99m Tc-HYNIC-ramucirumab na SKOV3 bunkách. Pasívna imunoterapia spočíva v podávaní už hotových výkonných tzv. efektorových zložiek imunitného systému (monoklonálne protilátky), ktoré v organizme plnia svoju funkciu v rámci likvidácie nádorovej bunky. Aktívna imunoterapia sa snaží vhodnou formou imunizácie vyvolať u pacienta účinnú protinádorovú odpoveď. Po naviazaní monoklonálnej protilátky na nádorovú bunku sa takáto bunka stáva značeným terčom pre následnú likvidáciu. Zvýšiť protinádorový účinok monoklonálnych protilátok je možné tým, že sa na ne naviažu cytostatiká, toxíny alebo rádioaktívne nuklidy. Predkladaná diplomová práca sa zamerala na radioaktívne značenie monoklonálnej protilátky ramucirumab cielenej na receptor pre vaskulárny endoteliálny faktor typu 2 (VEGFR-2), ktorý je hojne prítomný na bunkách niektorých typov nádorových ochorení. V rámci experimentálnej práce sa vykonala najprv konjugácia chelatačného činidla succinimidyl- 6-hydrazino-nicotinamidu (HYNIC) na monoklonálnu protilátku, následne sa naviazal radionuklid 99m Tc na predom pripravený...
|
|
|
Kapalinová chromatografie s hmotnostně-spektrometrickou detekcí na bázi mikrofluidního čipu
Rumlová, Barbora ; Cvačka, Josef (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá spojením kapalinové chromatografie s hmotnostně- spektrometrickou detekcí na bázi mikrofluidního čipu. Nejprve byl sestaven miniaturizovaný iontový zdroj pro chemickou ionizaci za atmosférického tlaku (APCI) a fotoionizaci za atmosférického tlaku (APPI), jehož hlavní komponentou byl skleněný mikrofluidní čip. Byla optimalizována geometrie a pracovní podmínky zdrojů. Jelikož oba iontové zdroje pracují za stejných podmínek, byly testovány možné výhody kombinovaného zdroje APCI/APPI. Dále byly studovány vlastnosti zdrojů a následně byly porovnávány s konvenčními zdroji pracujícími za vysokých průtoků. Zdroj, který vykazoval nejlepší vlastnosti, tedy APCI, byl spojen s kapalinovou chromatografií za nízkého průtoku. Byla vyvinuta metoda pro separaci methylesterů mastných kyselin pomocí standardu Supelco 37 Component FAME Mix. K separaci bylo využito reverzní chromatografie na stacionární fázi C18 a mobilní fázi obsahující 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu. Pro zrychlení doby analýzy byl použit teplotní gradient. Byl určen limit detekce a limit stanovitelnosti čipového mikro-APCI zdroje a byl porovnán s detekcí pomocí komerčního zdroje v režimu mikro-APCI. Vyvinutá metoda byla použita k separaci methylesterů mastných kyselin ve vzorcích jojobového oleje a oleje z...
|
|
|
Preparation and characterization of polyaniline-coated stationary phases doped with silver
Pátereková, Viktória ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Táto práca sa venuje príprave polyanilýnových stacionárnych fáz dopovaných striebrom s využitím pre HPLC. Boli napolymerizované polyanilínom potiahnuté stacionárne fázy s rôznym prídavkom AgNO3. Niektoré z nich boli podrobené sedimentácii Ag, v iných bolo AgNO3 pridané až po polymerizácii. Stacionárne fázy boli skúmané elektrónovým mikroskopom, atómovou absorpčnou spektroskopiou, Ramanovou spektroskopiou a infračervenou spektroskopiou s Fourierovskými transformáciami. Kolóny naplnené pripravenými stacionárnymi fázami boli porovnané s polyanilínovou kolónou bez prídavku striebra separáciou zmesi pozostávajúcej z kofeínu, teobromínu a teofilínu v troch chromatografických módoch (NP-čistý ACN, HILIC-98/2 (v/v) ACN/voda a RP-20/80 (v/v) ACN/voda) pri prietoku 5 µL/min s UV detekciou 265 nm a podobne separáciou zmesi 2'-aminoacetofenónu, 3'-aminoacetofenónu a 4'-aminoacetofenónu v rovnakých chromatografických módoch, pri prietoku 5 µL/min až na mód RP, kedy bol použitý prietok 10 µL/min na urýchlenie separácie. Polyanilínom potiahnuté kolóny dopované striebrom vykázali inú selektivitu v RP móde zmesi kofeínu, teobromínu a teofilínu oproti polyanilínom potiahnutých kolón bez prídavku striebra. Ďalej boli kolóny otestované s použitím jednoduchého chromatografického testu, ktorým boli charakterizované z...
|
host ::
RSS.