|
|
Základní charakterizace lidských enzymů DHRS7B a DHRS7C
Tučková, Tereza ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Tereza Tučková Školitel: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název práce: Základní charakterizace lidských enzymů DHRS7B a DHRS7C Lidské enzymy z nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem, anglicky "short-chain dehydrogenase/reductase" (SDR) se účastní mnoha fyziologických pochodů, jako je metabolismus lipidů, sacharidů, aminokyselin, steroidních hormonů, retinoidů, prostaglandinů a dalších. Mimoto hrají roli také v patogenezi některých onemocnění, například hormon-dependentních nádorů, metabolického syndromu a diabetu mellitu. Navíc se některé enzymy podílejí na biotransformaci xenobiotik. Nicméně asi 30 % zástupců SDR bohužel nebylo doposud vůbec charakterizováno. Lidské dehydrogenasy/reduktasy DHRS7B a DHRS7C patří mezi nedostatečně popsané SDR. Na základě bioinformatických dat se předpokládá, že se jedná o membránově vázané proteiny s redukční aktivitou. Cílem této práce bylo určit jejich základní biochemické vlastnosti. Výsledky ukazují, že oba enzymy interagují s membránou endoplazmatického retikula a jsou orientovány do cytosolu. Byl proveden prvotní screening enzymové aktivity. U DHRS7B i DHRS7C převládala redukční aktivita, která dosahovala vyšších hodnot v přítomnosti NADH jako kofaktoru a byla...
|
|
|
Skupina DHRS enzymů a jejich role v lidském organismu
Zamazalová, Alžběta ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Štambergová, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Alžběta Zamazalová Školitel: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název diplomové práce: Skupina DHRS enzymů a jejich role v lidském organismu Lidské enzymy ze skupiny dehydrogenas/reduktas SDR rodiny (DHRS) zahrnují 17 členů, které patří do velké nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem. Nadrodina dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem obsahuje 80 lidských zástupců, mezi kterými jsou některé významné a dobře popsané enzymy jako 11β-hydroxysteroiddehydrogenasa 1, karbonylreduktasa 1 a 17β-hydroxysteroid- dehydrogenasy. Nicméně řada zástupců této nadrodiny je popsána málo a nebo vůbec a mezi takové patří i skupina DHRS. O proteinech DHRS1, DHRS12, DHRS13, DHRS4L1 a DHRS4L2 neexistují doposud téměř žádné informace. Proteiny DHRS2, DHRS4, DHRS6, DHRS7, DHRS7B, DHRS7C, DHRS8, DHRS9, DHRS10, DHRS11 a DHRSX jsou na tom podstatně lépe, jelikož je známa minimálně subcelulární lokalizace a substrát (vyjma DHRSX), tudíž se může udělat alespoň prvotní úsudek o jejich možné funkci. Jediným enzymem ze skupiny DHRS, jehož výzkum byl prováděn in vivo, je DHRS3. DHRS3 by mohla mít významnou roli ve vývoji plodu. U DHRS3, ale i u ostatních enzymů DHRS, se objevují prvotní zmínky v souvislosti s některými...
|
|
|
Vliv monepantelu na expresi biotransformačních enzymů ovce
Štolcová, Tereza ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Tereza Štolcová Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová Ph.D. Název práce: Vliv monepantelu na expresi biotransformačních enzymů ovce Monepantel (MOP) představuje nové anthelmintikum ze skupiny amino-acetonitrilových derivátů, s odlišným mechanismem účinku oproti klasickým širokospektrým anthelmintikům. Používá se na léčbu a kontrolu gastrointestinálních nematodóz u ovcí a skotu. Tato práce se zaměřuje na vliv MOP na expresi vybraných cytochromů P450 (CYP) u ovcí in vivo a in vitro. K in vivo experimentům byla použita játra ovcí, kterým byl podán MOP v doporučené terapeutické dávce. Kontrolní skupině zvířat nebylo léčivo podáno. Při in vitro pokusech byly pozorovány změny v expresi mRNA vybraných CYP po 24 hodinové inkubaci primárních kultur ovčích hepatocytů s 10 μM MOP. Ke stanovení transkripčních hladin mRNA byla využita metoda qPCR (kvantitativní PCR v reálném čase). Výsledky in vivo i in vitro experimentů svědčí o výrazném nárůstu v expresi isoformy CYP3A24. Indukční efekt monepantelu byl dokonce vyšší, než indukční efekt známého CYP3A induktoru rifampicinu. Indukce enzymů CYP3A může mít vážné farmakologické anebo toxikologické důsledky. Při současném (případně následném) podání jiných léčiv s MOP...
|
|
|
Koimunoprecipitace jako nástroj pro studium interakcí DHRS7 enzymu s proteiny
Fassmannová, Dominika ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Matoušková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Dominika Fassmannová Školitel: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název diplomové práce: Koimunoprecipitace jako nástroj pro studium interakcí enzymu DHRS7 s proteiny DHRS7 enzym je člen nadrodiny enzymů dehydrogenáz/reduktáz s krátkým řetězcem. Enzym se in vitro chová jako NADPH-dependentní reduktáza s katalytickou aktivitu pro některé endogenní sloučeniny obsahující karbonylovou skupinu, zahrnující androstendion nebo trans-retinal. Vykazuje také úzkou homologii s enzymem 11β-hydroxysteroiddehydrogenáza 1. Fyziologická funkce DHRS7 je zatím neznámá a úroveň poznání enzymu velmi nízká. V poslední době se objevují informace o roli DHRS7 v některých onemocnění, např. v rakovině prostaty nebo v inzulínové rezistenci. Role málo charakterizovaného enzymu DHRS7 může být poodhalena na základě znalosti jeho interakčních partnerů, protože proteiny v buňce obvykle nepracují samy, ale jsou součástí obrovského proteinového komplexu, označeného jako "interactome". Poznání takových interakcí nám pomáhá porozumět funkci a regulaci proteinů uvnitř buněk nebo organismu. Cílem této studie je výzkum proteinů interagujících s DHRS7 pomocí metody koimunoprecipice. Imunoprecipitace byla zavedena s využitím dostupné protilátky...
|
|
|
Zavedení afinitní separace do purifikačního protokolu lidských membránově vázaných enzymů redukujícících karbonylové sloučeniny
Štýbnarová, Radka ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Skarka, Adam (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Radka Štýbnarová Školitel: RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název diplomové práce: Zavedení afinitní separace do purifikačního protokolu lidských membránově vázaných enzymů redukujících karbonylové sloučeniny Karbonyl-redukující enzymy hrají důležitou roli v metabolismu mnohých eobiotik (steroidů, prostaglandinů) i xenobiotik (doxorubicinu, daunorubicinu, oracinu, NNK, haloperidolu). Vzhledem k jejich substrátové specifitě hrají také důležitou roli ve vývoji některých onemocnění, jako je rakovina závislá na hormonech nebo metabolický syndrom. Zatímco cytosolické karbonyl-redukující enzymy jsou dobře charakterizovány, informací o membránově vázaných je vzhledem k jejich náročnému studování podstatně méně. V současnosti jsou popsány pouze tři mikrosomální karbonyl-redukující enzymy účastnící se metabolismu xenobiotik (11β-HSD1, DHRS7 and DHRS3), z nichž pouze 11β-HSD1 je dobře charakterizována. Nicméně, na základě výzkumu protinádorového léčiva oracinu a jeho stereospecifity redukce se předpokládá existence dalších mikrosomálních karbonyl-redukujících enzymů, účastnících se jeho metabolismu a inaktivace. Abychom mohli izolovat tyto "neznámé" enzymy, byl vyvinut afinitní nosič s imobilizovaným ligandem...
|
|
| |
|
|
Vliv monepantelu na expresi biotransformačních enzymů ovce
Štolcová, Tereza ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Tereza Štolcová Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová Ph.D. Název práce: Vliv monepantelu na expresi biotransformačních enzymů ovce Monepantel (MOP) představuje nové anthelmintikum ze skupiny amino-acetonitrilových derivátů, s odlišným mechanismem účinku oproti klasickým širokospektrým anthelmintikům. Používá se na léčbu a kontrolu gastrointestinálních nematodóz u ovcí a skotu. Tato práce se zaměřuje na vliv MOP na expresi vybraných cytochromů P450 (CYP) u ovcí in vivo a in vitro. K in vivo experimentům byla použita játra ovcí, kterým byl podán MOP v doporučené terapeutické dávce. Kontrolní skupině zvířat nebylo léčivo podáno. Při in vitro pokusech byly pozorovány změny v expresi mRNA vybraných CYP po 24 hodinové inkubaci primárních kultur ovčích hepatocytů s 10 μM MOP. Ke stanovení transkripčních hladin mRNA byla využita metoda qPCR (kvantitativní PCR v reálném čase). Výsledky in vivo i in vitro experimentů svědčí o výrazném nárůstu v expresi isoformy CYP3A24. Indukční efekt monepantelu byl dokonce vyšší, než indukční efekt známého CYP3A induktoru rifampicinu. Indukce enzymů CYP3A může mít vážné farmakologické anebo toxikologické důsledky. Při současném (případně následném) podání jiných léčiv s MOP...
|
|
|
Funkce a stanovení sulfotransferázy v kůži
Hekrlová, Jana ; Zemanová, Lucie (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Jana Hekrlová Školitel: Mgr. Martina Moravcová, Ph.D. RNDr. Lucie Zemanová, Ph.D. Název diplomové práce: Funkce a stanovení sulfotransferázy v kůži Sulfotransferázy jsou enzymy nacházející se v tenkém střevě, svalech, prostatě a v menší míře v placentě, průdušnici, plicích a kůži, které se podílejí na sulfonaci steroidních hormonů, neurostransmiterů a dalších endogenních molekul. Významnou roli hrají při biotransformaci xenobiotik. Mezi nejdůležitějšího zástupce skupiny transferáz v kůži řadíme cholesterolsulfotransferázu (SULT2B1b), jejíž funkcí je katalyzovat přenos sulfoskupiny na cholesterol. SULT2B1b hraje významnou roli ve tvorbě kožní bariéry a také ve stárnoucí kůži. Sulfonací cholesterolu katalyzovanou SULT2B1b vzniká v epidermis cholesterol sulfát (CHS). CHS je významnou komponentou lipidů v epidermis. CHS má regulační roli v procesu formovaní kožní bariéry a deskvamace kůže, tedy při intercelulárních adhezivních interakcích. Cílem práce bylo najít vhodnou metodu a optimální podmínky pro měření aktivity SULT2B1b tak, aby byla metodika použitelná pro stanovení v bezbuněčném a rovněž v buněčném systému. Z dostupných možných metodik jsme zvolili dvoustupňové reakce, kdy výsledný produkt...
|
|
|
Konkurenční boj na trati Praha-Ostrava v českých denících
Zemanová, Lucie ; Jirků, Jan (vedoucí práce) ; Vysloužilová, Kristýna (oponent)
Diplomová práce s názvem Konkurenční boj na trati Praha-Ostrava v českých denících, se zabývá způsobem, jakým média informovala o dění na železnici v době nástupu třetího dopravce na tuto trať v období od 1. 10. 2012 do 1. 2. 2013. Autorka vychází z teorie o objektivitě a nestrannosti médií, která předpokládá, že média budou informovat o dění na železnici z různých pohledů a dají stejný prostor k vyjádření všem dopravcům. V úvodu práce byly definovány podstatné pojmy k tématu jako konkurence a konkurenceschopnost. Dále také teoretické koncepty objektivity a nestrannosti tisku, z nichž výzkum vychází. Součástí práce jsou profily konkurenčních dopravních společností České dráhy, STUDENT AGENCY a LEO Express a významné události na železnici ve zkoumaném období. Mezi důležité teoretické části práce patří také metodika výzkumu, kde autorka vymezila výzkumné techniky a specifikovala analyzovaný materiál. Základem práce je kvantitativní analýza 61 relevantních článků věnovaných železnici v období 1. 10. 2012 - 1. 2. 2013. Zkoumány byly příspěvky z deníků MF Dnes, Lidové noviny a Hospodářské noviny. Výsledky jsou interpretovány a znázorněny pomocí grafů. Závěr předkládá doporučení ohledně další možnosti replikace výzkumu.
|
|
|
Optimalizace exprese vybrané lidské karbonylreduktasy v Escherichia coli
Ježková, Veronika ; Novotná, Eva (vedoucí práce) ; Zemanová, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Řešitel: Bc. Veronika Ježková Vedoucí práce: RNDr. Eva Novotná, PhD. Název práce: Optimalizace exprese vybrané lidské karbonylreduktasy v Escherichia coli Diplomová práce s názvem Optimalizace exprese vybrané lidské karbonylreduktasy v Escherichia coli je členěna na dvě části, teoretickou a experimentální. Teoretická část představuje stručný souhrn informací o vybraných enzymech karbonylreduktase 1 (CBR1), chinon-oxidoreduktase (NQO1) a enzymu DHRS2 (Hep27). Její součástí je i teoretický souhrn laboratorních metod, které byly použity v experimentální části. Experimentální část si klade za cíl optimalizaci expresních podmínek těchto vybraných enzymů v bakteriálním expresním systému Lemo21(DE3). Plasmid pET-28b(+), který kóduje naše vybrané enzymy, jsme teplotním šokem transformovali do kompetentních bakteriálních buněk Lemo21(DE3), v nichž probíhala proteinová exprese za různých koncentrací L-rhamnosy. Exprimovaný rekombinantní protein NQO1 jsme poté purifikovali metodou afinitní chromatografie. Úspěšnost exprese proteinů jsme ověřovali SDS-PAGE, popřípadě pomocí Western Blotu. Z výsledků získaných elektroforézou je patrné, že se podařilo úspěšně exprimovat enzym karbonylreduktasu 1 za různých koncentrací...
|
host ::
RSS.