|
|
Chirální separace biologicky aktivních látek v chromatografii
Landl, David ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
- 3 - Abstrakt v češtině Tato diplomová práce je zaměřena na zhodnocení a porovnání enantioselektivního potenciálu dvou kolon, CHIRAL ART Amylose-SA a CDShell-RSP, na sadě 29 chirálních léčiv metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Separace enantiomerů probíhala ve třech módech: reverzním, normálním a polárně-organickém. Kolona CHIRAL ART Amylose-SA byla testována v normálním módu, kolona CDShell- RSP v reverzním a polárně-organickém. Kolona CHIRAL ART Amylose-SA obsahuje jako chirální stacionární fázi amylózu tris(3,5-dimethylfenylkarbamát), která je imobilizovaná na porézních silikagelových částicích o velkostí 3 µm. Kolona CDShell-RSP obsahuje jako chirální stacionární fázi hydroxypropyl-β-cyklodextrin, který je kovalentně navázán na pelikulárních částicích o velikosti 2,7 µm. V normálním módu byly použity mobilní fáze složené z hexanu a propan-2-olu. Dále byl testován vliv aditiv (triethylamin, diethylamin, kyselina trifluoroctová, směs diethylaminu a kyseliny trifluoroctové) v mobilní fázi na enantioseparaci analytů. Nejuniverzálnějším aditivem byla směs diethylaminu a kyseliny trifluoroctové. Celkově se na koloně CHIRAL ART Amylose-SA enantioseparovalo 22 analytů, z toho 10 na základní linii. Mobilní fáze pro reverzní mód byly složené z 10 mM octanu amonného (pH 3,0; 4,0; 6,5) a methanolu nebo...
|
|
|
Charakterizace nové stacionární fáze v hydrofilní interakční kapalinové chromatografii
Kadlecová, Zuzana ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná diplomová práce se zabývá podrobnou charakterizací nové diolové kolony, tj. Torus DIOL určené pro superkritickou fluidní chromatografii, v podmínkách hydrofilní interakční kapalinové chromatografie. Tato stacionární fáze má diolové ligandy vázané na tzv. BEH ("bridged ethylene hybrid") částicích, které umožňují používat stacionární fázi při vysokých teplotách, tlacích a v širokém rozsahu pH, což je výhoda oproti klasickým kolonám se silikagelovým nosičem. Na koloně Torus DIOL byla úspěšně provedena separace směsi pěti fluorovaných pesticidů. Retenční mechanizmus a vliv různých parametrů na retenci byl testován analýzou malých polárních látek (nukleobáze, uridin a jeho deriváty, kyselé, neutrální a bazické látky). Testováním vlivu množství acetonitrilu v mobilní fázi na retenci bylo zjištěno, že se na retenčním mechanizmu podílí jak rozdělování analytu mezi hydratovanou stacionární fázi a mobilní fázi, tak i adsorpce analytu na povrch stacionární fáze. Vliv pH vodné složky mobilní fáze na retenci a separaci analytů byl testován s následujícími pufrujícími roztoky: kyselina mravenčí, pH = 2,1; 10mM octan amonný, pH = 4,7 a pH = 9,5. Získané výsledky ukázaly, že hodnota pH vodné složky mobilní fáze výrazně ovlivňuje retenci pouze kyselých látek v závislosti na jejich hodnotě pKA. S...
|
|
|
Preparativní diastereomerní dělení silybinu a jeho sulfátů pomocí RP-HPLC
Kolářová, Petra ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Kalíková, Květa (oponent)
Z plodů ostropestřce mariánského (Silybum marianum) se získává standardizovaný extrakt silymarin, jehož hlavní komponentou je silybin. Tento flavonolignan je převážně odpovědný za léčivé účinky plodů ostropestřce: antioxidační, hepatoprotektivní, chemoprotektivní a protinádorové. Přírodní silybin se vyskytuje jako preparativně neseparovatelná ekvimolární směs diastereomerů A a B. Bylo prokázáno, že biologická aktivita silybinu A je odlišná od silybinu B, a že se v organismu konjuguje převážně na glukuronidy a sulfáty. Struktura sulfátů a jejich biologická aktivita není dosud vůbec známa. Cílem této práce je vývoj prakticky použitelné metody pro preparativní separaci diastereomerů silybinu A a B a jeho sulfátů, které jsou považovány za jedny z hlavních metabolitů. Byla vyvinuta původní preparativní metoda na dělení silybinu A a B v mobilní fázi tvořené 50% MeOH. Dále byla optimalizována preparativní metoda pro dělení směsi produktů vznikajících při sulfataci silybin-23-acetátu v mobilní fázi tvořené MeOH/H2O 60/40 (v/v) s přídavkem 10 ml/l HCOOH, na chromatografické koloně Labio C18 25×250 mm.
|
|
|
Studium interakcí podílejících se na mechanizmu separace v chromatografických separačních systémech
Kalíková, Květa
Předkládaná práce kombinuje teoretické přístupy směřující k objasnění separačních systémů a interakčních mechanizmů s aplikacemi pro konkrétní analytické účely. HPLC se řadí mezi nejčastěji používané separační metody. Volba vhodného separačního systému se často provádí empiricky, na základě zkušeností experimentátora, podle informací získaných z literatury, s využitím některých optimalizačních programů nebo čistě postupem pokus-omyl. Pro výběr optimálních separačních podmínek, tj. výběr vhodné stacionární fáze a mobilní fáze je však nutné hlubší poznání interakčních a retenčních mechanizmů. Jedním z možných semiempirických postupů charakterizace separačních systémů je metoda lineárních vztahů volných energií (LFER - Linear Free Energy Relationship). Proces optimalizace separace může velmi zkomplikovat výskyt systémových píků. Existují případy, kdy je daná systémová zóna detekovatelná a ve výsledném chromatogramu se objeví více píků než odpovídá počtu analyzovaných látek anebo systémová zóna "interaguje" se zónou analytu a nastává tzv. rezonance. Porozumění jevům probíhajícím v chromatografických separačních systémech má zásadní vliv jak na optimalizaci separačních podmínek tak na správnou interpretaci analytických dat, a tudíž výsledky analýzy. Model LFER byl použit k porovnání tří chirálních...
|
|
|
Charakterizace a porovnání nových kolon v reverzním módu HPLC
Putzová, Klára ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná bakalářská práce je zaměřena na zjištění a porovnání interakčních a separačních vlastností tří kolon, XBridge C18, XSelect CSH C18 a XSelect HSS C18 určených pro reverzní mód vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Všechny kolony obsahují oktadecylový ligand, ale liší se v typu nosiče, na který je ligand vázaný. Kolony byly porovnány z hlediska jejich silanolové aktivity, indexu hydrofobicity, tvarové selektivity a účinnosti za použití jednoduchých testů podle autorů Walterse, Engelhardta a Galushky. Dále byly optimalizovány podmínky pro separace vybraných pesticidů acetochloru, fomesafenu, isoproturonu, metazachloru a triflumuronu v mobilních fázích obsahujících acetonitril nebo methanol jako organický modifikátor a vodu. Testované kolony vykazovaly nízkou silanolovou aktivitu a střední až vysoký index hydrofobicity. Nízká silanolová aktivita všech tří kolon koreluje s tzv. endkapingem všech tří testovaných fází. Analyty byly více zadržovány v methanolové mobilní fázi, což souvisí s nižší eluční silou methanolu v porovnání s acetonitrilem v reverzním módu vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Doba analýzy vybraných pesticidů se lišila pro jednotlivé kolony při použití stejných chromatografických podmínek. Nejkratší doba analýzy byla získána na koloně XBridge C18, která také vykazovala...
|
|
|
Chirální separace biologicky aktivních látek v chromatografii
Landl, David ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
- 3 - Abstrakt v češtině Tato diplomová práce je zaměřena na zhodnocení a porovnání enantioselektivního potenciálu dvou kolon, CHIRAL ART Amylose-SA a CDShell-RSP, na sadě 29 chirálních léčiv metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Separace enantiomerů probíhala ve třech módech: reverzním, normálním a polárně-organickém. Kolona CHIRAL ART Amylose-SA byla testována v normálním módu, kolona CDShell- RSP v reverzním a polárně-organickém. Kolona CHIRAL ART Amylose-SA obsahuje jako chirální stacionární fázi amylózu tris(3,5-dimethylfenylkarbamát), která je imobilizovaná na porézních silikagelových částicích o velkostí 3 µm. Kolona CDShell-RSP obsahuje jako chirální stacionární fázi hydroxypropyl-β-cyklodextrin, který je kovalentně navázán na pelikulárních částicích o velikosti 2,7 µm. V normálním módu byly použity mobilní fáze složené z hexanu a propan-2-olu. Dále byl testován vliv aditiv (triethylamin, diethylamin, kyselina trifluoroctová, směs diethylaminu a kyseliny trifluoroctové) v mobilní fázi na enantioseparaci analytů. Nejuniverzálnějším aditivem byla směs diethylaminu a kyseliny trifluoroctové. Celkově se na koloně CHIRAL ART Amylose-SA enantioseparovalo 22 analytů, z toho 10 na základní linii. Mobilní fáze pro reverzní mód byly složené z 10 mM octanu amonného (pH 3,0; 4,0; 6,5) a methanolu nebo...
|
|
|
Charakterizace nové stacionární fáze v hydrofilní interakční kapalinové chromatografii
Kadlecová, Zuzana ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Předkládaná diplomová práce se zabývá podrobnou charakterizací nové diolové kolony, tj. Torus DIOL určené pro superkritickou fluidní chromatografii, v podmínkách hydrofilní interakční kapalinové chromatografie. Tato stacionární fáze má diolové ligandy vázané na tzv. BEH ("bridged ethylene hybrid") částicích, které umožňují používat stacionární fázi při vysokých teplotách, tlacích a v širokém rozsahu pH, což je výhoda oproti klasickým kolonám se silikagelovým nosičem. Na koloně Torus DIOL byla úspěšně provedena separace směsi pěti fluorovaných pesticidů. Retenční mechanizmus a vliv různých parametrů na retenci byl testován analýzou malých polárních látek (nukleobáze, uridin a jeho deriváty, kyselé, neutrální a bazické látky). Testováním vlivu množství acetonitrilu v mobilní fázi na retenci bylo zjištěno, že se na retenčním mechanizmu podílí jak rozdělování analytu mezi hydratovanou stacionární fázi a mobilní fázi, tak i adsorpce analytu na povrch stacionární fáze. Vliv pH vodné složky mobilní fáze na retenci a separaci analytů byl testován s následujícími pufrujícími roztoky: kyselina mravenčí, pH = 2,1; 10mM octan amonný, pH = 4,7 a pH = 9,5. Získané výsledky ukázaly, že hodnota pH vodné složky mobilní fáze výrazně ovlivňuje retenci pouze kyselých látek v závislosti na jejich hodnotě pKA. S...
|
|
|
Enantioselektivní potenciál sulfobutylether-β-cyklodextrinové chirální stacionární fáze
Folprechtová, Denisa ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kubíčková, Anna (oponent)
Tato diplomová práce je zaměřena na přípravu dvou nových chirálních stacionárních fází (CSF), obsahujících různě substituovaný sulfobutylether-β- cyklodextrin (SBE-β-CD), dynamickým pokrytím iontově výměnných stacionárních fází (SF), zjištění enantioseparační schopnosti a stability nově připravených CSF. Tyto parametry byly testovány na sadě chirálních analytů. Testovaná sada obsahovala strukturně odlišné skupiny analytů: benzodiazepiny (oxazepam, lorazepam), fenothiaziny (thioridazin, promethazin), β-blokátory (labetalol, pindolol, propranolol, alprenolol), profeny (karprofen, fenoprofen, flurbiprofen, indoprofen), flavanony (6-hydroxyflavanon, 7-hydroxyflavanon), DL-tryptofan a jeho deriváty (5-OH-DL-tryptofan, 5-F-DL-tryptofan, DL-tryptofan butylester a blokovanou aminokyselinu (t-Boc-DL-tryptofan)), dipeptidy glycyl-DL-fenylalanin a glycyl-DL-tryptofan a Trogerovu bázi. Chirální separace probíhaly v reverzním módu vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Testované mobilní fáze byly tvořeny těmito složkami: methanol/kyselina mravenčí (pH 2,10) a methanol/10mmol l-1 octan amonný (pH 4,00) v různých objemových poměrech. Na první připravené CSF s hexasubstituovaným SBE-β-CD byly při použití kyseliny mravenčí jako vodné složky mobilní fáze nalezeny podmínky pro enantioseparaci jedenácti analytů, z...
|
|
| |
|
|
Studium interakcí podílejících se na mechanizmu separace v chromatografických separačních systémech
Kalíková, Květa ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Ševčík, Juraj (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Přírodovědecká fakulta Katedra fyzikální a makromolekulární chemie Studium interakcí podílejících se na mechanizmu separace v chromatografických separačních systémech Autoreferát dizertační práce Květa Kalíková Praha 2009 Dizertační práce shrnuje výsledky získané během let 2005-2009 na Katedře fyzikální a makromolekulární chemie, PřF UK v Praze. Školitel: Doc. RNDr. Eva Tesařová, CSc. 2 OBSAH 1. Úvod 4 2. Cíle práce 4 3. Výsledky a diskuze 5 3.1 Charakterizace separačních systémů metodou LFER (publikace I) 5 3.2 Popis systémových píků v RP HPLC s vodnými mobilními fázemi (publikace II) 6 3.3 Příklady nalezení a využití optimalizovaných separačních systémů 9 3.3.1 Achirální systémy 9 3.3.1.1 Separace estrogenů (publikace III) 9 3.3.1.2 Separace 1,4-benzodiazepinů (připravovaná publikace) 9 3.3.2 Chirální systémy (publikace IV) 11 3.3.2.1 Optimalizace a validace HPLC metody pro enantioseparaci (±)-cloprostenolu (publikace V) 11 4. Závěry 12 5. Literatura 13 6. Seznam publikovaných prací 14 7. Příspěvky na konferencích 15 8. Životopis 17 3 1. Úvod Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) se řadí mezi nejčastěji používané separační metody. Vyniká vysokou spolehlivostí, dobrou opakovatelností a robustností. Výhodou této metody je možnost ovlivňovat separaci nejen volbou...
|
host ::
RSS.