|
|
Využití kapalinové chromatografie v analýze biologického materiálu pro klinický výzkum
Turoňová, Dorota ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Pohanka, Miroslav (oponent) ; Solichová, Dagmar (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Dorota Turoňová Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název disertační práce: Využití kapalinové chromatografie v analýze biologického materiálu pro klinický výzkum Disertační práce je zaměřená na využití kapalinové chromatografie pro klinický výzkum. Je rozdělená na dva hlavní oddíly, Teoretickou část a Komentáře k vybraným publikovaným pracím. V teoretické části je popsáno použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie v praxi. Jsou zde diskutovány klíčové parametry pro vývoj LC metody a trendy současné bioanalytické praxe. Dále je vysvětlen odběr a úprava vzorků různých biologických matric, včetně všech překážek a nástrah, které je třeba zohlednit. Stručně jsou rovněž zmíněny moderní trendy. Součástí kapitoly o úpravě vzorků je také část věnovaná derivatizaci a její využití v analýze platinových derivátů, která souvisí s komentářem k publikované práci. Hlavní část práce se zabývá komentářem ke čtyřem vybraným publikovaným pracím. První prezentuje přehledový článek zabývající se použitím mikroextrakce v pipetovacích špičkách v klinické a forenzní toxikologii. Jsou zde diskutovány výhody a nevýhody jednotlivých aplikací s důrazem na jejich praktičnost a možnost uplatnění v praxi. Druhou...
|
|
|
Využití kapalinové chromatografie v analýze biologického materiálu pro klinický výzkum
Turoňová, Dorota ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Pohanka, Miroslav (oponent) ; Solichová, Dagmar (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Dorota Turoňová Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název disertační práce: Využití kapalinové chromatografie v analýze biologického materiálu pro klinický výzkum Disertační práce je zaměřená na využití kapalinové chromatografie pro klinický výzkum. Je rozdělená na dva hlavní oddíly, Teoretickou část a Komentáře k vybraným publikovaným pracím. V teoretické části je popsáno použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie v praxi. Jsou zde diskutovány klíčové parametry pro vývoj LC metody a trendy současné bioanalytické praxe. Dále je vysvětlen odběr a úprava vzorků různých biologických matric, včetně všech překážek a nástrah, které je třeba zohlednit. Stručně jsou rovněž zmíněny moderní trendy. Součástí kapitoly o úpravě vzorků je také část věnovaná derivatizaci a její využití v analýze platinových derivátů, která souvisí s komentářem k publikované práci. Hlavní část práce se zabývá komentářem ke čtyřem vybraným publikovaným pracím. První prezentuje přehledový článek zabývající se použitím mikroextrakce v pipetovacích špičkách v klinické a forenzní toxikologii. Jsou zde diskutovány výhody a nevýhody jednotlivých aplikací s důrazem na jejich praktičnost a možnost uplatnění v praxi. Druhou...
|
|
|
Vliv metabolického syndromu na expresi parametrů zánětu a buněčného poškození ve vazbě na přítomnost psoriázy
Holmannová, Drahomíra ; Fiala, Zdeněk (vedoucí práce) ; Dlouhý, Pavel (oponent) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Souhrn Metabolický syndrom je chronické metabolické a systémové zánětlivé onemocnění, které je spojené s vysokou morbiditou a mortalitou. Rostoucí prevalence metabolického syndromu akcentuje nutnost hlubšího poznání patofyziologických mechanismů a jejich provázanosti s častými komorbiditami, mezi které je řazena i psoriáza. Cestou analýzy změn hladin vybraných parametrů zánětu a buněčného poškození lze rozšířit znalosti patogeneze zánětlivého procesu obou onemocnění i jejich kombinace. Výsledky mohou přispět k účinným intervencím sekundární prevence a primární péče a usnadňovat modifikaci terapií. Data pro disertační práci byla získána ze tří samostatných studií, pro jejichž cíle byl vybrán soubor parametrů odrážejících metabolický stav, zánětlivé procesy a buněčné poškození organismu (oxidační poškození DNA/RNA, kalprotektin, angiopoietin-like protein 8 /ANGPTL8/, clusterin, elafin, chromozomální aberace, CRP a vitamín D). Do studií byly zařazeny skupiny osob s metabolickým syndromem, osoby s psoriázou, osoby s psoriázou a metabolickým syndromem a osoby zdravé. Celkově se výzkumu účastnilo 248 osob ve třech studiích (122, 85 a 41 osob). Laboratorní stanovení vybraných parametrů bylo prováděno metodami ELISA, EIA, nefelometrií a mikroskopickou analýzou (testem chromozomálních aberací). Následně bylo...
|
|
|
Kontrola obsahu mykotoxinů ve vybraných potravních doplňcích
Přívratská, Nikola ; Šatínský, Dalibor (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Nikola Přívratská Školitel: prof. RNDr. Dalibor Šatínský, Ph.D. Název diplomové práce: Kontrola obsahu mykotoxinů ve vybraných potravních doplňcích Pro vývoj metody ke stanovení mykotoxinu ochratoxinu A (OTA) v potravních doplňcích s obsahem extraktu z ostropestřce mariánského bylo využito spojení vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) s on-line extrakcí na tuhou fázi (SPE). Vzorek potravního doplňku extrahovaný do směsi methanol - voda v poměru 1:9 byl dávkován o objemu 50 μl na extrakční kolonu Ascentis Express RP-Amide (5 x 2,1 mm, velikost částic 5 µm), kde byl promýván od interferujících složek matrice 20% methanolem při průtoku 1 ml/min. Po 1 minutě došlo k přepnutí ventilu a OTA byl eluován z extrakční kolony na analytickou kolonu Ascentis Express Phenyl-Hexyl (100 x 4,6 mm, velikost částic 5 µm). Separace probíhala při 40 ⁰C za gradientové eluce s mobilní fází acetonitril/0,5% kyselina octová, která protékala kolonou rychlostí 1 ml/min. Fluorescenční detekce OTA byla provedena při vlnových délkách Ex 355 nm, Em 460 nm. Celková analýza zahrnující on-line úpravu vzorku a separaci trvala 9 minut. Metoda byla validována pro dva typy matrice, přičemž limit kvantifikace pro potravní doplňky...
|
|
|
Využití moderních analytických metod v klinickém výzkumu
Vernerová, Andrea ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Doležal, Rafael (oponent) ; Malíř, František (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Školicí pracoviště Katedra analytické chemie Doktorský studijní program Bioanalytické metody Kandidátka / kandidát Mgr. Andrea Vernerová Školitelka / školitel doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Konzultantka / konzultant MUDr. Ondřej Sobotka, Ph.D. Název disertační práce Využití moderních analytických metod v klinickém výzkumu Disertační práce, komponovaná jako soubor pěti publikací, se zabývá vývojem, optimalizací a validací chromatografických metod a extrakčních postupů pro stanovení časných biomarkerů aktivace imunitního systému (neopterinu, kynureninu a tryptofanu) ve slinách a gingivální tekutině u onkologických pacientů a pacientů s parodontálním onemocněním. Dále je v práci zkoumán potenciál využití Clarkova senzoru pro zjištění správné funkce trombocytů pomocí měření mitochondriální respirace a jeho aplikace v klinickém výzkumu. Práce vznikla na základě spolupráce s několika klinickými pracovišti FN Hradec Králové a Olomouc a Oroboros Instruments (Innsbruck, Rakousko). V teoretické části práce jsou blíže popsány jednotlivé analyty, jejich klinický význam, využité biologické matrice a jejich úprava před analýzou. Dále jsou zde diskutovány separační metody a metody detekce, které byly použity v rámci této práce. Vlastní...
|
|
|
Využití moderních analytických metod v klinickém výzkumu
Vernerová, Andrea ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Doležal, Rafael (oponent) ; Malíř, František (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Školicí pracoviště Katedra analytické chemie Doktorský studijní program Bioanalytické metody Kandidátka / kandidát Mgr. Andrea Vernerová Školitelka / školitel doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Konzultantka / konzultant MUDr. Ondřej Sobotka, Ph.D. Název disertační práce Využití moderních analytických metod v klinickém výzkumu Disertační práce, komponovaná jako soubor pěti publikací, se zabývá vývojem, optimalizací a validací chromatografických metod a extrakčních postupů pro stanovení časných biomarkerů aktivace imunitního systému (neopterinu, kynureninu a tryptofanu) ve slinách a gingivální tekutině u onkologických pacientů a pacientů s parodontálním onemocněním. Dále je v práci zkoumán potenciál využití Clarkova senzoru pro zjištění správné funkce trombocytů pomocí měření mitochondriální respirace a jeho aplikace v klinickém výzkumu. Práce vznikla na základě spolupráce s několika klinickými pracovišti FN Hradec Králové a Olomouc a Oroboros Instruments (Innsbruck, Rakousko). V teoretické části práce jsou blíže popsány jednotlivé analyty, jejich klinický význam, využité biologické matrice a jejich úprava před analýzou. Dále jsou zde diskutovány separační metody a metody detekce, které byly použity v rámci této práce. Vlastní...
|
|
|
Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení močoviny v kondenzátu vydechovaného vzduchu a její aplikace v klinickém výzkumu
Vrbová, Lenka ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Lenka Vrbová Školitel: doc. RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Kateřina Matoušová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení močoviny v kondenzátu vydechovaného vzduchu a její aplikace v klinickém výzkumu Klíčová slova: močovina, kondenzát vydechovaného vzduchu, UHPLC-MS/MS Analýza kondenzátu vydechovaného vzduchu představuje jednoduchou a neinvazivní metodu měření biomarkerů nejen dýchacích cest. Protože jsou naměřené hladiny těchto mediátorů ovlivněny ředěním zkondenzovanou vodní párou, je pro správnou klinickou interpretaci naměřených dat nezbytné stanovit biomarker ředění. Močovina se zdá být vhodnou molekulou. Cílem této diplomové práce bylo vytvořit rychlou, jednoduchou a citlivou analytickou metodu pro stanovení koncentrace močoviny v kondenzátu vydechovaného vzduchu pro klinický výzkum a praxi. Pro analýzu močoviny byla zvolena ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie v tandemovém uspořádání s hmotnostní spektrometrií. K separaci byla využita kolona Kinetex HILIC 100 A o rozměrech 100 × 2,10 mm (Phenomenex, USA) s povrchově porézními částicemi o velikosti 1,7 µm. Mobilní fázi tvořily acetonitril, methanol a voda v poměru 81 : 9 :...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení amilorid-hydrochloridu v léčivém přípravku
Sohrová, Barbora ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Barbora Sohrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení amilorid-hydrochloridu v léčivém přípravku Obsahem diplomové práce je vývoj metody pro HPLC stanovení amilorid- hydrochloridu v léčivém přípravku. Léčivý přípravek obsahující amilorid-hydrochlorid se používá při terapii cystické fibrózy jako magistraliter připravený roztok pro inhalaci. Při vývoji byly vyzkoušeny různé stacionární a mobilní fáze a pro vlastní měření byla vybrána kolona HS F5 (150x2,1 mm, 3 µm) a jako mobilní fáze směs acetonitrilu a kyseliny fosforečné 0,085%, které bylo pH upraveno triethylaminem na hodnotu 3,0, v poměru 75:25. Roztok standardů obsahoval amilorid-hydrochlorid, Nečistotu A jako rozkladný produkt a vnitřní standard butylparaben. Vyvinutá metoda byla kompletně validována. Z validace metody bylo zjištěno, že vyvinutá metoda je pro analýzu uvedeného přípravku vhodná a poskytuje přesné a správné výsledky. Jedním ze zjištění validace byla skutečnost, že léčivý přípravek obsahující amilorid-hydrochlorid není dostatečně stabilní. Proto je nutná vždy příprava těsně před použitím.
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanovení homatropinu a skopolaminu v očních kapkách
Sohrová, Barbora ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Mgr. Barbora Sohrová Konzultant: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D. Název rigorózní práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení homatropinu a skopolaminu v očních kapkách Byla vyvinuta a validována metoda pro stanovení homatropin-hydrobromidu a jeho degradačního produktu- skopolamin-hydrobromidu v očních kapkách o koncentraci 1% (s chloridem sodným), 2% (s chloridem sodným) a 2% (s pufrem F 6,45) účinné látky. V průběhu vývoje metody byly testovány různé mobilní i stacionární fáze. Pro validaci byla použita kolona Ascentis Express F5 (100 x 4,6 mm, 2,7 µm). Mobilní fázi tvořila směs acetonitrilu a fosfátového pufru v poměru 9:91 (V/V). Fosfátový pufr obsahoval 3,12% vodný roztok dihydrogenfosforečnanu sodného dihydrátu a 200 µl triethylaminu. PH pufru bylo upraveno kyselinou fosforečnou 85% na hodnotu 2,5. Na kolonu bylo dávkováno 5 µl analyzovaného roztoku, analýza probíhala při průtokové rychlosti 1,1 ml/min a detekci v UV oblasti při 210 nm. Čas analýzy nepřesáhl 6,5 minuty. Analyzovaný roztok obsahoval roztok standardu homatropin-hydrobromidu o koncentraci 25 mg/100 ml a jeho degradační produkt skopolamin-hydrobromid o koncentraci 0,5 mg/100 ml. Vyvinutá metoda byla kompletně validována a byl...
|
|
|
Development of new types of biocompatible hemodialysis membranes for separation of biomolecules
Kohlová, Michaela ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent) ; Pena, Angelina (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové / Univerzita Porto, Farmaceutická fakulta Katedra analytické chemie / Katedra chemických věd Kandidát: Mgr. Michaela Kohlová Školitel: prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Konzultanti: prof. Maria de Conceição Branco Montenegro doc. Alice Santos-Silva Název dizertační práce: Vývoj nových typů biokompatibilních hemodialyzačních membrán pro separaci biomolekul Předkládaná disertační práce je zaměřena na vývoj, přípravu a optimalizaci planárních polysulfonových membrán, které by svými vlastnostmi odpovídaly membránám používaným pro hemodialýzu. Pro přípravu těchto tenkých polopropustných membrán byla použita metoda spin coatingu a fázové inverze, ponořením naneseného filmu do roztoku nerozpouštěla. Jak proces přípravy, tak složení membrán bylo optimalizováno tak, aby finální získaná membrána měla mechanickou odolnost vhodnou pro použití v průtokovém systému, separační vlastnosti vhodné pro hemodialýzu a byla biokompatibilní. Membrána s těmito vlastnostmi byla dále modifikovaná bioaktivními látkami za účelem snížení oxidačního stresu a/nebo chronického zánětu, tedy komplikací běžně se vyskytujících u pacientů podstupujících hemodialýzu. K přípravě těchto bioaktivních membrán byly použity tři různé typy modifikace. Membrány s antioxidační aktivitou...
|
host ::
RSS.