|
|
Screening produkce extremozymů u vybraných extrémofilních producentů PHA
Dyagilev, Dmitry ; Obruča, Stanislav (oponent) ; Pernicová, Iva (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se zabývá screeningem produkce extraceluárních hydrolytických enzymů u termofilních mikroorganismů rodů Aneurinibacillus, Brevibacillus, Chelatococcus Pseudomonas, Schlegelella, Tepidimonas a Caldimonas. U zkoumaných mikroorganismů byla testována schopnost produkce vybraných enzymů, konkrétně proteáz, lipáz, amyláz, xylanáz, celuláz a pektináz. Takové testování dalo možnost posoudit, u kterých mikroorganismů je možné pozorovat produkci konkrétních enzymů. Na základě výsledků screeningu bylo zjištěno, že Schlegelella aquatica LMG 23380, Tepidimonas fonticaldi LMG 26746 a zkoumané mikroorganismy z rodu Chelatococcus neprojevily schopnost extracelulárně produkovat žádný z testovaných enzymů. U přírodních izolátů Brevibacillus borstelensis LK 99 a Aneurinibacillus thermoaerophilus LK 102 byla detekována pouze schopnost produkce lipolytických enzymů. Jako univerzální producent všech vybraných extremozymů vystupuje izolát Brevibacillus borstelensis Bz. U vybraných producentů bylo provedeno stanovení aktivity enzymů. Bakterie Brevibacillus borstelensis Bz dokázala schopnost produkce všech šesti vybraných hydrolytických enzymů a také má nejvyšší aktivitu lipáz, xylanáz, celuláz a pektináz z testovaných mikroorganismů. Nejvyšší proteolytickou aktivita byla naměřena u bakterie Thermomonas hydrothermalis DSM 14834 při kultivaci na odstředěném sušeném mléce.
|
|
|
Příprava mutantního serpinu z klíštěte \kur{Ixodes ricinus}
EDEROVÁ, Monika
Do P1 místa serpinu Iripin-1 pocházejícího ze slin klíštěte Ixodes ricinus byla pomocí specifických primerů zavedena bodová mutace zaměňující arginin za tryptofan. Protein obsahující tuto mutaci byl exprimován v chemicky kompetentních buňkách Escherichia coli. Následně byl z těchto buněk extrahován a přečištěn pomocí afinitní a rozměrově-vylučovací chromatografie. Aby byl ověřen dopad zavedené bodové mutace, byla otestována schopnost získaného proteinu tvořit kovalentní komplexy s trypsinem.
|
|
|
Selected proteolytic aspects as targets to combat ticks and tick borne pathogens
HARTMANN, David
Ticks and tick-borne diseases (TBD) represent a growing global burden for both human and animal health. Tick-host-pathogen interactions have evolved through dynamic processes that accommodated the genetic traits of the hosts, pathogens transmitted, and the vector tick species that mediate their development and survival. As in other parasites, proteases and proteolysis have been found as one of the key factors in this interaction triangle. This thesis is focused on selected proteolytic aspects of tick and tick-borne diseases: (i) processing of host blood as a source of nutrients and energy (hematophagy) as a continuum of the long-term goal of the Laboratory of Vector Immunology, that established the currently accepted model of multienzyme degradation of host blood proteins by ticks (ii) proteases in innate immunity (iii) validation of Babesia proteasome as a potential therapeutic target against the tick transmitted apicomplexan parasites.
|
|
|
The role of NADPH oxidase and ros in invadopodia formation
Hanušová, Kristýna ; Brábek, Jan (vedoucí práce) ; Vrbacký, Marek (oponent)
Invadopodia, jako specifické organely nádorových buněk umožňující jim pohyb a tudíž i šíření po organismu a tvorbu metastáz, jsou jedním z možných slibných cílů pro nádorovou terapii. V poslední době vyšly na jevo mnohé zajímavé skutečnosti o vzniku invadopodií a mechanismu jejich fungování. Invadopodia jsou místy degradace ECM extracelulárními proteázami umožňující invazivitu nádorových buněk. Pro vznik invadopodií je nezbytná přesně lokalizovaná zvýšená tvorba reaktivních kyslíkových radikálů, které se jako důležité signální molekuly účastní mnoha dějů vedoucích k tvorbě invadopodií. ROS v nádorových buňkách jsou produkovány především specifickými extramitochondriálními NADPH oxidázami (Nox). V poslední době bylo odhaleno několik regulačních molekul, které se podílí na vzniku těchto Nox a jejich lokalizaci do místa vzniku invadopodií (Tks organizační proteiny). Dále byla v produkci ROS a následném vzniku invadopodií potvrzena regulační role kinázy Src. Klíčová slova: degradace ECM, invadopodia, invaze, proteázy, Nox, ROS, Src kináza, Tks proteiny
|
|
|
Screening produkce extremozymů u vybraných extrémofilních producentů PHA
Dyagilev, Dmitry ; Obruča, Stanislav (oponent) ; Pernicová, Iva (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se zabývá screeningem produkce extraceluárních hydrolytických enzymů u termofilních mikroorganismů rodů Aneurinibacillus, Brevibacillus, Chelatococcus Pseudomonas, Schlegelella, Tepidimonas a Caldimonas. U zkoumaných mikroorganismů byla testována schopnost produkce vybraných enzymů, konkrétně proteáz, lipáz, amyláz, xylanáz, celuláz a pektináz. Takové testování dalo možnost posoudit, u kterých mikroorganismů je možné pozorovat produkci konkrétních enzymů. Na základě výsledků screeningu bylo zjištěno, že Schlegelella aquatica LMG 23380, Tepidimonas fonticaldi LMG 26746 a zkoumané mikroorganismy z rodu Chelatococcus neprojevily schopnost extracelulárně produkovat žádný z testovaných enzymů. U přírodních izolátů Brevibacillus borstelensis LK 99 a Aneurinibacillus thermoaerophilus LK 102 byla detekována pouze schopnost produkce lipolytických enzymů. Jako univerzální producent všech vybraných extremozymů vystupuje izolát Brevibacillus borstelensis Bz. U vybraných producentů bylo provedeno stanovení aktivity enzymů. Bakterie Brevibacillus borstelensis Bz dokázala schopnost produkce všech šesti vybraných hydrolytických enzymů a také má nejvyšší aktivitu lipáz, xylanáz, celuláz a pektináz z testovaných mikroorganismů. Nejvyšší proteolytickou aktivita byla naměřena u bakterie Thermomonas hydrothermalis DSM 14834 při kultivaci na odstředěném sušeném mléce.
|
|
|
Vápnění lesních půd ve smrkových monokulturách ve vztahu k minerálním formám dusíku
Končel, Karel
Na vápnění lesních půd a jeho důsledky pro lesní ekosystém je možné nahlížet z mnoha úhlů, přičemž hodnocení vlivů vápnění se může výrazně lišit. Pro hodnocení vlivu vápnění na minerální formy dusíku a aktivitu půdních proteáz a ureáz byla využita experimentálně povápněná plocha jemně mletým dolomitickým vápencem v dávkách 2, 3, 4, 6, 9, 26 t·ha-1. Z každé varianty byly odebírány směsné půdní vzorky z humifikačního horizontu H a organominerálního horizontu Ah, které byly dále upraveny a podrobeny laboratorním analýzám. Byl zaznamenán vliv vápnění na zvýšení obsahu amonného i dusičnanového dusíku a aktivitu proteáz. V případě obsahu NH4+,NO3-, aktivity půdních proteáz a ureáz byly zaznamenány rozdíly ve vazbě na změnu aplikační dávky dolomitického vápence.
|
|
|
Možnosti snížení obsahu dusíkatých látek v krmných směsích pro brojlerová kuřata
Rada, Vojtěch
Cílem disertační práce bylo zjistit vliv přídavku exogenní proteázy (EP) v krmných směsích (KS) pro brojlerová kuřata se sníženým obsahem dusíkatých látek (NL) o 4 a o 8 % na růstové parametry, kvalitu JUT, zdánlivou ileální stravitelnost aminokyselin a aktivitu proteáz v jejunu u brojlerových kuřat. Současně byl zkoumán vliv EP na dané parametry při zvýšené hladině řepkového extrahovaného šrotu (ŘEŠ) v KS. Přídavek EP do KS s 4% snížením NL neměl statisticky průkazný (P>0,05) vliv na růst, konverzi a příjem krmiva, kvalitu JUT, ani na zdánlivou ileální stravitelnost aminokyselin a aktivitu proteáz v jejunu brojlerových kuřat. Vyšší obsah ŘEŠ v KS se 4% snížením NL negativně (P<0,05) ovlivnil aktivitu proteáz v jejunu. Přídavek EP do KS s 8% snížením NL statisticky průkazně (P<0,05) zvýšil průměrnou živou hmotnost kuřat v 17. a 24. dnu věku kuřat. Ve vyšším věku již EP neovlivnila živou hmotnost kuřat a celkovou konverzi krmiva. Slepičky s příjmem KS s 8% snížením NL měli průkazně (P<0,05) nižší hmotnost prsní svaloviny a jatečná hodnota. Přídavek proteázy do KS s 8% snížením NL statisticky významně (P<0,001) snížil stravitelnost Pro a stravitelnost Tyr (P<0,05). Proteáza neměla průkazný (P>0,05) vliv na aktivitu proteáz v jejunu u kuřat s příjmem KS se 8 % snížením NL. Vyšší obsah ŘEŠ v KS se 8 % snížením NL průkazně snížil (P<0,05) zdánlivou ileální stravitelnost Pro a prokazatelně (P<0,05) zvýšil aktivitu proteáz v jejunu brojlerových kuřat.
|
|
|
Fenotypizace proteolytických aktivit pomocí fluorogenních knihoven
Pospíšil, Šimon ; Míšek, Jiří (vedoucí práce) ; Hocek, Michal (oponent)
Tato práce se zabývá přípravou kombinatoriálních knihoven peptidů sloužících jako platformy pro fenotypizaci proteáz. Primárním cílem byla příprava knihovny fluorogenních peptidů na pevné fázi a screening proteáz pomocí fluorescence. Dále byla studována možnost přípravy DNA-kódovaných knihoven na pevné fázi. Z důvodů nereaktivity specifických proteáz s peptidy na pevné fázi byla následně pevná fáze zcela opuštěna a bylo přistoupeno k přípravě DNA-kódované knihovny peptidů v roztoku. Pomocí modelového DNA-kódovaného dipeptidu s terminálním biotinem byl ověřen tento nový princip testování proteolytických aktivit proteáz. Dále byla připravena kombinatoriální knihovna DNA-kódovaných hexapeptidů. I přes nízký výtěžek knihovny byla ověřena možnost DNA kódování, amplifikovatelnost takto připravených molekul a možnost separace na základě biotinu. Integrita hexapeptidové části a testování s proteázami je předmětem dalšího studia.
|
|
|
The role of NADPH oxidase and ros in invadopodia formation
Hanušová, Kristýna ; Vrbacký, Marek (oponent) ; Brábek, Jan (vedoucí práce)
Invadopodia, jako specifické organely nádorových buněk umožňující jim pohyb a tudíž i šíření po organismu a tvorbu metastáz, jsou jedním z možných slibných cílů pro nádorovou terapii. V poslední době vyšly na jevo mnohé zajímavé skutečnosti o vzniku invadopodií a mechanismu jejich fungování. Invadopodia jsou místy degradace ECM extracelulárními proteázami umožňující invazivitu nádorových buněk. Pro vznik invadopodií je nezbytná přesně lokalizovaná zvýšená tvorba reaktivních kyslíkových radikálů, které se jako důležité signální molekuly účastní mnoha dějů vedoucích k tvorbě invadopodií. ROS v nádorových buňkách jsou produkovány především specifickými extramitochondriálními NADPH oxidázami (Nox). V poslední době bylo odhaleno několik regulačních molekul, které se podílí na vzniku těchto Nox a jejich lokalizaci do místa vzniku invadopodií (Tks organizační proteiny). Dále byla v produkci ROS a následném vzniku invadopodií potvrzena regulační role kinázy Src. Klíčová slova: degradace ECM, invadopodia, invaze, proteázy, Nox, ROS, Src kináza, Tks proteiny
|
|
|
Stanovení enzymových aktivit v kompostu
Pernicová, Iva ; doc.Mgr.Pavlína Pelcová, Ph.D. (oponent) ; Voběrková, Stanislava (vedoucí práce)
Tato bakalářská práce se zabývá stanovením enzymových aktivit v kompostu a posuzuje jejich změny v průběhu kompostování. Změny aktivity jednotlivých enzymů slouží jako ukazatele činnosti mikroorganismů, které se v kompostu nacházejí. V praktické části práce byly stanoveny změny aktivity proteáz, celuláz, lipáz, dehydrogenáz a ureáz během 21 dnů kompostování za laboratorních podmínek. Sledována byla také změna pH. Změny hodnot pH a všech aktivit enzymů kromě ureáz vykazovaly v prvním týdnu stejný trend související s využíváním dostupných substrátů. Změny aktivit klíčových enzymů v kompostu za laboratorních podmínek byly srovnány se změnami aktivit v kompostu za reálných podmínek, což je ukazatelem rozdílného průběhu kompostování za daných podmínek.
|
host ::
RSS.