|
|
Role paměťových T lymfocytů v transplantační imutě
Straňavová, Lucia ; Viklický, Ondřej (vedoucí práce) ; Zajícová, Alena (oponent) ; Vlas, Tomáš (oponent)
Paměťové T lymfocyty představují specifickou subpopulaci buněk, které vznikají během prvního setkání s antigenem, aby u reinfekcí byla sekundární reakce imunitního systému rychlejší a efektivnější. V transplantační imunitě mohou tyto buňky představovat potenciální riziko pro přežití štěpu. Kromě dárcovsky-specifických paměťových T buněk, které přímo ohrožují transplantovaný orgán, mohou pomocí zkřížené reaktivity, tzv. heterologní imunity, ohrozit zdraví a funkčnost štěpu i virově specifické paměťové buňky. V této práci jsme se zaměřili na dárcovsky-specifické a CMV-specifické paměťové/efektorové T lymfocyty. Zajímal nás vliv imunosupresivní terapie na frekvenci CMV specifických paměťových/efektorových T buněk. Zjistili jsme, že použitá imunosuprese, profylaxe ani délka dialýzy výrazně neovlivňuje počet CMV-reaktivních buněk, jejich počet byl 6 měsíců po transplantaci stejný jako před ní. Dále jsme se zabývali zkříženou reaktivitou mezi CMV a antigeny dárce, tzv. heterologní imunitou, kterou jsme ověřili analýzou repertoáru T receptorů β (TCR-β) pomocí sekvenování nové generace (NGS) u CMV a dárcovsky-reaktivních T buněk. Funkční zkříženě reagující T buněčné klony (sdílející stejnou TCR-β sekvenci) jsme pak nalezli jak v periferní krvi pacientů před transplantací, tak i v potransplantační biopsii...
|
|
|
The effect of opioids on immunoregulatory and migratory properties of mesenchymal stem cells.
Echalar, Barbora ; Zajícová, Alena (vedoucí práce) ; Funda, David (oponent)
Opioidy patria k jedným z najstarších analgetík využívaných k tíšeniu bolesti. Okrem liečebných vlastností však majú aj negatívne vedľajšie účinky, medzi ktoré patrí zhoršená regenerácia tkanív. Dá sa preto predpokladať, že by opioidy mohli mať negatívny vplyv na kmeňové bunky podieľajúce sa na procese hojenia. Jednou z populácii kmeňových buniek, ktoré sa účastnia na regenerácii poranení, sú mezenchymálne kmeňové bunky (mesenchymal stem cells, MSC). MSC sú nediferencované, multipotentné bunky, nachádzajúce sa skoro vo všetkých tkanivách. Majú imunoregulačné vlastnosti a sú schopné migrácie do miesta zápalu alebo poranenia, kde napomáhajú k regenerácii tkanív. Preto bolo cieľom práce zhodnotiť vplyv morfínu a metadónu na funkčné vlastnosti a migráciu MSC. Bolo merané pôsobenie týchto opioidov na metabolickú aktivitu MSC ako aj ich vplyv na expresiu a produkciu imunoregulačných molekúl a rastových faktorov. Analyzovaný bol ich účinok na regulačné vlastnosti MSC pôsobiacich na bunky prirodzenej alebo adaptívnej imunity in vitro. Hodnotený bol vplyv morfínu na expresiu adhezívnych molekúl MSC. Taktiež bolo skúmané jeho pôsobenie na migračné vlastnosti systémovo podaných exogénnych MSC in vivo v myších modeloch. Analyzovaná bola distribúcia MSC do jednotlivých orgánov po akútnom alebo chronickom...
|
|
|
Use of the nanofiber scaffold for transfer of stem cells onto the injured ocular surface in mouse experimental model
Kössl, Jan ; Zajícová, Alena ; Heřmánková, Barbora ; Javorková, Eliška ; Boháčová, Pavla ; Holáň, Vladimír
Corneal damage is one of the most common causes of impaired vision or even blindness. When the injury is more extensive and the limbal region is involved, the natural regeneration of the cornea is not sufficient. Such damage can lead to the limbal stem cell deficiency (LSCD). The only option for LSCD treatment is transplantation of the limbal tissue or a transfer of limbal stem cells (LSCs) cultured from the healthy eye. The allogenic transplantation of the limbus or cultivated LSCs with a systemic administration of immunosuppressive drugs is needed in the case of bilateral LSCD. Nevertheless, the cell therapy is very promising approach for LSCD treatment. Transplantation of mesenchymal stem cells (MSCs) seeded on an appropriate scaffold turned out to be a suitable therapy of the LSCD. In our experimental model of LSCD we use nanofiber scaffold for MSC and LSC cultivation and for transplantation of these cells onto the chemically injured mouse eye. MSCs have immunosuppressive and immunomodulatory properties. We showed that MSCs have the ability to inhibit production of molecules associated with the inflammation and support epithelial regeneration in the damaged cornea. These inhibitory properties were confirmed in both in vitro and in vivo mouse model. Results thus showed beneficial effects of stem cell transplantation for murine corneal healing and for suppression of a local immune reaction which can impede the healing process. Such similarity of in vivo and in vitro results allows us further experiments to clarify mechanisms of MSC regenerative and healing properties after the transplantation onto the injured cornea.
|
|
|
Nanofiber scaffolds for local delivery of stem cells and immunosuppressive drugs for therapeutic purposes
Zajícová, Alena ; Kössl, Jan ; Heřmánková, Barbora ; Boháčová, Pavla ; Holáň, Vladimír
Cell-based therapy of local tissue injuries or damages requires application of stem cells and inhibition of harmful inflammatory reaction which could impede the healing process. To increase the effectiveness of this therapy, a local administration of drugs can avoid their side effects associated with a systemic treatment. A local therapy requires suitable carriers, which can transfer the cells and drugs to the site of injury. As a promising carriers turned out nanofiber scaffolds prepared by electrospinning technology from various types of polymers. The main advantage of this technology is a possibility to define properties of nanofiber scaffolds, optimal for the growth and transfer of stem cells, and which could incorporate various types of immunosuppressive drugs. Here we describe the formation and use of nanofiber scaffolds prepared by needleless electrospinning technology from poly (L-lactic acid) (PLA) which are loaded with immunosuppressive drug Cyclosporine A (CsA). We show that CsA-loaded nanofibers effectively and selectively inhibit proliferation of activated T cells and suppress the production of T cell cytokines in vitro. Simultaneously, these nanofiber scaffolds enable growth of mesenchymal stem cells (MSCs) and thus can serve as stem cell carriers. Moreover, using an experimental mouse model of skin transplantation, we showed that covering skin allografts with MSC-seeded and CsA-loaded nanofibers significantly inhibited the local production of pro-inflammatory cytokines IL-2, IL-17 and IFN-gamma, and supported healing. Thus, nanofiber scaffolds seeded with stem cells and loaded with CsA can serve as carriers of cells and drugs for a local cell therapy and for simultaneous effective immunosuppression.
|
|
| |
|
|
GENE EXPRESSION AND IMMUNOLOGICAL RESPONSE IN MICE EXPOSED TO ZnO NANOPARTICLES
Rössner ml., Pavel ; Vrbová, Kristýna ; Strapáčová, S. ; Rössnerová, Andrea ; Ambrož, Antonín ; Brzicová, Táňa ; Líbalová, Helena ; Javorková, Eliška ; Zajícová, Alena ; Holáň, Vladimír ; Kulich, P. ; Večeřa, Zbyněk ; Mikuška, Pavel ; Coufalík, Pavel ; Křůmal, Kamil ; Čapka, Lukáš ; Dočekal, Bohumil ; Šerý, Omar ; Machala, M. ; Topinka, Jan
We analyzed gene expression changes in the lungs and the immunological response in splenocytes of mice exposed by inhalation of ZnO nanoparticles - NP. Adult female ICR mice were treated for three days and three months, respectively. Analysis of differential expression in genes involved in oxidative stress was conducted using quantitative RT-PCR. The potential immunotoxic and immunomodulatory effects of ZnO NP were analyzed by phenotyping and cytokine production by splenocytes after three months exposure. Three days exposure resulted in down-regulation of GCLC, GSR, HMOX-1, NQO-1, NF-kB2, PTGS2 and TXNRD1 mRNA expression, three months exposure increased the expression of these genes. Three months exposure caused a significant decrease in the percentage of granulocytes in the spleen cells, and affected the production of IL-10 and IL-6 by lipopolysaccharide-stimulated leukocytes. In summary, our study revealed changes in the expression of genes involved in the oxidative stress response following acute ZnO NP exposure. Subchronic ZnO NP exposure induced immunomodulatory effects in the spleen.
|
|
|
Komplexní péče o pacienta s intoxikací metforminem
Zajícová, Alena ; Povolná, Pavla (vedoucí práce) ; Hocková, Jana (oponent)
Metformin je perorálním antidiabetikem první volby u pacientů s diabetes mellitus 2.typu. Vzhledem k tomu, že počet nově diagnostikovaných diabetiků meziročně vzrůstá, zvyšuje se i množství nemocných, kterým je metformin předepisován. Jen v České republice se roce 2015 s diabetem léčilo 858 010 pacientů. Z toho 786 586 s diabetem mellitem 2.typu. Intoxikace metforminem, která se podle hlavního příznaku nazývá též MALA (metformin-associated lactic acidosis) je vzácná (≤ 10 případů na 100 000 pacientů ročně) komplikace při léčbě metforminem s vysokou mortalitou (až 50%). Metforminem indukovaná laktátová acidóza se vyvíjí při nerespektování kontraindikací podání metforminu nebo v případě vzniku akutně probíhajícího onemocnění spojeného s dehydratací a hypoxií. Pacienti s MALA jsou hospitalizování na interní JIP či ARO pod obrazem multiorgánového selhání. Cílem této diplomové práce je ověřit, zda jsou v praxi, na lůžkách intenzivní péče, aktivně používány procesuální ošetřovatelské standardy, které jsou realizovány formou ošetřovatelského procesu. Metodologie: Empirická část je zpracována formou kvalitativního výzkumu- kazuistikou pacientky s intoxikací metforminem při suicidálním pokusu. Sběr dat probíhal formou studia ošetřovatelské dokumentace, pozorováním, rozhovorem s pacientkou a její rodinou....
|
|
|
Vliv růstových faktorů a bioaktivních látek na diferenciaci mezenchymálních kmenových buněk
Blahnová, Veronika ; Daňková, Jana (vedoucí práce) ; Zajícová, Alena (oponent)
Mezenchymální kmenové buňky (Mesenchymal Stem Cells, MSCs) jsou populací multipotentních buněk, které mají schopnost obnovovat poškozené tkáně pocházející z mezodermu. Mohou diferencovat např. do chondrocytů, osteocytů, adipocytů, myocytů či inzulin produkujících buněk, a to jak pod vlivem celé škály růstových faktorů, hormonů a dalších bioaktivních látek, tak i v závislosti na kontaktech se sousedními buňkami a extracelulární matrix. Tkáňové inženýrství hojně využívá zejména růstových faktorů. Růstové faktory fungují přes specifické povrchové receptory, které zprostředkovávají komunikaci mezi buňkami a mezibuněčnou hmotou a ovlivňují tak celou řadu buněčných procesů jako růst, proliferaci, diferenciaci a další. Díky specifickému účinku na buňky se v tkáňovém inženýrství, v závislosti na konkrétní aplikaci a typu tkáně, používají jak jednotlivě, tak v kombinacích. Látky stimulující buňky k proliferaci a optimální diferenciaci mohou být přidávány přímo do kultivačního média při kultivaci in vitro, nebo do nosiče, na který jsou buňky později nasazeny. Odhalení vlivu přesných kombinací a koncentrací jednotlivých růstových faktorů na diferenciaci MSCs by umožnilo efektivnější využití MSCs v oblasti regenerativní medicíny. Cílem této práce je shrnout dosavadní poznatky o vlivu růstových faktorů a dalších...
|
|
|
Imunomodulační vlastnosti vitaminu D3
Urbanová, Anna ; Stříž, Ilja (vedoucí práce) ; Zajícová, Alena (oponent)
1 Abstrakt Vitamín D3 je důležitý pro udržení správné koncentrace Ca2+ v plazmě. Je proto nezbytný pro správný vývoj a růst kostí. Vitamín D3 má ale i řadu imunomodulačních účinků. Cílem naší práce bylo ohodnotit a porovnat vliv vitamínu D3 na expresi vybraných povrchových markerů (CD14, CD54, HLA-DR, CD16, CD36 a CD163) u THP-1 buněk a monocytů získaných z lidské periferní krve. Dalšími cíli bylo posouzení vlivu vitamínu D3 na životnost THP-1 buněk a změření produkce solubilní CD14 a IL-8 u THP-1 buněk pod vlivem vitamínu D3. Buňky byly stimulovány pěti různými koncentracemi vitamínu D3 po dobu 24, 48 a 72 hod. Vyšší použité koncentrace vitamínu D3, tj. 100 nM a 1000 nM výrazně zvýšily expresi CD14 u THP-1 buněk v čase 48 a 72 hod trvání stimulace. U monocytů z periferní lidské krve bylo zvýšení exprese CD14 po stimulaci vitamínem D3 fyziologicky nevýznamné. Zároveň s rostoucí koncentrací vitamínu D3 výrazně rostla produkce sCD14 u THP-1 buněk. Množství sCD14 bylo nejvyšší v čase 72 hod po stimulaci nejvyšší použitou koncentrací vitamínu D3. Se vzrůstající koncentrací vitamínu D3 rostlo množství IL-8 u THP-1 buněk. Toto množství bylo nejvyšší v čase 48 hod trvání stimulace, poté kleslo. Vyšší koncentrace vitamínu D3 zvýšily u THP-1 buněk expresi CD54. U monocytů z periferní lidské krve nikoliv. Vitamín D3...
|
|
|
Impacts of chemotherapy on imunoregulatory gene expression in the tumor microenvironment
Paračková, Zuzana ; Reiniš, Milan (vedoucí práce) ; Zajícová, Alena (oponent)
Mikroprostredie nádoru je miesto, kde mnohokrát prevládajú lokálne imunosupresorové účinky a kde je aktívne bránené imunitnému systému vykonávať svoje fyziologické funkcie. Medzi mnohými bunkovými typmi majú významnú úlohu bunky imunitného systému infiltrujúce mikroprostredie, keďže produkujú veľké množstvo faktorov potláčajúcich imunitnú odpoveď. V našej práci boli imunologické zmeny v priebehu rastu a chemoterapie nádorov monitorované v mikroprostredí nádoru dvoma spôsobmi, analýzou zastúpenia a fenotypu jednotlivých populácií imunocytov a ďalej analýzou celkovej úrovne expresie vybraných génov, ktoré sú spojené s imunosupresiou alebo charakteristické pre jednotlivé populácie imunocytov. Cieľom našej práce bolo u dvoch typov myšacích nádorov TRAMP-C2 a TC-1/A9 zistiť, ako 5- azacytidín (5AC), cytostatikum s epigenetickými účinkami, mení percentuálne zastúpenie leukocytov infiltrujúcich nádor v jeho mikroprostredí a či je to sprevádzané zníženou expresiou imunosupresorových génov. Ďalej nás zaujímal vplyv 5AC na nádory, ktoré boli už liečené cyklofosfamidom (CY), DNA alkylačným činidlom a široko používaným chemoterapeutikom pri terapii nádorov. CY vo vyšších dávkach potláča imunitné reakcie tiež tým, že indukuje akumuláciu myeloidných supresorových buniek (MDSC). Okrem percentuálneho zastúpenia...
|
host ::
RSS.