|
Kaspazové inhibitory a regulace tvorby cytokinů z rodiny interleukinu 1
Brabcová, Eva ; Stříž, Ilja (vedoucí práce) ; Holáň, Vladimír (oponent)
Prozánětlivé cytokiny z rodiny IL-1 hrají klíčovou roli v imunitních a imunopatologických reakcích a jsou zapojeny v počátečních fázích rejekce. Jednou z jejich rozmanitých funkcí je indukce chemokinů, které atrahují imunitní buňky do místa poškození. Cílem naší práce bylo posoudit efekt prozánětlivých cytokinů na uvolnění chemokinů a indukci mRNA v epiteliální buněčné linii ledvinového a plicního původu. Dále jsme testovali efekt inhibitorů kaspasy-1, izolovaných ze Streptomyces nodus (manumycin, asukamycin, MM273), na uvolnění IL-1 beta a IL-18 z lidských makrofágů. Protože jsou tyto cytokiny štěpeny do jejich aktivní podoby kaspasou-1, inhibice enzymové aktivity kaspasy-1 může být perspektivní terapeutický přístup pro zmírnění zánětlivé reakce. V našich experimentech jsme jako modelové buňky používali buněčnou linii odvozenou od ledvinového adenokarcinomu (RA), A549 linii buněk (alveolar type II-like cells) a THP-1 monocyto/makrofágovou buněčnou linii. Indukce mRNA pro chemokiny byla vyhodnocena oligoarray systémem a hladiny chemokinů a cytokinů v supernatantech buněk byly měřeny technologií Luminex nebo ELISA. Naše data ukázala, že obě linie epiteliálních buněk produkovaly konstitutivně převážně CXC chemokiny atrahující neutrofily (CXCL5/ENA-78, CXCL8/IL-8) a některé CC chemokiny (CCL5/RANTES,...
|
| |
|
Cytotoxicita a metabolismus doxorubicinu v buněčné linii MCF7
Hanušová, Veronika ; Šimůnek, Tomáš (oponent) ; Skálová, Lenka (vedoucí práce)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Bc. Veronika Hanušová Titul, jméno, příjmení školitele: Doc. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Cytotoxicita a metabolismus doxorubicinu v buněčné linii MCF-7. Doxorubicin (DOX) patří mezi antracyklinová chemoterapeutika významně se podílející na léčbě mnoha solidních nádorů, včetně karcinomu prsu, ale také mnoha hematoonkologických onemocněních. DOX je metabolizován na 13-OH-doxorubicinol (DOX-OL) produkovaný zejména karbonyl reduktasou 1 (CBR1). DOX-OL je méně antineoplastický, ale více kardiotoxický než původní sloučenina. Cílem této práce bylo studium redukce DOX a testování možného zvýšení cytotoxicity DOX inhibicí jeho reduktas. K experimentům byla zvolena buněčná linie MCF-7, odvozená z prsního adenokarcinomu. Nejprve bylo zjištěno vhodné složení kultivačního média a optimalizován postup při přípravě vzorku pro HPLC analýzu. Při studiu metabolismu DOX v cytosolu MCF-7 buněk působil oracin (potencionální cytostatikum) jako významný kompetitivní inhibitor reduktas DOX. V testech cytotoxicity působil DOX toxičtěji v buňkách s přídavkem séra do média, oracin byl naopak toxičtější v buňkách bez přídavku séra. Kombinace DOXu s oracinem působila toxičtěji než...
|
| |
|
Transport of ion channel blockers across the blood-brain barrier in vitro
Leblochová, Hana ; Opletalová, Veronika (vedoucí práce) ; Štaud, František (oponent)
Transport of ion channel blockers across the blood-brain barrier in vitro Diploma thesis, 2010 Hana Leblochová Abstrakt Pro účel této diplomové práce bylo vybráno šest různých blokátorů iontových kanálů běžně používaných v klinické praxi (verapamil, diltiazem, nefedipin, fenobarbital, memantin a amantadin). Je dobře známo, že během terapie těmito látkami se mohou vyskytnout nežádoucí účinky v centrálním nervovém systému. Proto byly provedeny jak jednotlivé, tak i skupinové transportní studie, aby bylo možno porovnat u zvolených blokátorů iontových kanálů jejich schopnost transportu přes hematoencefalickou bariéru (HEB), popřípadě zhodnotit interakce mezi nimi. Získaná data o každé látce použité v jednotlivých a skupinových studiích byla stanovena za použití Transwell in vitro modelu hematoencefalické bariéry tvořeného humánní buněčnou linií ECV304. Pro normalizaci dat o prostupnosti látek přes HEB byly použity vnitřní standardy diazepam a karboxyfluorescein. Podle dat získaných v jednotlivých studiích prostupoval nifedipin (látka účinkující na periferii) přes HEB rychleji než vnitřní standard diazepam (působící v CNS) a mnohem rychleji než ostatní blokátory iontových kanálů, jež účinkují též na periferii. V klinické praxi to může znamenat, že nifedidin použitý při léčbě konkrétního klinického problému může...
|
|
Poškození DNA vyvolané sirným yperitem
Říhová, Helena ; Vopršalová, Marie (vedoucí práce) ; Melicharová, Ludmila (oponent)
V naší práci jsme zjišťovali druh a rozsah poškození způsobeného sirným yperitem za použití kometového testu. Sirný yperit patří mezi bojové chemické látky a je zařazen do kategorie zpuchýřující látek. Reaguje s velkým množstvím buněčných makromolekul (např. DNA, RNA a proteiny). Indukuje alkylaci DNA. Kometový test je univerzální a citlivá metoda pro měření jednoduchých a dvojitých zlomů, pyrimidinových dimerů indukovaných UV zářením, oxidovaných bazí a alkylačních poškození DNA. Cílem naší práce bylo zjistit, jak mohou souviset rozvolněné fragmenty DNA s množstvím zlomů. Dále jsme se zajímali o mechanismus poškození molekuly DNA v buňkách způsobené sirným yperitem. Byly použity buněčné linie HeLa, UV-20, A549 a AA8. Nejprve jsme studovali vliv mezi křížovými vazbami způsobenými sirným yperitem a zlomy způsobenými styrenoxidem. Zjistili jsme, že sirný yperit je schopen tvořit křížové vazby už při velmi nízkých koncentracích, čímž zabraňuje rozvolnění fragmentů DNA způsobených zlomy. Pomocí enzymů jsme zjišťovali druh poškození DNA indukovaného sirným yperitem. Nejprve jsme použili endonukleasu III (Endo III). Endo III je protein z E. coli, který pracuje jako N- glykosylasa i jako AP-lyasa. Způsobuje zlomy v apurinových místech nebo v místech oxidativního poškození molekuly DNA. Postupně jsme...
|
|
Antimicrobial lytic factors of the coelomic fluid of Earthworms
Josková, Radka ; Bilej, Martin (vedoucí práce) ; Horák, Petr (oponent) ; Prokešová, Ludmila (oponent)
2. SOUHRN Bezobratli jsou Siroce rozslienou skupinou iivodichri tijicich ve velice rodidnfch podminkdch. StrategiepfeZitije u bezobratlfchd6najak kdtkou dobouZivotaa veL[y'mmnoZstvlmpotomstva,tak piedeviim eistenci mnoZstvinejnlzrdjllch obrannjchmechanizrndridinndrozpoa{vajicich a eliminujicichcizorodCldtky. Objektemz6jmu imunologu se obrann6mechanizmylaoulkovcri staly vposlednich dtyficeti letech. U kroutkovcrl, stejnEjako u ostatnichbezobratlfch, nebyla zjiltdna pFltomnostimunoglobulinri,llmfocytri, ad jinfch sloZekadaptivniimunity. Ve svd disertadniprAci se v6nuji detailnlmupopisundktenfchobrannlch molekul piluozenCimunity kouZkovcri. 1. Lysorym je erzym sesilnouantibakteridlnlaktivitou,jehoi piitomnostbylapopsdnau iady organizmt. My jsme detekovalimolekululysozymuu ilrdy Eiseniaandrei (dftlveE.fetida anfuei) na rlrovnistruktury afunkce.Molekuldmicharakterizacetohotoproteinuumohluje sledov6nipfirozeni imunity u ffZal. 2. Cytolyticky efektcoelomovCtelr.nnyE.fetidabyl popsdnv experimentechs TNF-senzitivnlnedorovou bunddnoulinii L929. Ndsledn6izolacelytickich molekul vedlak identifikaci proteinuo velikosti 42-kDa, kter! byl nazv{ncoelomovjm cytolytickfm faktorem - CCF.Bylo zji5tdno,ZemolekulaCCFje piitomna tak6v coelomov6tekutinddalSihokouikovce - Lumbricastetestis. PfitomnostmolekulpodobnfchCCF byla vt6to...
|
|
Oxidative damage by organic extracts from urban air particulate matter
Hanzalová, Kateřina ; Rössner, Pavel (vedoucí práce) ; Machala, Miroslav (oponent)
The aim of this master thesis was to investigate the ability of selected individual carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons (c-PAHs: benzo[a]pyrene, B[a]P; dibenzo[a,l]pyrene, DB[a,l]P), an artificial mixture of c-PAHs (c-PAH mix) and extractable organic matter (EOM) from urban air particulate matter (PM) to induce oxidative damage in vitro. Two cell lines (human hepatoma cells, HepG2, and human diploid lung fibroblasts, HEL) were treated for 24 h and 48 h with various concentrations of compounds or mixtures. The studied oxidative stress markers included 8-oxodeoxyguanosine (8-oxodG) as a marker of oxidative DNA damage, 15-F2t-isoprostane (15-F2t-IsoP) as a marker of lipid peroxidation and protein carbonyl groups as a marker of oxidative damage to proteins. The response of the cell lines to the tested compounds and mixtures differed substantially. In summary the results demonstrate the ability of EOM to induce oxidative damage to DNA and lipids after 24 h of treatment and to proteins after 48 h, in HepG2 cells. The effect of c-PAHs was substantially less. The induction of oxidative damage by c- PAHs and EOM in HEL cells was weak. Since c-PAHs had lower ability to cause oxidative damage that was limited only to longer incubation periods, it is probable that other components of EOM are responsible for...
|
|
Rozdílná jaderná lokalizace aberantních a normálních homologů chromosomu 8 v intaktních nebo NaBt diferencovaných buňkách HT-29
Harničarová, Andrea ; Bártová, Eva ; Kozubek, Stanislav
Lidská adenokarcinomová linie HT-29 je charakteristická početnými strukturálními aberacemi chromozómů. Buňky HT-29 mají za normálních podmínek nediferencovaný fenotyp, v přítomnosti různých induktorů diferenciace, např. butyrát sodný (NaBt), dochází k jejich přeměně na entorycyty, která je provázena řadou biochemických a morfologických změn. V těchto buňkách jsme prostřednictvím metody FISH v rámci homologického páru chromozomů 8 rozlišili aberantní a normální chromozóm. Analýzy jaderných parametrů ukázaly rozdíl v radiálním umístění mezi chromozómy. V porovnání s normálním chromozómem 8, byl aberantní chromozóm umístěn blíže k periferii jádra. Přítomnost induktoru NaBt neměla vliv na radiální distribuci normálního a aberantního chromozómu.
|
|
Vliv flavonoidů na metabolismus xenobiotik
Smetanová, Anna ; Szotáková, Barbora (vedoucí práce) ; Boušová, Iva (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Mgr. Anna Smetanová Titul, jméno, příjmení školitele: Doc. Ing. Barbora Szotáková, Ph.D. Název rigorózní práce: Vliv flavonoidů na metabolismus xenobiotik Flavonoidy jsou široce rozšířené sekundární metabolity rostlin s protektivním účinkem proti rakovině. Jedním z protektivních mechanismů účinku je modulace biotransformačních enzymů. Xenobiotika - heterocyklické aromatické aminy jsou látky potenciálně karcinogenní, které vznikají při běžné domácí přípravě masa a ryb. Prvním biotransformačním krokem heterocyklických aromatických aminů je aktivace prokarcinogenů na aktivní N-hydroxy metabolity cytochromem P4501A2 (CYP1A2). Bylo by žádoucí, kdyby flavonoidy vhodným způsobem modulovaly enzymovou aktivitu, aby byly eliminovány nežádoucí účinky heterocyklických aromatických aminů. V této práci jsme zjišťovali vliv flavonoidů rutinu a kvercetinu a heterocyklických aromatických aminů 2-amino-3-methylimidazo[4,5-f]chinolinu (IQ) a 2-amino-3,8-dimethylimidazo[4,5-f]chinoxalinu (MeIQx) na aktivitu CYP1A v buněčné linii LS174T a HCT-8. Rutin, kvercetin, IQ a MeIQx nebyly pro buňky cytotoxické do koncentrace 50 µM. Kvercetin byl ve vyšších koncentracích cytotoxický. Kvercetin je...
|
host ::
