|
|
Immunocomplexes of IL-2 and anti-IL-2 mAbs as a novel class of selective and extremely potent immunostimulators
Tomala, Jakub ; Kovář, Marek (vedoucí práce) ; Smetana, Karel (oponent) ; Špíšek, Radek (oponent)
vi SOUHRN Interleukin 2 (IL-2) se využívá jak v nádorové terapii, tak v mnoha dalších odvětvích včetně terapie chronických virových onemocnění či jako adjuvans ve vakcínách. Nicméně léčba pomocí IL-2 je limitována vážnými vedlejšími účinky spojenými s nezbytným vysoko dávkovaným léčivem. Nedávná studie popsala situaci, kde určité anti-IL-2 monoklonální protilátky (mAb) místo blokování funkce IL-2 jeho biologickou aktivitu potencovaly. Výsledkem vazby IL-2 a anti-IL-2 mAb je pak vznik superagonistických imunokomplexů s mnohem vyšší a selektivnější biologickou aktivitou v porovnání s volným IL-2 in vivo. Toto zjištění by mohlo v konečném důsledku vést ke zlepšení IL-2 terapií překonáním problémů spojených s jeho podáváním. Prokázali jsme, že imunokomplexy složené z IL-2 a anti-IL-2 mAb S4B6 (IL-2/S4B6) převážně stimulují buňky exprimující CD122 a CD132 (dimerní IL-2 receptor), i.e. NK a paměťové CD8+ T lymfocyty, stejně jako Treg, T a NKT buňky. IL-2/S4B6 jsou schopné indukovat expanzi aktivovaných naivních CD8+ T buněk a následný vznik funkční paměťovým buňkám podobné CD8+ T buněčné populace. Navíc mají jasný terapeutický potenciál jak samy o sobě, tak v kombinaci s novým typem cytostatik na bázi poly(N-(2-hydroxypropyl) metacrylamidu) (HPMA), což jsme ukázali na nádorovém modelu BCL1 leukémie a B16F10...
|
|
|
Genetic and molecular factors influencing the outcome of solid organ transplantation
Pavlova, Yelena ; Slavčev, Antonij (vedoucí práce) ; Kalina, Tomáš (oponent) ; Mrázek, František (oponent)
Souhrn transplantovaných orgánů. Rejekce je reakci imunitního systému příjemce proti neshodným rejekce) mechanizmy. Mezi genetické faktory, které mohou mít - like receptorů (KIR), cytokinové polymorphysmy a další geny. Předtransplantační vyšetření těchto faktorů - Molekulární faktory - - v krvi příjemce můžou jednak napomoci hodnocení rizika rejekce, jednak sloužit jako mark a závěry jsou následující. Etnikum hraje velkou roli v distribuci KIR genů, genů KIR ligandů a v zastoupení jednotlivých KIR haplotypů. Toto se můsí brát do úvahy při extrapolaci údajů získaných z jiných etnických skupin a při provádění srovnávacích studií. Naše studie prokázala, že kombinovaná produkce protilátek proti HLA I. a II. třídy je nejrizikovější pro vznik humorální rejekce jak u příjemců ledvin, tak u příjemců srdce, zatímco předtransplantační produkce MICA protilátek nemá výrazný vliv na výskyt humorální nebo buněčné rejekce. Koncentrace sCD30 před a/nebo po transplantaci není dostatečně spolehlivým samostatným prediktorem AMR a/nebo CR u příjemců ledvin. Avšak u pacientů s protilátkami proti HLA antigenům, měření koncentrace sCD30 napomáhá k detekci pacientů s největším a nejnižším rizikem rejekce. Jsme také zjistili, že hodnoty růstového faktoru hepatocytů (HGF) naměřené před a po transplantaci nejsou v přímé korelaci s...
|
|
|
Studium indukce intestinálních konjugačních enzymů doplňky stravy
Hrdinová, Johana ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Bárta, František (oponent)
Cytochromy P450 (CYP) jsou enzymy hrající důležitou roli při metabolismu exogenních látek (například léčiv, kancerogenů, polutantů) a účastnící se metabolismu hydrofobních endogenních substrátů (například sterolů, mastných kyselin, prostaglandinů). Cytochromy podrodiny CYP1A se účastní aktivace prekancerogenů. Jelikož konzumace potravních doplňků obsahujících chemopreventivní látky (například flavonoidy), které mohou bránit procesu kancerogeneze, v posledních letech výrazně stoupá, přestože tyto látky mohou mít na organismus také negativní účinek. Jsou totiž schopné cytochromy P450 indukovat, a tím navýšit riziko aktivace prekancerogenů. V této práci byl sledován indukční efekt některých flavonoidních látek: β-naftoflavonu, myricetinu, dihydromyricetinu a léčiva obsahujícího výtažek z červených listů vinné révy - Antistaxu®.
|
|
|
Preparation of Monoclonal Antibodies Against VP2 Protein of Human Polyomaviruses
Vochyánová, Klára ; Drda Morávková, Alena (vedoucí práce) ; Růžičková, Šárka (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo připravit dva proteinové antigeny a dvě monoklonální protilátky, založené na minoritním proteinu VP2 lidských polyomavirů BK viru a Polyomaviru karcinomu Merkelových buněk. Proběhla příprava monoklonální protilátky proti unikátní části proteinu VP2 BK viru (N-koncový epitop, který se nenachází u proteinu VP3). Buněčná linie produkující protilátku s touto specificitou nebyla zatím nikdy ustavena kvůli nízké imunogenicitě tohoto epitopu. Náš přístup byl z hlediska imunizace myší úspěšný, ale později v průběhu přípravy nastaly vážné problémy se stabilitou hybridomové linie. Dalším cílem této práce byla příprava monoklonální protilátky cílené na sekvenci proteinu VP2 Polyomaviru karcinomu Merkelových buněk. Imunizace myší a hybridomová fúze byly provedeny úspěšně. Po čtyřech kolech klonování za účelem přípravy ustaveného klonu bylo devět klonů vybráno k rozpěstování. Rozpěstování pravděpodobně vedlo ke snížení specificity protilátky a ke ztrátě produkce u většiny hybridomů. Jednou zopakované klonování by mělo vyústit v získání ustaveného klonu s dostatečnou produkcí. Příprava dvou proteinových antigenů byla provedena ve dvou expresních systémech. DNA kódující VP2 protein BK viru zkrácený na C-konci a fúzovaný s His-tagem byla klonována do vektoru vhodného pro expresi v...
|
|
|
Protilátková odpověď specifických hostitelů vůči antigenům ptačích schistosom
Turjanicová, Libuše ; Mikeš, Libor (vedoucí práce) ; Kolářová, Libuše (oponent)
Tato práce zaměřená na humorální odpověď specifických hostitelů proti antigenům různých vývojových stadií ptačích schistosom T. regenti a T. szidati navazuje na předchozí výzkum protilátkové odpovědi u nespecifických hostitelů (myš, člověk). Pomocí metod ELISA a na western blotu byla testována séra experimentálně nakažených kachen a séra z ulovených divokých kachen. Séra byla odebírána v předem určených intervalech. Výsledky ELISA testu ukazují průběh humorální odpovědi po infekci ptačími schistosomami. Po infekci T. regenti se 20. d.p.i. (den po infekci) signifikantně zvýšila hladina specifických protilátek IgY proti homogenátu cerkárií T. regenti. U kachen nakažených druhem T. szidati nebyl podobný vývoj zaznamenán. Změny hladiny specifických IgM proti homogenátu cerkárií T. szidati byly zaznamenány pouze u kachen nakažených v době plné imunokompetence a u opakovaně infikovaných kachen. Jednalo se o mírné zvýšení hladiny IgM 10. d.p.i. U ulovených kachen nebyla při celkovém vyšetření prokázána infekce ptačími schistosomami, což potvrzují i výsledky ELISA. Protilátky IgY z sér kachen infikovaných T. regenti na imunoblotu silně rozpoznávaly 2 antigeny v oblasti 49-47 kDa a 47-45 kDa. Objevily se i další reakce, které však nebyly zaznamenány u všech jedinců. Western blot, při němž jako antigen...
|
|
|
Vývoj terapeutického prostředku pro pasivní imunizaci nemocných cystickou fibrosou
Pacholíková, Lenka ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Švédová, Martina (oponent)
Cystická fibróza (CF) je jedním z nejčastějších dědičných onemocnění. Toto vrozené onemocnění, způsobené mutací genu produkujícího protein CFTR, postihuje zejména dýchací a trávicí soustavu. Z hlediska ohrožení života je nejzávažnější postižení respiračního systému. Pacienti s CF trpí opakovanými infekcemi, které vedou k rozvoji chronického zánětu a postupné destrukci plicní tkáně. Typickým specifickým mikroorganismem kolonizujícím plíce pacientů s CF je Pseudomonas aeruginosa. Právě infekce plic vyvolané tímto mikroorganismem jsou nejčastější příčinou úmrtí pacientů s CF. V současnosti jsou nejčastěji v terapii infekcí P. aeruginosa používána antibiotika. Vzhledem ke vzniku rezistencí jsou však hledány nové možnosti terapie. Jednou z možností je pasivní imunizace CF pacientů pomocí specifických slepičích protilátek proti P. aeruginosa. Pro sledování vlivu IgY na adhezi bakterií P. aeruginosa na buňky plicního epitelu bylo potřeba nalézt vhodný modelový systém. V této souvislosti byl hledán objektivní způsob vyhodnocení těchto adhezních testů založený na vizualizaci bakterií P. aeruginosa a plicních epiteliálních buněk. Nejprve bylo testováno značení bakterií P. aeruginosa pomocí sloučenin CellTracker, resazurinu, FITC a následně také pomocí barviva PKH 26. Značení plicních epiteliálních buněk bylo...
|
|
|
Opakovaná expozice slinám flebotomů: imunitní odpověď hostitele a vliv na přenášené patogeny
Pohanková, Lucia ; Kolářová, Iva (vedoucí práce) ; Fialová, Anna (oponent)
5 Abstrakt V průběhu sání infikovaného flebotoma jsou do hostitele inokulovány sliny flebotoma, které mohou silně ovlivnit odpověď imunitního systému. Pokud se jedná o naivního hostitele, průběh infekce bývá většinou horší. U kožní leishmaniózy se léze vyvíjejí dřív, bývají destruktivnější a přetrvávají delší dobu. U hostitelů žijících v endemických oblastech výskytu leishmaniózy a jejich přenašečů bývají hostitelé často vystaveni sání neinfikovaných flebotomů. Pro hostitele jsou sliny antigenní a indukují tvorbu specifické buněčné a protilátkové odpovědi. Tato imunitní odpověď navozuje protektivitu proti leishmaniové infekci a liší se u různých hostitelů. Pokusy byly nečastěji dělané na myším a psím modelu. U lidí jako hostitelů je těžké sledovat vývoj leishmaniové infekce po předchozí expozici, proto se u lidí sledují zejména hladiny protilátek, podle kterých pak můžeme určit míru poštípání flebotomy a riziko přenosu leishmaniózy. Klíčová slova: Lutzomyia, Phlebotomus, DTH, protilátky, IgG,
|
|
|
Vyšetření celiakie v souvislosti s osteoporózou
SLADKÁ, Romana
Ve své bakalářské práci jsem se zabývala vyšetřením celiakie v souvislosti s osteoporózou. Cílem této práce bylo stanovení hladiny protilátek v séru proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA a IgG u pacientů s prokázanou osteoporózou. Na základě výsledků dané studie vyhodnotit možné souvislosti osteoporózy a celiakie. Dále porovnání výsledků s literárními údaji. V první části práce jsem se zaměřila na stávající poznatky o chorobách celiakie a osteoporózy. U celiakie jsem nastínila historii choroby, charakteristiku onemocnění. Také jsem se zaměřila na diagnostiku celiakie pomocí laboratorních sérologických testů ELISA. A na závěr jsem se zmínila o léčbě bezlepkovou dietou. U osteoporózy jsem popsala její historii, příznaky, formy, rizika a komplikace, které osteoporóza přináší. Metodickou část mé práce jsem prováděla v biochemicko-hematologické laboratoři Stafila, s. r. o. se sídlem v Českých Budějovicích, kde jsem zaměstnána. Měření jsem prováděla na úseku mikrobiologie, kde se také provádí imunologická vyšetření. Prováděla jsem screening celiakie ze séra a to stanovení protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA a IgG metodou ELISA sandwich. Měření jsem prováděla u 58 sér pacientů s diagnózou osteoporózy. Séra jsem získávala za pomoci mé vedoucí práce MUDr. Marie Ládové, která vede osteologickou ambulanci v Českých Budějovicích. Sérologické markery celiakie jsem stanovovala enzymoimuno analýzou na automatickém analyzátoru Nexgen Four od firmy Test-Line. V této části popisuji analyzátor Nexgen Four, jeho specifikaci, vlastní kontroly přístroje, kalibrace a kontroly stanovení. Dále popisuji princip metody ELISA sandwich. Jde o nekompetetivní enzymoimunoanalýzu. Na závěr této části jsem popsala metodický postup práce, přípravu pracovních roztoků a kontrol. Přípravu a ředění vzorků k analýze a pracovní postup pro vyhodnocení semikvantitativní indexem pozitivity a kvantitativní U/ml. Dále jsem pokračovala vlastním měřením. U všech kroků, které jsem během měření provedla jsem postupovala dle standardních operačních postupů laboratoře Stafila, s. r. o.. Výsledky mého měření jsem zpracovala ve třetí části této práce. Naměřené výsledky jsem zanesla do tabulky: kvantitativní vyjádření hladiny protilátek proti tTg IgA a IgG (U/ml) v sérech pacientů s prokázanou osteoporózou. Dále jsem vypracovala graf: procentuální vyjádření výsledků stanovení hladiny protilátek proti tTg IgA a IgG v séru u pacientů s prokázanou osteoporózou. Do výsledků jsem dále zařadila kalibrační grafy pro metody tkáňové transglutaminázy IgA a IgG a tabulky naměřených hodnot kontrol pro tyto metody. Z 58 zkoumaných vzorků osteoporotických pacientů byly 3 vzorky pozitivní, tedy měly hodnotu hladiny protilátek tTg IgA a IgG vyšší jak 22 U/ml. 1 vzorek měl hraniční hodnoty, to znamená, že měl protilátky proti tTg IgA a IgG v rozmezí 18 až 22 U/ml. Pozitivní výsledky jsem naměřila u pacientů narozených v roce 1976 a 1978. Hraniční výsledek měl pacient narozen v roce 1962. V grafu č. 1 jsem naměřené hodnoty protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA a IgG vyjádřila procentuálně. Z 58 měřených vzorků byly 3 vzorky pozitivní, což představuje 5% a 1 vzorek hraniční, což představuje 2%. Ve své analýze jsem vycházela z dostupnosti zkoumaného materiálu a možností naší laboratoře. Celiakie je onemocnění, kterému se v dřívější době nevěnovalo příliš pozornosti. Hypotéza o souvislosti osteoporózy s celiakií se potvrdila.
|
|
| |
|
| |
host ::
RSS.