|
|
Cytochrome P-450: Study of structure and interactions using chemical modification, photo-initiated cross-linking and mass spectrometry
Ječmen, Tomáš ; Šulc, Miroslav (vedoucí práce) ; Petrák, Jiří (oponent) ; Šebela, Marek (oponent)
ABSTRAKT Systém oxygenas se smíšenou funkcí se v organismu podílí na biosyntéze endogenních a také metabolismu exogenních látek (např. léčiv nebo chemických prokarcinogenů). Substráty jsou biotransformovány terminálními oxygenasami systému - cytochromy P450 (P450). Katalytické vlastnosti některých jejich zástupců (např. studované izoformy 2B4) jsou pozměněny v přítomnosti redoxního partnera - cytochromu b5 (cyb5). Oba cytochromy jsou ukotveny hydrofobními doménami v lipidické membráně endoplasmatického retikula, zatímco jejich katalytické domény jsou exponovány do cytosolu buňky. K rozšíření současných znalostí o struktuře a interakcích studovaných cytochromů byly využity dva přístupy založené na kovalentním síťování aminokyselin v "nulové vzdálenosti" (angl. "zero-length cross-linking"): (1) chemické síťování činidlem 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl)carbodiimid (EDC) propojujícím ve vodném prostředí přístupné karboxylové skupiny s primárními aminy, a (2) síťování pomocí foto-labilního analogu methioninu (pMet), který se po aktivaci UV zářením může vázat na libovolnou aminokyselinu, a to v hydrofobním i hydrofilním prostředí. pMet byl do sekvence cyb5 inkorporován namísto methioninu během rekombinantní exprese proteinu v E. coli, která probíhala v limitním médiu obohaceném o aminokyselinový...
|
|
|
Možná úloha flavinových monooxygenas v metabolismu cizorodých látek
Cikánová, Magdaléna ; Hudeček, Jiří (vedoucí práce) ; Hodek, Petr (oponent)
Tato bakalářská práce je přehledem nejdůležitějších literárních údajů o flavinových monooxygenasách (FMO). Jedná se o enzymy, které se zapojují do oxygenace mnoha cizorodých látek, které jsou mírnými nukleofily, jde tedy o sloučeniny obsahující ve své molekule zejména dusík, síru, případně fosfor a selen. Ve svém katalytickém působení využívají FMO molekulárního kyslíku, podobně jako nejznámější cytochromy P450: molekula kyslíku je za přítomnosti NADPH redukčně aktivována, jeden atom kyslíku vstupuje do substrátu, a druhý je redukován na vodu. V mnoha případech si FMO konkurují s cytochromy P-450, často se tyto oxygenasové systémy prolínají, majoritní postavení mají však obvykle cytochrom P-450. V současné době byly popsány savčí, bakteriální, rostlinné FMO a FMO z kvasinek. V lidském organismu bylo doposud objeveno pět genů kódující FMO (FMO1-5), přičemž u třech z nich (FMO1- FMO3) byl prokázán genetický polymorfismus.
|
|
| |
|
| |
|
| |
|
| |
host ::
RSS.