|
|
Studium interakcí podílejících se na mechanizmu separace v chromatografických separačních systémech
Kalíková, Květa ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Ševčík, Juraj (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta Katedra fyzikální a makromolekulární chemie Studium interakcí podílejících se na mechanizmu separace v chromatografických separačních systémech Autoreferát dizertační práce Květa Kalíková Praha 2009 Dizertační práce shrnuje výsledky získané během let 2005-2009 na Katedře fyzikální a makromolekulární chemie, PřF UK v Praze. Školitel: Doc. RNDr. Eva Tesařová, CSc. 2 OBSAH 1. Úvod 4 2. Cíle práce 4 3. Výsledky a diskuze 5 3.1 Charakterizace separačních systémů metodou LFER (publikace I) 5 3.2 Popis systémových píků v RP HPLC s vodnými mobilními fázemi (publikace II) 6 3.3 Příklady nalezení a využití optimalizovaných separačních systémů 9 3.3.1 Achirální systémy 9 3.3.1.1 Separace estrogenů (publikace III) 9 3.3.1.2 Separace 1,4-benzodiazepinů (připravovaná publikace) 9 3.3.2 Chirální systémy (publikace IV) 11 3.3.2.1 Optimalizace a validace HPLC metody pro enantioseparaci (±)-cloprostenolu (publikace V) 11 4. Závěry 12 5. Literatura 13 6. Seznam publikovaných prací 14 7. Příspěvky na konferencích 15 8. Životopis 17 3 1. Úvod Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) se řadí mezi nejčastěji používané separační metody. Vyniká vysokou spolehlivostí, dobrou opakovatelností a robustností. Výhodou této metody je možnost ovlivňovat separaci nejen volbou...
|
|
|
Heideggerovo pojetí zkušenosti
Ševčík, Jan ; Benyovszky, Ladislav (vedoucí práce) ; Němec, Václav (oponent)
Heideggerovo pojetí zkušenosti Abstrakt Práce si klade za cíl prozkoumat jeden z centrálních pojmů Heideggerovy pozdní filosofie. Zkušenost zde oproti pojetí v raném období jeho myšlení nabývá nové podoby vztahu ke světu a ke skrytosti a vykazuje několik základních rysů, které bude práce sledovat. Těmito rysy zkušenosti jsou: Celistvost, bezprostřednost, pasivita a proměna toho, kdo zakouší. Správné pochopení Heideggerova pojetí zkušenosti by mělo poskytnout významné vodítko k pochopení jeho pozdní filosofie a způsobu myšlení, který v ní propaguje. Má však i širší důsledky pro myšlení dnešní doby a pro uchopení nejen význačných zkušeností, například zkušenosti náboženské.
|
|
|
Využití zemědělského půdního fondu v katastrálním území Orlovice
Ševčík, Jan
V bakalářské práci se na základě studií analýz historických a současných mapových podkladů zabývám vývojem a využitím zemědělského půdního fondu v katastrálním území Orlovice. Tato práce je zaměřena na porovnání historického a současného stavu zemědělského půdního fondu, všeobecných informací o zemědělském půdním fondu a vývoj vlastnických vztahů k půdě. V práci jsou navržena opatření, která by přispěla k ochraně půdy a pomohla k celkovému zlepšení krajinného rázu v daném území.
|
|
|
Charakterizace separačních systémů pro dělení enantiomerů
Geryk, Radim ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Ševčík, Juraj (oponent) ; Nováková, Lucie (oponent)
(CZ) Dizertační práce je zaměřena na výzkum a charakterizaci retenčních a enantiodiskriminačních mechanismů chirálních chromatografických systémů. Detailní charakterizace systémů s moderními stacionárními fázemi poskytne komplexní pohled na interakce uplatňující se při separaci. Hlubší pochopení retenčního/separačního chování významným způsobem usnadní vývoj a optimalizaci metod pro separaci a stanovení celé řady sloučenin. Enantiodiskriminační potenciál polysacharidových stacionárních fází byl studován v podmínkách reversního a normálního módu HPLC. Stacionární fáze lišící se povahou polymerního řetězce (amylosa versus celulosa), navázáním chirálního polymeru na silikagelový nosič (pokrytá versus imobilizovaná stacionární fáze) či typem derivatizační skupiny byly porovnávány z hlediska retence a selektivity. V obou separačních módech vykazovaly amylosové chirální stacionární fáze vyšší enantioselektivitu především pro kyselé a bifunkční analyty. Chirální stacionární fáze na bázi derivatizované celulosy naopak ukázaly vyšší enantioseparační potenciál pro bazické analyty. Srovnání chromatografických dat získaných v reversním módu ukázalo, že pokrytá i imobilizovaná amylosová stacionární fáze vykazovala podobný enantioselektivitu pro kyselé analyty, zatímco pro enantioseparaci bazických látek byla...
|
|
|
Studium populačně specifických alterací v genech predisponujících ke vzniku karcinomu prsu v ČR
Judasová, Kristýna ; Ševčík, Jan (vedoucí práce) ; Holá, Dana (oponent)
Karcinom prsu je celosvětově nejčastějším maligním onemocněním u žen. Zhruba 10 % všech případů je hereditárního původu. V České republice je hlavním genetickým faktorem predisponujícím ke vzniku karcinomu prsu inaktivace tumor supresorového genu BRCA1. Hlavní funkcí BRCA1 je účast na opravě dvouřetězcových zlomů. V závislosti na buněčném cyklu je toto poškození opravováno nehomologním spojováním volných konců (NHEJ) nebo homologní rekombinací (HR). Při genetickém vyšetření pacientů z vysoce rizikových rodin jsou velmi často detekovány alternativní sestřihové varianty BRCA1, jejichž klinický význam je zcela neznámý. Vysvětlení podstaty hereditární formy karcinomu prsu je přitom kritickým faktorem pro včasnou diagnostiku a cílenou léčbu tohoto onemocnění. Na základě předchozích výsledků výzkumů prováděných na Ústavu biochemie a experimentální onkologie 1. Lékařské Fakulty Univerzity Karlovy byly vybrány dvě alternativní sestřihové varianty opakovaně detekované u vyšetřovaných jedinců. Cílem této práce bylo posoudit vliv alternativních sestřihových variant BRCA1Δ5 a BRCA1Δ10 na opravu dvouřetězcových zlomů DNA. Po zvýšení exprese těchto alternativních sestřihových variant v buňkách modelového systému, bylo provedeno stanovení aktivity HR a NHEJ pomocí in vitro DNA reparační analýzy. Dále byla...
|
|
|
Vznik a vývoj evropského právního režimu pro obchodování s povolenkami na emise skleníkových plynů
Ševčík, Jakub ; Žákovská, Karolina (vedoucí práce) ; Damohorský, Milan (oponent)
Cílem této práce je popis a následná analýza vzniku a vývoje evropského právního režimu pro obchodování s povolenkami na emise skleníkových plynů. Metodika práce se zaměřuje na zachycení procesů vzniku a vývoje režimu emisního obchodování jako procesů dynamických, majících své příčiny a důsledky, a nespočívá tak pouze v izolovaném popisu jejich příslušných stadií. Dynamika vývoje je analyzována v rámci jednotlivých základních prvků režimu emisního obchodování, přičemž je vždy přihlédnuto k relevantní judikatuře Soudního dvora EU. S ohledem na značnou komplexnost zpracovávaného tématu, a tedy i potřebu začlenění prováděné analýzy do určitého kontextu, je součástí práce také stručný výklad o fenoménu změny klimatu, včetně ekonomických souvislostí, a dále mezinárodním právním rámci vytvořeným za účelem řešení této problematiky.
|
|
|
The functional in vitro analysis of the BRCA1alternative splicing variants
Ševčík, Jan ; Kleibl, Zdeněk (vedoucí práce) ; Stopka, Tomáš (oponent) ; Macůrek, Libor (oponent)
Úvod: Inaktivace tumor supresorového genu BRCA1 je predispozičním faktorem vzniku karcinomu prsu a ovaria. Vznik funkčně odlišných nádorově specifických alternativních sestřihových variant může být možným mechanismem snižujícím aktivitu BRCA1 v procesu reparace dvouřetězcových zlomů DNA (DDSB). V této práci jsme funkčně charakterizovali dvě alternativní sestřihové varianty BRCA114-15 a BRCA117-19, nalezené v průběhu genetického screeningu jedinců s vysokým rizikem vzniku karcinomu prsu.Metody: Pro funkční in vitro analýzu jsme vytvořili modelový systém klonů buněčné linie MCF-7 stabilně exprimujících zkoumané varianty. Pomocí comet assay a konfokální imunomikroskopie jsme v tomto systému sledovali vliv BRCA114-15 a 17-19 variant na kinetiku reparace DDSB a proliferaci. Aktivita DNA reparačních procesů byla stanovena přímo pomocí in vitro NHEJ assay a nepřímo testem senzitivity na mitomycin C. Proliferační aktivita byla stanovena klonogenním testem a růstovými křivkami. Výsledky: Exprese BRCA114-15 a 17-19 zvyšuje v MCF-7 buňkách úroveň endogenního poškození DNA, zpomaluje reparaci DDSB, negativně ovlivňuje tvorbu reparačních komplexů v počáteční fázi reparace a prodlužuje jejich trvání. Varianty BRCA114-15 a 17-19 rozdílně ovlivňují aktivitu HR, NHEJ a radiosensitivitu MCF-7 buněk. Závěr: Zvýšení exprese...
|
|
|
Oprava dvouřetězcových zlomů DNA a její poruchy ve vztahu ke kancerogenezi
Komžák, Josef ; Ševčík, Jan (vedoucí práce) ; Vopálenský, Václav (oponent)
Reparační dráhy zajišťující opravu dvouřetězcových zlomů DNA (DSB) mají pro buňku zásadní význam při udržování genomové integrity. Dráhy podílející se na reparaci DSB jsou homologní rekombinace (HR), nehomologní spojování volných konců (NHEJ) a single-strand annealing (SSA). Tato práce je zaměřena především na popis mechanismů reparačních drah, jejich regulaci a poškození ve vztahu k patologickým projevům. Hlavní roli při reparaci hrají faktory, které se jí účastní. Pro HR jsou to MRN komplex, ATM, Rad51, BRCA1/2 a PALB2. Při NHEJ se uplatňují Ku70/80, DNA-PKcs, XRCC4 a DNA ligáza IV. Pro SSA je to pak Msh2-Msh3 a Rad1-Rad10. V případě poškození genů kódujících tyto faktory, může dojít k selhání reparačního mechanismu a k rozvoji maligního onemocnění. Nejčastějšími projevy mutací BRCA1/2 je hereditární forma karcinomu prsu a/nebo ovária (HBOC), mutace ATM způsobuje onemocnění ataxia telangiectasia a poškozením NBN (Nbs1) vzniká Nijmegen breakage syndrom. Další choroby, kterými se zde zabývám, jsou Wernerův syndrom a Fanconiho anemie. Detailní znalost procesů reparace DSB je nezbytná pro včasnou diagnostiku a efektivní terapii řady nádorových onemocnění. Jako příklad využití současného poznání o reparaci DSB zde diskutujeme koncept syntetické letality, jako specifický a efektivní terapeutický přístup. Tato...
|
|
|
Úloha protoonkogenu crk v invazivitě
Tomášová, Lea ; Rösel, Daniel (vedoucí práce) ; Ševčík, Jan (oponent)
Protoonkogen Crk byl identifikován jako onkogenní produkt ptačího retroviru v roce 1988. Je to adaptorový protein obsahující SH2 a SH3 vazebné domény. Díky těmto doménám umožňuje meziproteinové interakce a významně se tak podílí na přenosu signálu v buňce. Crk tvoří signální komplexy s mnoha proteiny a ovlivňuje tak řadu buněčných událostí, mezi nimi také pohyb buněk a jejich schopnost vytvářet tumory a invadovat do okolní tkáně. Zvýšená invazivita umožňuje nádorovým buňkám opouštět primární tumory a tvořit metastázy, což je velice problematický aspekt rakovinných onemocnění. Deregulace Crk proteinu byla pozorována u řady nádorových onemocnění, především pak v případě agresivních a vysoce metastatických nádorů. Tato práce popisuje způsoby, kterými se Crk může podílet na regulaci pohybu a invazivity buněk.
|
|
| |
host ::
RSS.