|
| |
|
| |
|
|
Systémové píky v čipové elektroforéze
Hezinová, Markéta ; Gaš, Bohuslav (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Práce se zabývá systémovými píky v proteinové čipové elektroforéze. Cílem práce bylo navrhnout vhodná separační prostředí s ohledem na pozice a počty systémových píků. Teoretický úvod se věnuje procesům odehrávajícím se při separaci proteinů metodou SDS-PAGE, její miniaturizaci a podává přehled současných aplikací této metody. Dále je stručně shrnuta problematika systémových zón. Systémové píky byly sledovány ve třech separačních systémech. Chování systémových zón bylo nejprve vyšetřeno teoreticky v programu PeakMaster a získané výsledky byly ověřeny experimentálně na přístroji Agilent 2100 Bioanalyzer. V experimentech byl zaznamenán větší počet systémových píků, než odpovídalo teoretickému složení systémů. Vzhledem k této skutečnosti nebylo možné zcela ztotožnit výsledky PeakMasteru s reálnými experimenty.
|
|
|
Elektroforetické stanovení tantalu v recyklátech chladicích kapalin
Gogulin, Semen ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Práce se věnuje vývoji elektroforetických metod stanovení tantalu v recyklátech chladicích kapalin používaných ve výrobě tantalových kondenzátorů, a zároveň separace tantalu od chemicky podobného niobu. Při vývoji metod bylo využito tvorby záporně nabitých komplexů tantalu a niobu s řadou ligandů přidávaných do separačního elektrolytu, zejména vinné a citronové kyseliny a 4-(2-pyridylazo)resorcinolu. Separace byly prováděny v křemenné kapiláře o vnitřním průměru 50 µm a efektivní délce 36,5 cm, na kapiláru bylo vkládáno záporné separační napětí -25 kV. Při použití separačního elektrolytu obsahujícího vinnou a citronovou kyselinu o koncentraci 0,1 mol·l-1 při hodnotě pH = 2 bylo dosaženo separace niobu a tantalu během méně než 3 min; absorpční spektrometrická detekce byla přitom prováděna v ultrafialové oblasti při vlnové délce 200 nm, stanovená mez detekce měla hodnotu 2,8 ppm tantalu, a mez stanovitelnosti 9,2 ppm tantalu. Přídavek 4-(2-pyridylazo)resorcinolu umožnil snížení meze detekce na 0,8 ppm tantalu a meze stanovitelnosti na 2,6 ppm tantalu, základní elektrolyt přitom obsahoval 0,1 mmol·l-1 4-(2-pyridylazo)resorcinolu, 10 mmol·l-1 vinné a 10 mmol·l-1 citronové kyseliny a 25 mmol·l-1 amoniaku pro ustavení hodnoty pH v rozmezí 6 až 7 jednotek; za těchto podmínek trvala separace niobu a...
|
|
|
Chirální a achirální chromatografie ve farmakologii a toxikologii
Chytil, Lukáš ; Slanař, Ondřej (vedoucí práce) ; Bultas, Jan (oponent) ; Coufal, Pavel (oponent)
SOUHRN Předkládaná dizertační práce popisuje formou komentáře k vlastním originálním publikacím vývoj analytických postupů pro analýzu léčiv popř. metabolitů z různých terapeutických skupin. Vedle optimalizace preanalytické a analytické fáze, je věnován velký prostor validaci a interpretaci získaných výsledků. Práce je složena ze tří tématických okruhů: chirální stanovení tramadolu a jeho metabolitu, stanovení antihypertenziv a kvalitativní analýza benzodiazepinů. V prvním okruhu je popsán vývoj metodik pro chirální analýzu tramadolu a jeho demetylovaného metabolitu O-desmetyltramadol (ODT) v moči a v plazmě. Tramadol je centrálně působící analgetikum, jež se užívá v terapii jako racemát. Chování každého enantiomeru se liší: (+)-tramadol inhibuje především zpětné vychytávání serotoninu a (-)-tramadol inhibuje zpětné vychytávání noradrenalinu, (+)-tramadol je desetkrát terapeuticky účinnější než druhý enantiomer. O-demetylací katalyzovanou enzymem CYP2D6 v játrech vzniká nejaktivnější metabolit (ODT), který je zodpovědný za vznik lékově navozené opioidní analgezie. (-)- ODT vykazuje schopnost inhibice zpětného vychytávání monoaminů zatímco (+)-ODT vykazuje 200 krát vyšší afinitu k opioidním receptorům než mateřská látka. Také metabolická přeměna tramadolu vykazuje stereoselektivní selektivitu. Z toho důvodu...
|
|
|
Development of electrophoretic method for determination of ethanolamines in antifreeze mixtures
Hamráková, Katarína ; Křížek, Tomáš (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Táto práca sa zaoberá vývojom, optimalizáciou a testovaním použiteľnosti elektroforetickej metódy pre stanovenie etanolamínov v nemrznúcich zmesiach. Metóda bola testovaná s reálnou matricou chladiacej kvapaliny. Pre stanovenie bola využitá kapilárna elektroforéza s nepriamou UV detekciou. Etanolamíny - monoetanolamín, dietanolamín a trietanolamín - sú organické látky, ktoré sa v nemrznúcich zmesiach používajú ako inhibítory korózie, pretože sa glykoly, ktoré sa do týchto zmesí pridávajú, môžu vplyvom vysokej teploty či kyslíka zo vzduchu premeniť na kyseliny, ktoré spôsobujú koróziu kovov. Metóda bola optimalizovaná výberom vhodného zloženia základného elektrolytu, jeho pH, vhodným pomerom jednotlivých zložiek tlmivého roztoku a výberom vhodného vnútorného štandardu. Základným elektrolytom bol tlmivý roztok zložený z 60 mM kyseliny octovej a 30 mM histidínu, pH 4,59 a ako vnútorný štandard bol použitý lyzín. K meraniam sa používala kremenná kapilára s vnútorným priemerom 50 µm, celkovou dĺžkou 50,0 cm a efektívnou dĺžkou 41,5 cm. Bolo otestované meranie z krátkeho konca a skrátenie kapiláry na 35,0 cm s efektívnou dĺžkou 26,5 cm, ktoré bolo ďalej využívané. Vzorka bola dávkovaná hydrodynamicky tlakom 5 kPa po dobu troch sekúnd. Detekcia prebieha pri vlnovej dĺžke 214 nm. Metódou je možné stanoviť...
|
|
|
Analýza proteinů a jejich změn v biologických tkáních
Kulhavá, Lucie ; Mikšík, Ivan (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent) ; Bílková, Zuzana (oponent)
(CZ) Proteiny jsou důležité biologicky aktivní látky organismu, jejich kvalitativní i kvantitativní složení rozhoduje o funkcích živého organismu. Analýzy proteinů v biologickém materiálu jsou významnou součástí biologického a lékařského výzkumu. Tato dizertace je věnována optimalizaci přípravy vzorků - biologického materiálu, a to zpracování vzorků v preanalytické fázi a jejich přípravě pro vlastní analýzy a zavádění nových postupů v jejich přípravě pro příslušné analýzy. U jednotlivých biologických materiálů byly vždy optimalizovány podmínky použitých analytických metod jednorozměrné a dvourozměrné gelové elektroforézy a hmotnostní spektrometrie. Získané výsledky byly statisticky zpracovány a navrženy další možné přístupy k výzkumu zmíněných problematik. Hlavním studovaným biologickým materiálem byla lidská slina a to s ohledem na orální zdraví. Byla provedena srovnávací studie vzorků lidské sliny, která byla získána od lidí se sanovanou (ošetřenou) denticí a lidí se zdravou denticí. Bylo studováno složení sedimentu (část vzorku celkové sliny získán centrifugací) ve vztahu k zubnímu kazu. Byly nalezeny odlišné exprese identifikovaných proteinů ve sledovaných skupinách lidí se sanovanou a zdravou denticí. Pomocí přístupu label-free kvantifikace byly prokázány rozdíly v proteinovém zastoupení ve...
|
|
|
Chromatografická charakterizace iontově výměnné kolony
Štverková, Kateřina ; Sobotníková, Jana (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Tato bakalářská práce se zabývá charakterizaci aniontově výměnné kolony pomocí modelu lineárních vztahů solvatační energie (LSER). Cílem bakalářské práce bylo nalézt experimentální podmínky vhodné pro separaci thiazidových diuretik (trichlormethiazid, bendroflumethiazid, butizid, chlorthalidon, mefrusid) na koloně PhenoSphereTM 5μm SAX 80 Ǻ. Tyto experimentální podmínky byly následně použity pro změření retenčních faktorů LSER analytů, ze kterých byly vícenásobnou lineární regresí vypočítány LSER koeficienty popisující vzájemné interakce mezi stacionární fází, mobilní fází a analyty diuretik.
|
|
|
Elektroforetické stanovení inhibitorů koroze v chladicích kapalinách
Smrž, Dominik ; Kubíčková, Anna (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Stanovení inhibitorů koroze v chladicích kapalinách představuje vzhledem k jejich rozdílným fyzikálně chemickým vlastnostem obtížný analytický problém. V současnosti je k jejich stanovení nutné použít více instrumentálních technik. Hlavním cílem této práce bylo vyvinout metody pro stanovení těchto látek pomocí jedné instrumentální techniky. Jako vhodná metoda byla vybrána kapilární zónová elektroforéza, pomocí které byly vyvinuty tři metody stanovení jednotlivých skupin inhibitorů koroze. Metoda pro stanovení anorganických aniontů v rozsahu 5 až 50 ppm, s limitem detekce kolem 1 ppm. Základní elektrolyt pro tuto metodu sestával z roztoku chromanu sodného, CTAB a CHES. Analyty byly detegovány nepřímo při 450 nm. Dále byla vyvinuta metoda pro stanovení organických kyselin, které byly stanovovány v rozsahu od 5 do 500 ppm. Limity detekce všech analytů se pohybovali kolem 1 ppm. Měření bylo prováděno s roztokem PDC a CTAC ve vodě. Pro stanovení byla použita nepřímá detekce a to při 350 nm. Poslední metodou vyvinutou v rámci této práce lze stanovit aryltriazoly v rozsahu koncentrací od 5 do 500 ppm. Limit detekce se pohyboval kolem 1 ppm. Jako základní elektrolyt byl použit roztok tetraboritanu sodného. Vyvinuté metody byly validovány. Následně byla potvrzena vhodnost metod pro stanovení inhibitorů...
|
|
|
Studium interakce mezi borem a vybranými cukry
Vejvodová, Tereza ; Jelínek, Ivan (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
Interakce boru s cukry je důležitá pro pochopení úlohy boru jakožto přenašeče pro nukleotidy a karbohydráty. Arylboronové kyseliny mají taktéž široké uplatnění jako cukerné senzory, jelikož jsou to malé a flexibilní molekuly. Komplexy boru hrají klíčovou roli u borové neutronové záchytové terapie. Tato radiochemoterapie je významná při léčbě melanomů, maligních gliomů a jiných druhů rakoviny. V této práci byly připraveny komplexy boru s kyselinou askorbovou a glukosou, které byly charakterizovány pomocí hmotnostní spektrometrie s vysokou rozlišovací schopností (HRMS). Připravené komplexy byly studovány pomocí kolizí indukované disociace (CID), což vedlo k objasnění mechanismu jejich fragmentace. Klíčová slova Komplexy boru, kyselina askorbová, glukosa, sacharidy, hmotnostní spektrometrie, ionizace elektrosprejem, ESI-MS, kolizí indukovaná disociace, CID
|
host ::
RSS.