|
|
Studium molekulární organizace systému cytochromu P450
Holý, Petr ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Koblas, Tomáš (oponent)
V metabolismu velkého množství endogenních látek i xenobiotik hraje zásadní roli systém oxygenas se smíšenou funkcí (MFO systém). Tento membránový systém je tvořen cytochromy P450, NADPH:cytochrom P450 oxidoreduktasou (CPR), cytochromem b5 a NADH:cytochrom b5 oxidoreduktasou (b5R). Cytochrom P450 katalyzuje monooxygenaci substrátu a CPR a cytochrom b5 představují jeho redoxní partnery. Cytochrom b5, jehož redoxním partnerem je b5R, ovlivňuje reakce katalyzované MFO systémem, a to ne zcela objasněným mechanismem. Tato práce se zabývá purifikací b5R a CPR z jater králíka domácího. Diferenční centrifugací bylo získáno 18 ml mikrosomální frakce o obsahu proteinů 42 mg/ml. Z prvního dílu mikrosomální frakce byla pomocí chromatografie na kolonách DEAE- Sepharosy, CM-Sepharosy a 5'-ADP agarosy izolována b5R s výtěžkem 0,3 % ferrikyanid- reduktasové aktivity a obsahující několik kontaminantů o molekulových hmotnostech 50-70 kDa. Při druhé purifikaci b5R byla použita kombinace chromatografie na koloně DEAE-Sepharosy s přímým napojením na kolonu 5'-ADP agarosy, z níž byla získána b5R s výtěžkem 10,9 % a obsahující rovněž několik kontaminantů v intervalu molekulových hmotností 50-70 kDa. Preparát redukoval cytochrom b5 v přítomnosti NADH. Při obou purifikacích byla rovněž získána CPR pomocí chromatografií na...
|
|
|
Detection of neuronal activity associated with function of lower urinary tract with use of functional magnetic resonance imaging
Holý, Petr ; Zachoval, Roman (vedoucí práce) ; Hanuš, Tomáš (oponent) ; Mašata, Jaromír (oponent)
Petr Holý Univerzita Karlova v Praze 3. Lékařská fakulta Souhrn disertační práce Výzkumu neurální kontroly funkce dolních močových cest (DMC) je v posledních třech desetiletích věnována velká pozornost. Funkční magnetická rezonance (fMRI) umožňuje identifikaci mozkových struktur podílejících se na neurální kontrole DMC. Cílem předkládané práce je detekce neurální aktivity související s funkcí dolních močových cest pomocí fMRI a ověření nové metodiky využívající synchronního provedení fMRI mozku a urodynamického vyšetření. Ve studiích shrnutých v této dizertační práci jsme se zaměřili na zmapování mozkových center zapojených do regulace svalstva pánevního dna, funkce dolních močových cest při plnění močového měchýře a při mikci. Dále jsme sledovali aktivitu těchto center při plnění močového měchýře u pacientů s kompletní míšní lézí nad úrovní Th5. Při interpretaci výsledků fMRI měření jsme nově využili časovou korelaci se synchronně provedeným urodynamickým záznamem. Díky tomuto rozšíření stávající současné metodiky jsme měli přesnější dokumentaci sledovaného děje, tedy aktivity a změny náplně detruzoru. Naše práce ověřila proveditelnost metodiky zpřesňující interpretaci fMRI dat využitím synchronního urodynamického záznamu. Prokázali jsme aktivaci CNS související s aktivací pánevního dna v gyrus...
|
|
|
Kooperativita složek systému cytochromů P450 a ovlivnění metabolismu léčiv a karcinogenů
Holý, Petr ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Chmelík, Josef (oponent)
Systém oxidas se smíšenou funkcí (MFO systém) hraje důležitou roli v metabolismu mnoha endogenních látek a xenobiotik (např. karcinogenů, léčiv). Membránové hemoproteiny nazývané cytochromy P450 jsou zásadní složkou tohoto systému. Reakce katalyzované cytochromy P450 jsou ovlivňovány působením jiného proteinu MFO systému, a to cytochromem b5 (cyt b5). Mechanismus, jakým cyt b5 působí, ještě nebyl zcela objasněn. Jednou z možností studia této protein-proteinové interakce je metoda kovalentního síťování. Záměnou methioninu ve struktuře cyt b5 za jeho foto-aktivovatelný analog (foto-methionin) je možné připravit analog cyt b5 (foto-cyt b5), který po aktivaci UV zářením kovalentně váže cytochrom P450 v membránovém prostředí. Tato práce se zabývá expresí a izolací rekombinantního analogu cyt b5 s pouze jednou pozicí pro methionin (96) v primární struktuře proteinu a jeho substitucí za foto-methionin. Protein byl purifikován s výtěžkem 6 mg na 1 l bakteriální suspenze. Analýza hmotnostní spektrometrií (MALDI-TOF/TOF) ukázala, že methionin byl v sekvenci substituován foto-reaktivním analogem z asi 30 % (pokrytí sekvence 77 %). Foto- cyt b5 byl použit k fixování transientní protein-proteinové interakce s cytochromem P450 2B4 (CYP2B4). Foto-cyt b5 byl rekonstituován v lipidovém systému s CYP2B4 a...
|
|
| |
|
|
Testování vybraných teoretických přístupů v otázce výstavby americké radarové základny v České republice
Holý, Petr ; Karlas, Jan (vedoucí práce) ; Drulák, Petr (oponent)
Tato práce si klade za cíl otestovat schopnost tří vybraných teorií mezinárodních vztahů vysvětlit jednání České republiky v konkrétní zahraničněpolitické otázce. Těmito základními teoretickými přístupy jsou neorealismus, utilitární liberalismus a konstruktivismus, zkoumanou kauzu pak představuje problematika umístění americké radarové stanice protiraketové obrany na českém území. Zahrnutí většího počtu teorií umožňuje podívat se na problém v širší perspektivě, neboť každý z uvedených přístupů akcentuje jiný soubor nezávislých proměnných, skrze který se pokouší český postup v dané kauze vysvětlit (autonomie a vliv v případě neorealismu, zájmy domácích aktérů u liberalismu, mezinárodní a domácí normy pro konstruktivismus). Díky tomu bylo možné v práci kriticky zhodnotit, které hlavní faktory se nejvíce podílely na českém rozhodování o přijetí či nepřijetí americké nabídky, a poukázat tak i na určité obecnejší zákonitosti formulování české zahraničně- bezpečnostní politiky jako takové. První kapitola práce má za úkol krátce uvést čtenáře do historicko-politického kontextu, v následujících třech kapitolách jsou pak testovány jednotlivé teorie empirickým srovnáním jejich deduktivně stanovené hypotézy s hodnotou závislé proměnné, kterou v naší práci představuje odpověď České republiky na americkou...
|
|
| |
|
| |
|
|
Kulturní enkláva obce Horní Víska půl století po zániku - historická interpretace na základě vegetačních příznaků
Holý, Petr ; Sádlo, Jiří (vedoucí práce) ; Matoušek, Václav (oponent)
Vývoj krajiny a vegetace v okolí Horní Vísky byly studovány od jara 2004 do jara roku 2006. Lokalita se nachází v česko-německém pohraničí okresu Tachov mezi Planou a Stříbrem. Oblast studovaného území představuje typ kulturní krajiny, která je charakteristická odsunem německého obyvatelstva po druhé světové válce. Práce popisuje současný vegetační charakter a vývoj využití ploch na části krajiny v blízkém okolí zaniklé Horní Vísky. Záměrem diplomové práce bylo rovněž otestovat metodiku geobotanické indikace na konkrétní oblasti okolí zaniklé obce. K výzkumu historie krajiny a zaniklé vesnice posloužily mapové i písemné podklady od poloviny 17. století do dnešní doby. Využity byly historické i současné mapy, letecké snímky oblasti, staré kroniky a díla pamětníků, úřední spisy, vlastní pozorování a botanický průzkum zaniklé obce a okolní krajiny. Ráz a využití této krajiny byl dán hospodařením německého obyvatelstva. Němci zde žili od středověkého osídlení do vystěhování po druhé světové válce. Využití této kulturní krajiny se během doby značně měnilo a částečně se zrcadlí v dnešním charakteru jednotlivých částí a biotopů. Geobotanická indikace nám dává přímé i nepřímé důkazy o lidské existenci v krajině a přibližuje nám částečně i její kulturní a duchovní stránku.Byla ověřena terénní metoda vegetační...
|
|
| |
|
|
Družstevní forma financování bytové výstavby
Holý, Petr ; Gruber, Jan (oponent) ; Breinek, Pavel (vedoucí práce)
Diplomová práce se zaměřuje na zhodnocení družstevní bytové výstavby jako jedné z efektivních cest ze současné úvěrové krize financování bytové výstavby. Specifikuje a srovnává jednotlivé modely financování nové bytové výstavby a aplikuje je na modelovém příkladu. Podkladem pro hodnocení je analýza současné situace bytové výstavby a vývoje hypotečního úvěrování. Při tomto srovnání zohledňuje i programy státní podpory nové bytové výstavby. Současně posuzuje i alternativu neziskové družstevní bytové výstavby.
|
host ::
RSS.