|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení homatropinu a skopolaminu v očních kapkách
Sohrová, Barbora ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Barbora Sohrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název rigorózní práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení homatropinu a skopolaminu v očních kapkách Byla vyvinuta a validována metoda pro stanovení homatropin-hydrobromidu a jeho degradačního produktu- skopolamin-hydrobromidu v očních kapkách o koncentraci 1% (s chloridem sodným), 2% (s chloridem sodným) a 2% (s pufrem F 6,45) účinné látky. V průběhu vývoje metody byly testovány různé mobilní i stacionární fáze. Pro validaci byla použita kolona Ascentis Express F5 (100 x 4,6 mm, 2,7 µm). Mobilní fázi tvořila směs acetonitrilu a fosfátového pufru v poměru 9:91 (V/V). Fosfátový pufr obsahoval 3,12% vodný roztok dihydrogenfosforečnanu sodného dihydrátu a 200 µl triethylaminu. PH pufru bylo upraveno kyselinou fosforečnou 85% na hodnotu 2,5. Na kolonu bylo dávkováno 5 µl analyzovaného roztoku, analýza probíhala při průtokové rychlosti 1,1 ml/min a detekci v UV oblasti při 210 nm. Čas analýzy nepřesáhl 6,5 minuty. Analyzovaný roztok obsahoval roztok standardu homatropin-hydrobromidu o koncentraci 25 mg/100 ml a jeho degradační produkt skopolamin-hydrobromid o koncentraci 0,5 mg/100 ml. Vyvinutá metoda byla kompletně validována a byl...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoků kofeinu
Saifrová, Zuzana ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Zuzana Saifrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název rigorózní práce: Vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoků kofeinu Tato rigorózní práce je zaměřena na vývoj HPLC metody pro sledování stability roztoku kofeinu a kofein-citrátu a její následnou validaci. Jako nečistota byl zvolen teofylin, u nějž bylo pravděpodobné, že by se mohl objevit jako rozkladný produkt vzorku. Z množství dostupných metod analýzy kofeinu pomocí HPLC (viz kapitola 3.6 Rešerše) byla jako výchozí zvolena metoda prováděná za laboratorní teploty (20 ± 5 řC), s mobilní fází MeOH:H2O 40:60 o průtoku 1 ml/min, monolitickou kolonou C18 o rozměrech 100 × 4,6 mm a nástřikem 5 µl. V průběhu vývoje metody došlo jak k úpravě několika podmínek analýzy a složení mobilní fáze, tak ke změně rozměrů chromatografické kolony a charakteru fáze stacionární. Hlavními sledovanými parametry při vývoji metody byla rychlost analýzy a schopnost poskytovat symetrické píky rozlišené na základní linii a rovněž od mrtvého objemu kolony. Výsledná metoda je založena na izokratické eluci s použitím mobilní fáze ACN:pufr o pH 6 v poměru 10:90 o průtoku 0,5 ml/min a chromatografickou kolonou C18, 50 x 4,6 mm o velikosti částic 3µm....
|
|
|
Využití UHPLC v analýze rozkladných produktů tertrakain-hydrochloridu
Horáková, Michaela ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Horáková Školitel: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D Název diplomové práce: Využití UHPLC v analýze rozkladných produktů tetrakain- hydrochloridu Tato diplomová práce se zabývá využitím UHPLC pro analýzu tetrakain-hydrochloridu a jeho rozkladných produktů, kyseliny 4-aminobenzoové a 4-(butylamino)benzoové. Analýza probíhala na koloně Kinetex 5 µ XB-C18 100A za využití mobilní fáze acetonitril-pufr, kdy pufr obsahoval vodu upravenou kyselinou fosforečnou na pH=2,2, při průtoku 1,7 ml/min. Byla zvolena gradientová eluce, která začínala na 35% acetonitrilu, ve druhé minutě stoupla na 90% organické fáze a poté opět klesla na 35% ve čtvrté minutě. Jako vnitřní standard byl využit ethylparaben. Pro detekci byla zvolena vlnová délka 300 nm pro tetrakain a nečistoty a 240 nm pro vnitřní standard. Validace dokázala, že metoda poskytuje přesné a správné výsledky.
|
|
|
Stanovení tokoferolů v biologickém materiálu (rešeršní práce)
Koutová, Jana ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo vytvořit přehled laboratorních metod používaných pro stanovení vitamínu E v biologických matricích. Vitamín E je důležitým antioxidantem a jeho deficit je spojován se závažnými kardiovaskulárními, nervovými a imunitními onemocněními. Četnost jeho stanovení se v posledních letech zvyšuje, u metod je kladen důraz na rychlost, univerzálnost a možnost automatizace. Teoretická část je věnována chemickým, fyzikálním vlastnostem a biologické funkci. Tyto poznatky jsou důležité jako úvod pro pochopení funkce vitamínu v organizmu a jeho chemicko- fyzikální podstata pro volbu metod stanovení. Mezi hlavní metody stanovení je možno zařadit především chromatografické metody (UHPLC, HPLC, GC) a dále metody elektrochromatografické (CEC) a spektrofotometrické. V závěru práce jsou uvedené metody porovnány z různých hledisek. Klíčová slova: tokoferoly, vitamín E, biologický materiál.
|
|
|
Testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systému
Chládková, Gabriela ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Gabriela Chládková Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: Doc. RNDr. Miroslav Polášek, Csc. Název diplomové práce: Testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systému Úkolem této diplomové práce bylo porovnání různých podmínek pro testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systém v průtokovém systému a zhodnocení závislosti antioxidační účinnosti na koncentraci. Antioxidační účinnost byla popisována jako závislost zhášení chemiluminiscenčního signálu na použité koncentraci antioxidantu. Byla pozorována antioxidační účinnost tří látek - resveratrol, kyselina p- kumarová a trolox. Trolox se používá jako standard při hodnocení antioxidační aktivity. Chemiluminiscenční systém byl tvořen chemiluminiscenčním činidlem, zde byl použit luminol v roztoku hydroxidu sodného popř. v roztoku uhličitanu sodného s úpravou pH na 10, nebo bez úpravy. Luminol vykazoval chemiluminiscenční záření následně po oxidaci peroxidem vodíku v přítomnosti katalyzátorů. Jako katalyzátor zde byl použit hexakyanoželezitan draselný popř. hexakyanoželeznatan draselný. Během měření bylo nastaveno pracovní napětí 435 mV popř. 750 mV. Celá analýza probíhala...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanoveni vankomycinu v klinickém výzkumu
Kučerová, Kateřina ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Kučerová Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení vankomycinu v klinickém výzkumu Cílem této diplomové práce bylo vytvořit optimální chromatografické podmínky pro stanovení vankomycinu pro klinický výzkum. K separaci byla využita kolona KinetexTM C18 o rozměrech 50 × 4,6 mm (Phenomenex, USA) s povrchově porézními částicemi o velikosti 2,6 μm. Mobilní fázi tvořil fosfátový pufr o pH 4,5 a acetonitril v poměru 90 : 10. Jako vnitřní standard byl zvolen cefuroxim, který byl spolu s vankomycinem detekován při 220 nm. Po optimalizaci separačních podmínek byla metoda aplikována na biologický materiál. Vzorky byly jednoduše upraveny pouze pomocí precipitačního činidla. Metoda byla částečně validována. Klíčová slova: vankomycin, HPLC-UV, plasma
|
|
|
Stanovení acetylcholinu pomocí LC-MS ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů LC-MS/MS
Vrobel, Ivo ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Ivo Vrobel Školitelé: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc; Katedra analytické chemie, Farmaceutická fakulta, Univerzita Karlova v Praze Prof. Seppo Auriola, MSc.(Chem.) Marko Lehtonen; Katedra farmaceutické chemie, Škola farmacie, Univerzita Východního Finska v Kuopiu Název diplomové práce: Stanovení acetylcholinu pomocí LC-MS/MS ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů Byla vyvinuta nová rychlá a jednoduchá analytická metoda na stanovení acetylcholinu (ACh) ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů založena na kapalinové chromatografii spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS), využívající isotopicky značený vnitřní standard. Pentafluorofenylpropylová (PFPP) stacionární fáze spolu s mobilní fází složené z 0.05% vodného roztoku TFA a 4% ACN zabezpečuje dostatečnou retenci ACh a jeho separaci od anorganických solí. Ionizace ACh a vnitřního standardu, odolná vůči použití TFA, byla dosažena pomocí ionizace termosprejem za atmosférického tlaku (APTSI). Detekce ACh a vnitřního standardu byla docílena pomocí selektivního reakčního monitoringu (SRM) v lineární iontové pasti. Křížová validace byla provedena porovnáním nově vyvinuté metody s validovanou metodou rutinně používanou ke stanovení ACh. Soubor...
|
|
|
Stresové zkoušky dimetinden-maleinátu s využitím metody HPLC
Pannyová, Anna ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
ABSTAKT Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Studentka: Anna Pannyová Školitel: PharmDr. Lucie Havlíková, Ph.D Název diplomové práce: Stresové zkoušky dimetinden-maleinátu s využitím metody HPLC Cílem této práce bylo zjistit stabilitu dimetinden-maleinátu pomocí stresových testů a provést optimalizaci metody pro stanovení dimetindenu a jeho nečistot. Stresové zkoušky se provádějí s léčivým přípravkem/léčivou látkou za účelem zjištění jejich stability. Případná nestabilita se může projevit úbytkem účinné látky, ztrátou její farmakologické aktivity nebo vznikem rozkladných produktů. Dimetinden-maleinát je látka s antihistaminickými účinky, působí na H1 receptory histaminu. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je v současné době jednou z nejpoužívanějších separačních metod sloužících k analýze stability léčivých přípravků a léčivých látek. V průběhu experimentální části práce bylo prokázáno, že zvýšená teplota, voda, acetonitril ani kyselé prostředí nemají vliv na stabilitu léčiva. Zato zásadité prostředí a přítomnost oxidačního činidla vedou k významnému rozpadu dimetindenu za vzniku rozkladných produktů DP1(tR 3,94 min) a DP2 (tR 6,08 min). Rozkladné produkty byly odděleny od píku dimetindenu za použití chromatografické kolony Zorbax SB-CN (4,6...
|
|
|
Metabolomic analysis of plasma samples using ultra performance liquid chromatography and high resolution mass spectrometry
Machová, Karolína ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Karolína Machová Konzultant: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Název diplomové práce: Využití ultraúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotností spektrometrií v metabolomické analýze plasmy Metabolomika je nová věda popisující komplexní metody pro určování a měření metabolitů v biologických vzorcích především tělních tekutinách jako je plasma, moč, sérum, sliny, cerebrospinální tekutina, sperma. Popisuje děje probíhající v buňkách a nachází široké uplatnění v diagnostice onemocnění, určování biomarkerů, patofyziologii nemocí a klinické praxi. Hladiny metabolitů jsou v nízkých koncentračních rozmezích, a proto je kladen důraz na vysokou citlivost metody. Důležitá je reprodukovatelnost analytické metody a také příprava vzorku. Metabolomická analýza využívá pro stanovení metabolitů především vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii v kombinaci s hmotnostním detektorem. Další běžné analytické metody jsou nukleární magnetické rezonance a plynová chromatografie. Následující projekt je zaměřen na standardizaci metody identifikace nalezených metabolitů pomocí ultra-účinné kapalinové chromatografie v kombinaci s hmotnostním spektrometrem s využitím počítačového vyhodnocení pomocí databáze známých látek.
|
|
|
Testování vlastností nových "fused-core" analytických kolon v UHPLC systému a porovnání s BEH UHPLC analytickými kolonami
Nežádalová, Jitka ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Jitka Nežádalová Školitel: PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Testování vlastností nových "fused - core" analytických kolon v UHPLC systému a porovnání s BEH UPLC analytickými kolonami Tato diplomová práce byla zaměřena na testování vlastností nových analytických kolon naplněných povrchově porézními částicemi, tzv. fused-core analytických kolon, v UHPLC systému v porovnání s BEH UPLC analytickou kolonou. Testovány byly kolony Kinetex PFP o velikosti částic 1,7 µm a 2,6 µm (Phenomenex) a Ascentis Express Phenyl-hexyl o velikosti částic 2,7 µm (Sigma-Aldrich), tedy kolony s povrchově porézními částicemi a kolona Acquity BEH Phenyl (Waters) s celkově porézními částicemi o velikosti 1,7 µm. K porovnání vlastností kolon bylo použito 7 estrogenních steroidů za detekce pomocí PDA detektoru při vlnové délce 280 nm. Měření probíhalo za využití isokratické eluce. Mobilní fáze se skládala z ultračisté vody a acetonitrilu. Kolony byly hodnoceny z hlediska účinnosti, symetrie píků, rozlišení a zpětného tlaku, který vznikal na kolonách. Účinnost kolon byla vyjádřená v počtu teoretických pater a znázorněním van Deemterovy křivky. Dále byl sledován vliv rostoucí teploty a průtoků na separaci...
|
host ::
RSS.