|
|
Vývoj elektroanalytických metod pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu
Benešová, Lenka
Látky steroidní povahy jsou nedílnou součástí všech organismů. Patří mezi ně například žlučové kyseliny, steroidní hormony nebo některé vitaminy. Cholesterol je lipofilní složkou buněčných membrán. Jeho ukládání do cév v podobě nízkodenzitního lipoproteinu (LDL) má za následek závažné zdravotní komplikace jako je ateroskleróza a další. 7-dehydrocholesterol je prekurzorem cholesterolu a dalšího steroidu studovaného v této práci, cholekalciferolu (vitamin D3). Zvýšené množství 7-dehydrocholesterolu v důsledku deficitu 7-dehydrocholesterol reduktázy je příčinou rozvoje Smith- Lemli-Opitzova syndromu (SLOS), autosomálně recesivního genetického onemocnění vedoucího k různým stupňům mentální a fyzické retardace. Elektroanalytické metody se k detekci steroidních sloučenin využívají okrajově, jelikož redoxní aktivita řady steroidů, které neobsahují žádné nebo pouze izolované dvojné vazby na steroidním skeletu, je omezená. V rámci této disertační práce byly vyvíjeny voltametrické metody a metody založené na průtokové injekční analýze s multipulsní amperometrickou detekcí a amperometrickou detekcí při konstantním potenciálu pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu. Měření byla prováděna na pracovních diskových elektrodách, a to borem dopované diamantové elektrodě, elektrodě ze...
|
|
|
Vývoj elektroanalytických metod pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu
Benešová, Lenka ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Navrátil, Tomáš (oponent) ; Šelešovská, Renáta (oponent)
Látky steroidní povahy jsou nedílnou součástí všech organismů. Patří mezi ně například žlučové kyseliny, steroidní hormony nebo některé vitaminy. Cholesterol je lipofilní složkou buněčných membrán. Jeho ukládání do cév v podobě nízkodenzitního lipoproteinu (LDL) má za následek závažné zdravotní komplikace jako je ateroskleróza a další. 7-dehydrocholesterol je prekurzorem cholesterolu a dalšího steroidu studovaného v této práci, cholekalciferolu (vitamin D3). Zvýšené množství 7-dehydrocholesterolu v důsledku deficitu 7-dehydrocholesterol reduktázy je příčinou rozvoje Smith- Lemli-Opitzova syndromu (SLOS), autosomálně recesivního genetického onemocnění vedoucího k různým stupňům mentální a fyzické retardace. Elektroanalytické metody se k detekci steroidních sloučenin využívají okrajově, jelikož redoxní aktivita řady steroidů, které neobsahují žádné nebo pouze izolované dvojné vazby na steroidním skeletu, je omezená. V rámci této disertační práce byly vyvíjeny voltametrické metody a metody založené na průtokové injekční analýze s multipulsní amperometrickou detekcí a amperometrickou detekcí při konstantním potenciálu pro detekci cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu. Měření byla prováděna na pracovních diskových elektrodách, a to borem dopované diamantové elektrodě, elektrodě ze...
|
|
|
Stanovení cholesterolu, 7-dehydrocholesterolu a cholekalciferolu metodou HPLC se spektrofotometrickou a elektrochemickou detekcí
Dostálková, Lucie ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Vyskočil, Vlastimil (oponent)
Obsahem této práce je ověření možnosti současného stanovení tří strukturně příbuzných biologicky aktivních látek (cholesterol, 7-dehydrocholesterol a cholekalciferol) po předchozí separaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a následné elektrochemické (na borem dopované diamantové elektrodě) a spektrofotometrické detekci, které byly v práci porovnávány. Byl zkoumán vliv obsahu vody v mobilní fázi (v rozsahu 0-10 %) na retenční faktor analytů a jejich odezvu pro oba typy detektorů. Při všech zkoumaných obsazích vody byly analyty separovány až na základní linii. Při zvyšujícím se obsahu vody se zvyšoval retenční faktor analytů a také proud pozadí pro vyšší kladné detekční potenciály. Na základě zaznamenaných hydrodynamických voltamogramů byl určen optimální detekční potenciál + 1,8 V. Optimální vlnová délka pro spektrofotometrickou detekci byla 200 nm. Koncentrační závislost byla naměřena v prostředí 50 mmol l−1 chloristanu sodného v acetonitrilu ve směsi s vodou (95:5, v/v). Nižší hodnoty limitů detekce poskytoval spektrofotometrický detektor oproti elektrochemickému, který měl limit detekce cholesterolu 2,3 μmol l−1 , 7-dehydrocholesterolu 1,4 μmol l−1 a cholekalciferolu 0,6 μmol l−1 . Po extrakci analytů z modelového roztoku umělého séra a vzorku plodové vody bylo zjištěno, že při...
|
|
|
Voltametrické stanovení 7-dehydrocholesterolu jako biomarkeru Smithova-Lemliho-Opitzova syndromu
Zárybnická, Adéla ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Nesměrák, Karel (oponent)
Cílem této práce byl vývoj voltametrické metody pro stanovení 7-dehydrocholesterolu jako biomarkeru dědičného onemocnění Smithova-Lemliho-Opitzova syndromu. V případě tohoto onemocnění vzroste koncentrace 7-dehydrocholesterolu v plasmě řádově stokrát na stovky až tisíc µmol l-1 . Stanovení 7-dehydrocholesterolu probíhalo v této práci v umělém séru, které bylo připraveno tak, aby simulovalo podmínky postnatální diagnostiky Smithova-Lemliho-Opitzova syndromu. 7-dehydrocholesterol poskytuje dobře vyvinutý voltametrický signál okolo +0,8 V vs. Ag/AgNO3 v acetonitrilu. Pro stanovení 7-dehydrocholesterolu byla využita diferenční pulzní voltametre s optimalizovanými parametry. Přítomnost proteinu v umělém séru (lidský sérový album) měla za následek neakceptovatelně vysoký limit detekce metody (178 µmol l-1 v umělém séru). Z toho důvodu byl lidský sérový albumin ze vzorků umělého séra eliminován jeho vysrážením pomocí acetonitrilu a následným odstředěním vzniklé suspenze. Pomocí acetonitrilu byl také upraven poměr vodné a organické složky ve studovaném prostředí tak, aby bylo dosaženo optimální voltametrické odezvy 7-dehydrocholestrolu. S ohledem na ředění vzorku umělého séra a velikost voltametrické odezvy bylo zvoleno optimální prostředí pro stanovení 7-dehydrocholesterolu acetonitril - umělé sérum 9:1....
|
|
| |
|
|
Vývoj elektroanalytických metod pro detekci cholesterolu a 7-dehydrocholesterolu
Benešová, Lenka ; Schwarzová, Karolina (vedoucí práce) ; Dejmková, Hana (oponent)
Cílem této práce je vývoj elektroanalytických metod pro stanovení cholesterolu a 7-dehydrocholesterolu s využitím borem dopované diamantové elektrody na základě elektrochemické oxidace produktů dehydratační reakce těchto sterolů. Byly zvoleny dva přístupy, kdy v obou případech detekce probíhala v prostředí 0,1 mol.l-1 kyseliny chloristé v acetonitrilu s obsahem vody 0,43 % - 40 %. Metodou cyklické voltametrie bylo zjištěno, že potenciál oxidačních signálů se pro oba steroly značně liší, v prostředí 0,1 mol.l-1 HClO4 v acetonitrilu s 5% obsahem vody byla zaznamenána proudová maxima u +850 mV pro 7- dehydrocholesterol a +1500 mV pro cholesterol. Metodou diferenční pulzní voltametrie byly určeny meze detekce 7-dehydrocholesterolu (6,19 µmol.l-1 ) a cholesterolu (19,2 µmol.l-1 ) ve směsi. Druhým přístupem je metoda průtokové injekční analýzy s ampérometrickou detekcí. Byl optimalizován obsah vody v nosném elektrolytu, detekční potenciál a vzdálenost elektrody od ústí kapiláry při wall-jet uspořádání průtokové detekční cely. Z koncentračních závislostí směsí 7-dehydrocholesterolu a cholesterolu a při různých detekčních potenciálech Edet byly určeny limity detekce 0,61 - 3,43 µmol.l-1 . Metoda průtokové injekční analýzy s elektrochemickou detekcí byla použita pro stanovení koncentrace cholesterolu a 7-...
|
host ::
RSS.