|
|
Morfologická charakteristika změn ve striatu pri neurodegenerativním procesu v mozku
Němečková, Ivana
Huntingtonova choroba (HD) je dědičné neurodegenerativní onemocnění. I přes to, že již známe příčinu vzniku tohoto onemocnění, jíž je produkce mutantní formy nestabilního proteinu huntingtinu (mhtt), obsahujícího 40 a více repeticí trinukleotidu CAG, efektivní terapie doposud neexistuje. Proto při studiu patogeneze tohoto letálního onemocnění mají nezastupitelnou roli in vivo modely. Doposud však neexistuje model, který by napodobil průběh neurodegenerativního procesu (NDP), který se rozvíjí především ve striatu mozku pacientů s HD. Existují dva základní typy modelů HD s použitím hlodavců jako experimentálních zvířat - neurotoxická léze a geneticky modifikovaná zvířata. Hlavním cílem naší studie tedy byla podrobná morfologická charakteristika rozvoje NDP typu HD ve striatu mozku potkanů, přičemž byla porovnávána progrese tohoto procesu v lézi navozené intrastriatovou injekcí kyseliny chinolinové (QA) a u potkanů transgenních pro HD. Porovnávali jsme skupiny potkanů (samců) s přežitím 3, 6-7, 14 dní, 1, 3, 6, 9 a 12 měsíců po QA lézi a tgHD potkany s přežitím 2, 6, 12, 18, 22-24 měsíců a u obou skupin i stejně stará kontrolní (intaktní) zvířata. Základním morfologickým znakem NDP fenotypu HD je předčasný zánik striatových neuronů, vedoucí k progredující atrofii striata, kompenzované dilatací...
|
|
|
Imunohistochemická detekce PECAM-1 exprese u hypertenzních potkanů
Hocková, Erika ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
4 ABSTRAKT Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmakologie a toxikologie Kandidát: Mgr. Erika Hocková Konzultant: Doc. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Název rigorózní práce: Imunohistochemická detekce PECAM-1 exprese u hypertenzních potkanů Hypertenze - vysoký krevní tlak je civilizační nemoc, která patří k nejčastějším kardiovaskulárním onemocněním. Svou prevalencí 25 - 30% v dospělé populaci představuje neinfekční epidemii a tím závažný zdravotnický problém. PECAM - 1 je adhezní a signální molekula, exprimovaná na hematopoetických a endoteliálních buňkách, kde tvoří hlavní složku cévní stěny. Strukturně je členem imunoglobulinové "superrodiny" adhezních molekul. Sunitinib je biologická látka ze skupiny tyrozinkinázových inhibitorů používaný v léčbě generalizovaného karcinomu ledviny a gastrointestinálních stromálních tumorů. Patří do farmakologické skupiny antineoplastika - inhibitory proteinkinázy. Mezi jeho hlavní nežádoucí účinky patří hypertenze. Tato rigorózní práce se zabývala popisem endoteliální exprese PECAM-1 v aortě u spontánně hypertenzních potkanů (SHR) a jejich normotenzních kontrol (WKY potkanů) s ohledem na podávání léčiva sunitinibu za použití imunohistochemických metod a vyhodnocení pomocí stereologických metod. V experimentu byly použity dva kmeny...
|
|
|
Morfologická charakteristika změn ve striatu při neurodegenerativním procesu mozku
Němečková, Ivana ; Mazurová, Yvona (vedoucí práce) ; Anděrová, Miroslava (oponent) ; Martínek, Jindřich (oponent)
Huntingtonova choroba (HD) je dědičné neurodegenerativní onemocnění. I přes to, že již známe příčinu vzniku tohoto onemocnění, jíž je produkce mutantní formy nestabilního proteinu huntingtinu (mhtt), obsahujícího 40 a více repeticí trinukleotidu CAG, efektivní terapie doposud neexistuje. Proto při studiu patogeneze tohoto letálního onemocnění mají nezastupitelnou roli in vivo modely. Doposud však neexistuje model, který by napodobil průběh neurodegenerativního procesu (NDP), který se rozvíjí především ve striatu mozku pacientů s HD. Existují dva základní typy modelů HD s použitím hlodavců jako experimentálních zvířat - neurotoxická léze a geneticky modifikovaná zvířata. Hlavním cílem naší studie tedy byla podrobná morfologická charakteristika rozvoje NDP typu HD ve striatu mozku potkanů, přičemž byla porovnávána progrese tohoto procesu v lézi navozené intrastriatovou injekcí kyseliny chinolinové (QA) a u potkanů transgenních pro HD. Porovnávali jsme skupiny potkanů (samců) s přežitím 3, 6-7, 14 dní, 1, 3, 6, 9 a 12 měsíců po QA lézi a tgHD potkany s přežitím 2, 6, 12, 18, 22-24 měsíců a u obou skupin i stejně stará kontrolní (intaktní) zvířata. Základním morfologickým znakem NDP fenotypu HD je předčasný zánik striatových neuronů, vedoucí k progredující atrofii striata, kompenzované dilatací...
|
|
|
Hodnocení poškození a reparace DNA u různých patologických stavů
Tenorová, Dana ; Němečková, Ivana (vedoucí práce) ; Rathouská, Jana (oponent)
autor: Dana Tenorová název: Hodnocení poškození a reparace DNA u různých patologických stavů Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové studijní obor: Odborný pracovník v laboratorních metodách Chronická obstrukční plicní nemoc (CHOPN) je závažné onemocnění charakterizované obstrukcí dýchacích cest, které je způsobeno chronickou bronchitidou nebo plicním emfyzémem. V důsledku těchto změn dochází v organizmu k oxidačnímu stresu s následným poškozením různých biomolekul, které můžeme měřit pomocí širokého spektra metod. Hlavním cílem naší práce bylo měření poškození DNA u pacientů s CHOPN a porovnání s poškozením u zdravé kontrolní skupiny. Pomocí elektroforetické metody comet assay jsme v naší práci analyzovali různá poškození DNA - jednořetězcové zlomy DNA (SSB), oxidované puriny a oxidované pirimidiny. Využívali jsme, jak klasickou alkalickou variantu comet assay, tak i její enzymovou modifikaci, kde jsme pracovali s endonukleázou III (Endo III) a formamidopyrimidin-DNA-glykosylázou III (FPG). Provedené analýzy nám ukázaly signifikantně vyšší hodnoty poškození DNA u pacientů s CHOPN v porovnání s kontrolní skupinou, zejména při použití modifikované comet assay. Ověřili jsme tak možnost aplikace comet assay při analýze oxidačního poškození DNA u pacientů...
|
|
| |
|
|
Detekce nestinu ve tkáních
Vařejčková, Michala ; Kudláčková, Zděnka (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biologických a lékařských věd Michala Vařejčková Vedoucí práce: PhDr. Zdeňka Kudláčková, Ph.D. Konzultant: prof. MUDr. Jaroslav Mokrý, Ph.D. Název diplomové práce: Detekce nestinu ve tkáních Cíl práce: Cílem této práce bylo pomocí imunohistochemických metod dokázat, že se intermediální filamentum nestin vyskytuje nejen v kapilárách, ale i ve velkých cévách - arteriích a vénách, což doposud nikdo nezveřejnil. Dále jsme sledovali koexpresi nestinu s proliferačním markerem PCNA. Metody: Experimentální část spočívala ve vyšetření potkaních embryí o stáří 11 a 16 dnů odebraných z potkaních samic Wistar (VELAZ, Praha, Česká republika). Detekce exprese nestinu a PCNA byla provedena různými typy nepřímých imunohistochemických metod. Pro zesílení signálu detekce byl použit EnVision systém nebo biotinylovaný tyramid. Hlavní poznatky: Endotel krevních cév exprimuje nestin různou intenzitou. V některých krevních cévách exprese nestinu chybí. S vyzráváním tkáně je nestin postupně nahrazován zvýšenou expresí jiného typu intermediálního filamenta. Pro identifikaci antigenů, které jsou ve tkáni vyjádřeny jen slabou intenzitou, se jeví optimální amplifikace signálu pomocí tyramidu. Závěr: Výsledky této práce dokládají, že nestin není přítomen...
|
|
|
Vliv Sunitinibu na endoteliální expresi hemooxygenázy-I u normotenzních potkanů
Svobodová, Barbora ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Barbora Svobodová Vliv sunitinibu na endoteliální expresi hemooxygenázy I u normotenzních potkanů. Bakalářská práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Zdravotní laborant Cíl práce: Cílem této práce bylo popsat a vyhodnotit expresi hemoxygenázy-1 (HO-1) v aortě normotenzních Wistar Kyoto (WKY) potkanů s ohledem na podávání sunitinibu za použití imunohistochemických a stereologických metod. Metody: Použili jsme dvě skupiny WKY potkanů (v každé bylo 6 zvířat), přičemž jedné z nich byl podáván sunitinib a druhé (kontrolní) byla podávána pouze voda. Aplikace sunitinibu probíhala podle schématu: 8 týdnů podávání/5 týdnů pauza/2 týdny podávání. Následně jsme na 60 preparátech potkaních aort provedli imunohistochemickou analýzu, která sledovala expresi HO-1 metodikou En Vision s detekcí pomocí DAB. Poté byla provedena stereologická analýza. Výsledky: Imunohistochemická analýza ukázala expresi HO-1 pouze u endotelových buněk a obecně lze konstatovat, že byla pozorována jen u několika zvířat, zejména ze skupiny zvířat léčených sunitinibem. Exprese HO-1 nebyla pozorována mimo cévní endotel. Závěr: Imunohistochemická a následná stereologická analýza prokázala signifikantní nárůst exprese HO-1 u potkanů, kterým byl podáván sunitinib. Tato zvýšená exprese může souviset s rozvojem...
|
|
| |
|
|
Vliv atorvastatinu na expresi markerů kaskády transformujícího růstového faktoru beta v experimentální aterogenezi
Frnochová, Lenka ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce) ; Němečková, Ivana (oponent)
Lenka Frnochová Vliv atorvastatinu na expresi markerů kaskády transformujícího růstového faktoru beta v experimentální aterogenezi. Diplomová práce Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Farmacie Cíl práce: Cílem této diplomové práce bylo pozorovat expresi ALK-1 a VEGF v aterosklerotických plátech u apoE a LDL-receptor deficientních myší s ohledem na podávání atorvastatinu. Metody: K výzkumu jsme použili samice myší kmene C57BL/6J s dvojitým deficitem apolipoproteinu E a LDL-receptoru. Myši byly staré 8 týdnů. Myši byly rozděleny do dvou skupin: skupiny atorvastatinové a kontrolní. Oběma skupinám byla podávána po 8 týdnů cholesterolová dieta a u atorvastatinové skupiny byl také podáván atorvastatin. Poté byla provedena biochemická analýza krve. K detekci lipidů v aterosklerotických lézích jsme využili histologického barvení olejovou červení. Imunohistochemická analýza byla uskutečněna v 1 cm aortálního sinu a části aortálního oblouku. Použitou metodikou pro detekci exprese ALK-1 a VEGF byla metodika avidin-biotin s detekcí pomocí DAB. Výsledky: Biochemická analýza ukázala, že atorvastatin snížil hladiny celkového cholesterolu. Po barvení olejovou červení byly u obou skupin viditelné aterosklerotické léze. Atorvastatin snižoval velikost aterosklerotických plátů....
|
|
|
Sledování markerů oxidačního stresu u modelu chronického zánětu tlustého střeva
Hocková, Erika ; Němečková, Ivana (oponent) ; Nachtigal, Petr (vedoucí práce)
Crohnova nemoc a ulcerózní kolitida se řadí do idiopatických střevních zánětů. NF - κB představuje skupinu pěti různých proteinů - p65 (RelA), c-Rel, RelB, p50 a p52. NF - κB je schopen nastartovat expresi různých prozánětlivých genů a ovlivnit tak proces mukosálního zánětu, také zprostředkovává různé specifické buněčné děje. Bilirubin je endogenní látka, u které byly zjištěny antioxidační a protizánětlivé účinky, které by mohly ovlivnit proces zánětu a mít protektivní účinek. Tato diplomová práce se zabývala vypracováním metodiky pro detekci nukleárního transkripčního faktor kappa B na parafinových řezech a sledováním jeho exprese ve stěně tlustého střeva normobilirubinemických a hyperbilirubinemických (Gunn kmen) potkanů po indukci chronického zánětu pomocí imunohistochemických metod. Ve studii bylo použito 8 potkanů kmene Gunn (G+ ) a 8 potkanů kmene Wistar (K+ ), kterým byl dlouhodobě podáván dextran sulfát (DSS). Sedm dnů po sobě byl do pitné vody přidáván DSS (koncentrace 2% w/v) s následným podáváním pouze pitné vody bez DSS po dobu 14 dnů. Popsaný třítýdenní cyklus se 2x zopakoval (proběhly tedy 3 cykly). Jako kontroly byli opět použiti potkani kmene Gunn (n=6) a Wistar (n=6), kteří nebyly vystaveni vlivu DSS. Výsledky imunohistochemické analýzy prokázaly detekci NF-κB receptoru ve stěně...
|
host ::
RSS.