|
|
Kvantitativní analýza léčiv v biologických materiálech separačními metodami
Maláková, Jana ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Polášek, Miroslav (oponent) ; Chládek, Jaroslav (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: PharmDr. Jana Maláková Školitel: Doc. PharmDr. Milan Nobilis, CSc. Název dizertační práce: Kvantitativní analýza léčiv v biologických materiálech separačními metodami Disertační práce uvádí instrumentální analytické metody určené k analýze léčiv a jejich metabolitů v biologických vzorcích za využití kapalinové a plynové chromatografie. Ve fázi optimalizace analytických podmínek byly testovány různé postupy přípravy vzorků. Od běžné precipitace bílkovin acetonitrilem (tento přístup byl aplikován např. při kvantitativní analýze cefuroximu), přes extrakci kapalina-kapalina (osvědčil se u metody analýzy topiramátu, 8-methoxypsoralenu) a konečně extrakty vhodné k separaci byly získány i extrakcí na pevné fázi s využitím sorbentů ve směsném módu (na principu reverzní fáze v kombinaci s iontovou výměnou) při analýze galantaminu a jeho metabolitů. Ultrafiltrace vzorků plazmy na na filtrech Microcon YM 10 umožnila oddělení volného a vázaného podílu léčiva a určení vazebnosti (u metody na stanovení cefuroximu). Vlastní chromatografické podmínky tj. volba plynové nebo kapalinové chromatografie, závisela na fyzikálně chemických vlastostech stanovovaného léčiva. A pokud tyto vlastnosti...
|
|
|
Analýza biologicky aktivních látek s využitím kapilární elektroforézy
Petrů, Klára ; Polášek, Miroslav (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Urbánek, Marek (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát Mgr. Klára Petrů Školitel Doc. RNDr. Miroslav Polášek, CSc. Název disertační práce Analýza biologicky aktivních látek s využitím kapilární elektroforézy Předložená práce se zabývá analýzou farmaceuticky významných kvartérních amoniových bází metodou kapilární elektroforézy (CE). V teoretické části jsou popsány principy kapilární elektroforézy a možné způsoby detekce spojené s touto technikou s důrazem na bezkontaktní vodivostní detekci (C4D) a spojení kapilární elektroforézy s hmotnostním spektrometrem (CE-MS). Dále jsou charakterizovány kvarterní amoniové sloučeniny, které byly předmětem studie - carbethopendecinium bromid, pankuronium bromid (PM), vekuronium bromid (VM) a rokuronium bromid (RM). Experimentální část popisuje vývoj a validaci nových CE metod, které nebyly v souvislosti s těmito látkami dříve popsány. Metody byly použity k analýze reálných farmaceutických přípravků. Ve všech případech byla C4D metodou volby pro detekci těchto látek málo absorbujících v UV oblasti. I. První část se zabývá analýzou antiseptické látky povahy tenzidu - septonexu. Základní elektrolyt (BGE) 30 mM MES o pH 7 s přídavkem 12,5 mg/ml 2-hydroxypropyl-β-cyklodextrinu a obsahem 20 % (v/v) ACN eliminoval adsopci...
|
|
|
Moderní trendy v úpravě vzorků biologického materiálu k analýze vybraných biologicky aktivních látek
Sadílek, Petr ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Barták, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Petr Sadílek Školitel: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Školitel specialista: Doc. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Název disertační práce: Moderní trendy v úpravě vzorků biologického materiálu k analýze vybraných biologicky aktivních látek Disertační práce se zabývá stanovením vybraných léčiv, jejich metabolitů a dalších biologicky aktivních látek v biologickém materiálu. Tato oblast instrumentální analýzy se dostává v posledních letech do popředí zájmu, zejména z důvodu monitorování a optimalizace léčby s cílem dosáhnout individuálně co nejefektivnější terapie s minimem nežádoucích vedlejších účinků, či z důvodů toxikologických. Práce se soustředila na celou analytickou fázi laboratorního vyšetření, tzn. nejen na vývoj a validaci chromatografických metod pro stanovení cílových analytů, ale zejména na přípravu vzorku biologického materiálu před vlastní analýzou. Tato fáze je pro samotné stanovení analytů z biologického materiálu naprosto nezbytná, neboť určuje nejen správnost výsledku laboratorního vyšetření, ale také životnost analytické instrumentace, zvláště chromatografických kolon. V současné době se stále nejvíce používají k přípravě vzorku k analýze tradiční extrakční techniky LLE a SPE,...
|
|
|
Akceleranty transdermální permeace: Studie vlivu struktury na akcelerační účinek.
Novotný, Michal ; Vávrová, Kateřina (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Rabišková, Miloslava (oponent)
Permeační akceleranty slouží k usnadnění prostupu léčiv přes kůži do systémové cirkulace či přilehlých tkání. Tato doktorská práce přímo navazuje na výsledky předchozích studií naší pracovní skupiny a věnuje se potenciálním permeačním akcelerantům dvou odlišných chemických skupin: derivátům dikarboxylových kyselin a Transkarbamu 12 a jeho analogům. Hlavním cílem bylo studovat vztahy mezi strukturou a účinkem těchto akcelerantů a přispět k objasnění mechanismu jejich účinku. Nejprve jsem se zabýval studiem strukturních vztahů u derivátů dikarboxylových kyselin. Připravil jsem sérii látek odvozených od kyseliny maleinové, fumarové, jantarové, (2R,3R)-vinné a meso-vinné. Schopnost těchto sloučenin urychlit prostup modelového léčiva theofylinu přes prasečí kůži plné tloušťky byla studována pomocí in vitro permeačních experimentů ve Franzových difuzních celách. Bylo zjištěno, že jednořetězcové amfifilní molekuly jsou mnohem účinnějšími akceleranty než odpovídající dvouřetězcové sloučeniny. Nejaktivnější látka celé série - monododecylester kyseliny maleinové (derivát s cis-dvojnou vazbou), vykázal významně větší schopnost urychlit přestup theofylinu přes kůži v porovnání s příslušným trans-derivátem. Dále bylo zjištěno, že aktivita látek s jednoduchou vazbou (derivátů kyseliny jantarové) je silně závislá...
|
|
|
Studium chirálních aspektů biotransformace léčiv instrumentálními analytickými metodami
Holmanová, Veronika ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Kovaříková, Petra (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Bc. Veronika Holmanová Školitel: Doc. PharmDr. Milan Nobilis, CSc. Název diplomové práce: Studium chirálních aspektů biotransformace léčiv instrumentálními analytickými metodami Byla vyvinuta nová chirální chromatografická metoda pro zhodnocení stereospecifity lidských a potkaních cytosolických karbonylreduktas a mikrosomálních oxidas zapojených do biotransformace nabumetonu. Vzniklá LLE-HPLC-PDA metoda umožňovala extrakci, separaci a UV detekci prochirálního nabumetonu a jeho metabolitů I.fáze biotransformace, včetně enantiomerů dvou chirálních produktů karbonylové redukce. Jako vnitřní standard sloužil methylester naproxenu. Pro liquid-liquid extrakci byl použit diethylether. Dostatečnou separaci 9 analytů zajišťovala za isokratických podmínek mobilní fáze o složení MeOH 1M NaClO4 pH 3 (75:25, v/v) ve spojení s Chiralcel OD-R 250mm×4.6 mm kolonou. Při průtoku 0,5 ml/min trvala jedna analýza 60 min. Efluent z kolony byl monitorován photodiode-array detektorem (zaznamenávající celé spektrum nebo vybrané vlnové délky - 225 a 265 nm). Výsledky biotransformace nabumetonu in vitro s cytosolickými a mikrosomálními frakcemi hepatocytů byly porovnány u dvou živočišných druhů (potkan,...
|
|
| |
|
| |
|
|
Phase II biotransformation of NSAID flobufen
Babú, Yogeeta ; Wsól, Vladimír (vedoucí práce) ; Nobilis, Milan (oponent) ; Kuchař, Miroslav (oponent)
Xenobiotika jsou chemické sloučeniny tělu cizí, které se obvykle tvoří syntetickými nebo abiotickými procesy. Syntetická xenobiotika mají často obrovský význam pro lidskou společnost a představují většinu chemických sloučenin z tak významných skupin, jako jsou petrochemikálie, pesticidy, plasty a léky, u kterých se obvykle ve vztahu ke xenobiotikům používá termín léčivo. Biotransformace je hlavním mechanismem eliminace léčiv, protože ta se biotransformaci podrobí ihned po vstupu do organismu. Biotransformace, která téměř vždy poskytuje metabolity polárnější, než je výchozí látka, obvykle ukončuje farmakologický účinek parentního léčiva a prostřednictvím exkrece zvyšuje odstraňování léčiva z těla. Nicméně může mít i další důsledky včetně podobného nebo odlišného farmakologického účinku nebo toxikologického působení. Je mnoho odlišných drah, kterými může být léčivo biotransformováno, a ty zahrnují mimo jiné oxidační, redukční, hydrolytické a konjugační reakce. Je důležité těmto drahám porozumět, protože cesta metabolismu léčiva může určovat jeho konečný farmakologický nebo toxikologický účinek. Biotransformace léčiv se rozděluje do dvou fází: Fáze I neboli přípravné reakce a Fáze II čili konjugační reakce. Kromě fyzikálně-chemických činitelů ovlivňujících metabolismus xenobiotik, hrají důležitou úlohu v...
|
|
|
Analytické studie biologicky aktivních látek s využitím kapalinové chromatografie
Zerzaňová, Anna ; Klimeš, Jiří (vedoucí práce) ; Blešová, Marie (oponent) ; Nobilis, Milan (oponent)
Souhrn Disertační práce Souhrn 130 Tato disertační práce je zaměřena do oblasti analytického hodnocení biologicky aktivních látek s využitím vysokoúčinné kapalinové chromatografie s důrazem na selektivní a citlivou detekci pomocí hmotnostního a coulometrického detektoru. V teoretické části disertační práce je největší pozornost věnována významu a postavení hmotnostní spektrometrie jako moderní analytické metody detekce. Dále je v teoretické části předložen přehled a aplikace elektrochemických analytických metod, s důrazem na coulometrická měření v průtokových systémech. Výsledky experimentální práce jsou shrnuty a presentovány formou tří prací publikovaných ve vědeckých impaktovaných časopisech. Přehled dosažených výsledků: První publikovaný článek se zabývá srovnáním čtyř chromatografických kolon pro jejich použití v bioanalytických aplikacích. V dnešní době je na trhu k dispozici velké množství chromatografických kolon s různými sorbenty. Pro naše testování byly vybrány dvě monolitické a dvě náplňové chromatografické kolony s relativně novými sorbenty. Pro měření byly použity reálné směsi biologicky aktivních látek. Každá ze směsí obsahovala parentní účinnou látku, její přirozené metabolity a vhodný vnitřní standard. Na základě chromatografických parametrů (retenční čas, počet teoretických pater...
|
|
|
Bioanalytické metodické přístupy při sledování osudu nového potenciálního léčiva v organismu pomocí HPLC-PDA-MS-MS
Císař, Přemysl ; Nobilis, Milan (vedoucí práce) ; Chládek, Jaroslav (oponent) ; Wsól, Vladimír (oponent)
1. Summary The aim of this study consisted in the development and validation of a bioanalytical method for the identification and determination of dimefluron and its metabolites in biomatrices. For the purposes of this study, six expected potential dimefluron metabolites were prepared and identified by NMR and MS. Higher homologue of dimefluron (homodimefluron) was selected and synthesized as an internal standard. The chromatographic columns with various types of the stationary phases were tested. The best results were achieved using a pentafluorophenylpropylsilyl silica gel column rinsed with the mobile phase of acetonitrile- phosphate buffer pH = 3 in a gradient mode. After the validation of the bioanalytical method, this chromatographic system was applied to the disposition study of dimefluron in rats. After an intragastric administration of dimefluron to rats, samples of urine and faeces were collected each 24 hours. The elimination of dimefluron and its phase I and phase II metabolites in urine and faeces was studied. Maximum concentrations of dimefluron derivatives in the excrements were found in the time interval of 24 - 48 hours after the administration. 9-O-Desmethyldimefluron and 3-O-desmethyldimefluron were the principal metabolites found in the rat faeces, while the metabolic products of...
|
host ::
RSS.