|
|
Stanovení enantiomerů aminokyselin metodou HPLC
Michalčíková, Regina ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Janečková, Lucie (oponent)
Abstakt Bakalářská práce se zabývá stanovením enantiomerů aminokyselin, v praktické části konkrétně alaninu, pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie za využití chirálních stacionárních fází na bázi teikoplaninu. Rešeršní část je zaměřena na shrnutí základní problematiky chirality a chirálních aminokyselin v potravinách, na charakteristiku vysokoúčinné kapalinové chromatografie, jako jedné z nejvhodnějších metod k enantioseparaci aminokyselin, a popis metod derivatizace, jež se využívají ke zvýšení citlivosti stanovení enantiomerů aminokyselin. Experimentální část se pak zabývá separací jednotlivých enantiomerních forem alaninu, volbou vhodného separačního systému pro tuto separaci a stanovením D- a L- alaninu v ovocném džusu.
|
|
|
Charakterizace chirálních a achirálních chromatografických separačních systémů
Kučerová, Gabriela ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Čabala, Radomír (oponent) ; Ševčík, Juraj (oponent)
Předkládaná dizertační práce, tvořená komentovaným souborem pěti publikací, se zabývá charakterizací a aplikačním potenciálem cyklodextrinových a polysacharidových chirálních stacionárních fází a dále stacionárních fází na bázi makrocyklických antibiotik, přičemž není studován pouze vliv daných stacionárních fází, ale je kladen důraz i na složení mobilní fáze. Tento přístup zajišťuje komplexní pohled na daný separační systém. Byly studovány systémy s rozdílnou povahou chirálního selektoru ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii. Jednalo se o chirální stacionární fáze na bázi makrocyklických antibiotik a derivatizovaných polysacharidů, přičemž pro enantioseparaci nekódovaných aminokyselin se jako nejvhodnější jevil teikoplaninový chirální selektor. Byla provedena charakterizace nové kationické chirální stacionární fáze na bázi cyklodextrinu připravené pomocí tzv. dynamického pokrývání. Charakterizační metoda lineárních vztahů volných energií byla použita pro porovnání dvou separačních systémů, tj. nově připravené stacionární fáze s komerčně dostupnou stacionární fází. Na základě získaných výsledků se pro separaci různých achirálních skupin analytů jako vhodnější jeví nově připravená stacionární fáze. Dynamickým pokrýváním připravená další stacionární fáze, která byla porovnána s chromatografickým...
|
|
|
Využití vysokoúčinných separačních metod pro analýzy biologicky aktivních látek
Adamusová, Hana ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent) ; Tůma, Petr (oponent)
V rámci první části disertační práce byla vypracována nová analytická metoda HPLC-MS/MS pro sledování koncentračních změn 17β-estradiolu (βE2) během kapacitace myších spermií in vitro. Kapacitace byla prováděna se třemi počátečními koncentracemi βE2 (200, 20 a 2 μg/L). Pro všechny koncentrace byl pozorován obdobný trend závislosti koncentrace nevázaného βE2 na čase kapacitace. Koncentrace βE2 se snižovala, aby dosáhla svého minima a poté se opět zvyšovala. Pozice minima se lišila pro jednotlivé testované koncentrace βE2. Experimentálně získané výsledky byly podrobeny kinetické analýze. Křivky proložené experimentálně získanými body vykazovaly autokatalytický charakter. Pro shodu mezi křivkami, získanými proložením experimentálními body, a teoreticky vypočítanými křivkami je nutné předpokládat, že prvním krokem je adsorpce βE2 na povrch spermií řízená Langmuirovou izotermou. Kinetická studie byla použita i pro studium působení fluoridů a fluorohlinitých komplexů na kapacitaci myších spermií. Bylo zjištěno, že teoreticky získané křivky vykazují velmi dobrou shodu s experimentálně získanými body, tento fakt potvrzuje mechanismus kinetiky kapacitace myších spermií. Ve druhé části této disertační práce byly vyvinuty dvě analytické metody pro chirální separaci aclidinium bromidu (AB) a tapentadolu...
|
|
|
Chirální separace biologicky aktivních látek v chromatografii
Landl, David ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
- 3 - Abstrakt v češtině Tato diplomová práce je zaměřena na zhodnocení a porovnání enantioselektivního potenciálu dvou kolon, CHIRAL ART Amylose-SA a CDShell-RSP, na sadě 29 chirálních léčiv metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Separace enantiomerů probíhala ve třech módech: reverzním, normálním a polárně-organickém. Kolona CHIRAL ART Amylose-SA byla testována v normálním módu, kolona CDShell- RSP v reverzním a polárně-organickém. Kolona CHIRAL ART Amylose-SA obsahuje jako chirální stacionární fázi amylózu tris(3,5-dimethylfenylkarbamát), která je imobilizovaná na porézních silikagelových částicích o velkostí 3 µm. Kolona CDShell-RSP obsahuje jako chirální stacionární fázi hydroxypropyl-β-cyklodextrin, který je kovalentně navázán na pelikulárních částicích o velikosti 2,7 µm. V normálním módu byly použity mobilní fáze složené z hexanu a propan-2-olu. Dále byl testován vliv aditiv (triethylamin, diethylamin, kyselina trifluoroctová, směs diethylaminu a kyseliny trifluoroctové) v mobilní fázi na enantioseparaci analytů. Nejuniverzálnějším aditivem byla směs diethylaminu a kyseliny trifluoroctové. Celkově se na koloně CHIRAL ART Amylose-SA enantioseparovalo 22 analytů, z toho 10 na základní linii. Mobilní fáze pro reverzní mód byly složené z 10 mM octanu amonného (pH 3,0; 4,0; 6,5) a methanolu nebo...
|
|
|
Využití vysokoúčinných separačních metod pro chirální i achirální separace
Šubová, Martina ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent) ; Fischer, Jan (oponent)
V první části disertační práce byla na sadě analytů pomocí kapilární elektroforézy otestována schopnost chirální separace nejprve dvou permanentně kladně nabitých cyklodextrinových derivátů, a to PEMEDA- a PEMPDA-β-cyklodextrinu. Výborné enantioseparační vlastnosti vykazovaly oba selektory v přítomnosti N-boc-D,L-tryptofanu, u kterého docházelo k úplnému oddělení enantiomerů již při 0,5 mmol·l-1 koncentraci cyklodextrinového derivátu v základním elektrolytu. Rozdíly mezi enantiodiskriminačními vlastnostmi jednotlivých derivátů však byly minimální. Druhou testovanou skupinu tvořily dva deriváty cyklodextrinu, a to 2-O- a 3-O-cinnamyl- α-cyklodextrin. Tyto deriváty jsou schopné tvořit supramolekulární polymery ve vodných roztocích, které se při zvýšené teplotě rozpadají. Tvorba těchto polymerů byla otestována pomocí NMR a DLS experimentů. Při testování chirálních separační schopností na skupině vybraných analytů ani jeden z uvedených cyklodextrinových derivátů nevykazoval enantiodiskriminační vlastnosti. V rámci antipredační studie byla pro separaci deseti derivátů pterinu a riboflavinu, které se mohou ve formě pigmentů vyskytovat u hmyzu, plazů nebo obojživelníků jako součást jejich výstražného zbarvení, použita HPLC-MS/MS metoda pracující v HILIC módu. Vyvinutá metodika byla aplikována při analýze...
|
|
|
Chirální separace diquatů a stanovení konstant stability jejich komplexů s cyklodextriny kapilární elektroforézou
Bílek, Jan ; Kašička, Václav (vedoucí práce) ; Jelínek, Ivan (oponent)
Kapilární zόnová elektroforéza byla využita pro chirální separaci jedenácti derivátů diquatu (DQ). Tyto N-heteroaromatické dikationty obsahující strukturní motiv 2,2'-bipyridinu jsou v současné době studovány pro své zajímavé redoxní vlastnosti a axiální chiralitu. Kombinace těchto vlastností může v budoucnu přinést zajímavé využití. Pro chirální separace DQ byly jako chirální selektory (CS) použity komerčně dostupné náhodně sulfatované α-, β-, a γ-cyklodextriny o vysokém stupni substituce (HS-α-CD, HS-β-CD, HS-γ-CD). Při použití všech uvedených CS bylo dosaženo velmi dobrého chirálního dělení. Separace enantiomerů na základní linii bylo dosaženo pro 82 %, 91 %, respektive 100 % analyzovaných derivátů DQ v přítomnosti HS-α-CD, HS- β-CD, respektive HS-γ-CD. Nejvyšších separačních účinností a rozlišení enantiomerů DQ bylo dosaženo při elektroforetické separaci v základním elektrolytu (BGE) obsahujícím 22 mmol/L NaOH, 35 mmol/L H3PO4 (pH 2,5) a 6 mmol/L HS-β-CD. Pomocí tří dostupných neracemických DQ byla provedena identifikace migračního pořadí jednotlivých M- a P-enantiomerů příslušných DQ. Metodou kapilární afinitní elektroforézy byly experimentálně zjištěny závislosti efektivní elektroforetické pohyblivosti enantiomerů DQ na koncentraci HS-α-CD, HS- β-CD, nebo HS-γ-CD v BGE. Efektivní pohyblivosti...
|
|
|
Charakterizace nových chirálních separačních systémů pro použití v HPLC
Vozka, Jiří ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Sýkora, David (oponent) ; Petr, Jan (oponent)
Souhrn Dizertační práce je zaměřena na fyzikálně-chemickou charakterizaci interakčních mechanizmů chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů. Správná interpretace retenčních a enantiodiskriminačních interakcí usnadní vývoj, validaci a optimalizaci enantioselektivních metod využívajících tyto fáze. Nejdříve byly studovány interakční mechanizmy tří komerčně dostupných chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů v podmínkách normálního separačního módu kapalinové chromatografie. Jednalo se o stacionární fáze na bázi dimethylfenyl karbamátu cyklofruktanu 7, R-naftylethyl karbamátu cyklofruktanu 6 a izopropyl karbamátu cyklofruktanu 6. Jako výchozí přístup byl zvolen model lineárních vztahů volných energií. Na základě tohoto modelu byly jako hlavní interakce přispívající v různé míře k retenci ve všech separačních systémech s cyklofruktanovými stacionárními fázemi určeny: schopnost poskytovat vodík pro tvorbu vodíkové interakce a dipolarita/polarizibilita, disperzní interakce pak retenci v různé míře snižují. Pro objasnění vlivu sacharidového skeletu na chirální separace byly následně cyklofruktanové stacionární fáze porovnány s cyklodextrinovými analogy. Cyklofruktanové chirální stacionární fáze prokázaly v podmínkách normálního módu mimořádnou...
|
|
|
Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek.
Novák, Martin ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Student: Bc. Martin Novák Školitel: doc. PharmDr. Radim Kučera, Ph.D. Konzultant Mgr. et Mgr. Rafael Doležal, Ph.D. Název diplomové práce: Optimalizace chromatografických podmínek pro chirální separaci biologicky aktivních látek Diplomová práce se zaměřuje na vývoj HPLC - UV metody pro stanovení enantiomerů látky K 1277 se strukturním vzorcem N - (2 - ((6 - chlor - 1,2,3,4 - tetrahydroakridin - 9 - yl) amino) hexyl - 2 - amino - 3 - (1H - indol - 3 - yl) propylamid dihydro - chlorid, která je vybraným zástupcem ze skupiny hybridních sloučenin takrinu a tryprofanu. Hybridy syntetizované z molekul takrinu a tryptofanu je možné zařadit mezi velmi slibné kandidáty potenciálních léčiv působících v terapii Alzheimerovy choroby. V teoretické části práce přináší seznámení se základní charakteristikou chirality molekul, možnostmi a principy chirálních separačních metod, patofyziologií a klinickými projevy Alzheimerovy nemoci, možnostmi léčby Alzheimerovy nemoci a se stručnou charakteristikou hybridních sloučenin takrinu a tryptofanu. Cílem diplomové práce je nalezení vhodné metody separace enantiomerů vznikajících syntézou z takrinového skeletu a tryptofanové části. Experimentální část práce se...
|
|
|
Využití HPLC v chirálních separacích VI.
Marvalová, Jana ; Kučera, Radim (vedoucí práce) ; Pilařová, Pavla (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Autor: Jana Marvalová Vedoucí diplomové práce: doc. PharmDr. Radim Kučera, PhD. Název diplomové práce: Využití HPLC v chirálních separacích VI. Boranové klastry jsou synteticky připravované látky, které jsou intenzivně studovány v souvislosti s borovou záchytovou neutronovou terapií, jejich náhradou fenylových skupin molekul již známých léčiv a také například jako potencionální inhibitory HIV proteázy. Boranové klastry jsou symetrické molekuly, nicméně endo- nebo exoskeletální substitucí je symetrie klastru narušena za vzniku enantiomerů. Tato práce je zaměřena na zkoumání chromatografických podmínek pro chirální separace derivátů cosanů (bis(dikarbolidů) a 7,8-dikarba-nido-undekaborátů s využitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie a chirálních selektorů na bázi celulosy a amylosy v reverzně fázovém uspořádání. Pro tento účel byly vybrány kolony Lux Cellulose-1 a Lux Amylose-1 s chirálními selektory tris(3,5-dimethylfenylkarbamát) celulosy a tris(3,5-dimethylfenylkarbamát) amylosy. Mobilní fáze byla tvořena směsí methanolu, nebo acetonitrilu s vodným roztokem chloristanu sodného, nebo chloridu sodného. Z osmnácti testovaných analytů bylo na koloně Lux Cellulose-1 alespoň...
|
|
|
Charakterizace nových chirálních separačních systémů pro použití v HPLC
Vozka, Jiří
Souhrn Dizertační práce je zaměřena na fyzikálně-chemickou charakterizaci interakčních mechanizmů chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů. Správná interpretace retenčních a enantiodiskriminačních interakcí usnadní vývoj, validaci a optimalizaci enantioselektivních metod využívajících tyto fáze. Nejdříve byly studovány interakční mechanizmy tří komerčně dostupných chirálních stacionárních fází na bázi derivatizovaných cyklofruktanů v podmínkách normálního separačního módu kapalinové chromatografie. Jednalo se o stacionární fáze na bázi dimethylfenyl karbamátu cyklofruktanu 7, R-naftylethyl karbamátu cyklofruktanu 6 a izopropyl karbamátu cyklofruktanu 6. Jako výchozí přístup byl zvolen model lineárních vztahů volných energií. Na základě tohoto modelu byly jako hlavní interakce přispívající v různé míře k retenci ve všech separačních systémech s cyklofruktanovými stacionárními fázemi určeny: schopnost poskytovat vodík pro tvorbu vodíkové interakce a dipolarita/polarizibilita, disperzní interakce pak retenci v různé míře snižují. Pro objasnění vlivu sacharidového skeletu na chirální separace byly následně cyklofruktanové stacionární fáze porovnány s cyklodextrinovými analogy. Cyklofruktanové chirální stacionární fáze prokázaly v podmínkách normálního módu mimořádnou...
|
host ::
RSS.