|
|
Function of SWI/SNF chromatin-remodeling complex in tumor initiation and progression of melanoma cells
Ondrušová, Ľubica ; Vachtenheim, Jiří (vedoucí práce) ; Goetz, Petr (oponent) ; Hejnar, Jiří (oponent)
Čoraz častejšie je vznik nádorových ochorení spájaný so zmenami chromatínovej remodelácie. SWI/SNF chromatín-remodelujúce komplexy sa podieľajú na regulácii génovej expresie zmenou chromatínovej štruktúry a v závislosti na kontexte, môžu vystupovať ako transkripčné aktivátory alebo represory. Energiu pre remodeláciu poskytuje ATPázová podjednotka, ktorou môže byť buď proteín Brm (Brahma) alebo Brg1 (Brahma related-gene 1). Malígny melanóm je agresívny druh rakoviny, ktorý sa vyznačuje vysokou rezistenciou k súčasnej terapii. Kľúčové postavenie v biológii melanómu má transkripčný faktor MITF (microphthalmia-associated transcription factor), ktorý stojí v centre transkripčnej regulácie od embryonálneho vývoja normálnych melanocytov, ich diferenciácie, udržania identity a prežívania nielen normálnych, ale aj nádorových melanocytov. V našej práci sme zistili, že aktívny SWI/SNF komplex je nevyhnutný pre expresiu MITF. Tento komplex je taktiež dôležitý pre expresiu niektorých cieľových génov MITF. Prežívanie melanómových buniek je absolútne závislé na funkčnom komplexe SWI/SNF a bunky si zachovávajú vysokú expresiu jednotlivých zložiek. Primárne sa v regulácii MITF uplatňujú Brg1-obsahujúce subkomplexy, ktoré môžu byť po strate expresie Brg1 funkčne kompenzované subkomplexami s Brm. V každom prípade pre...
|
|
|
Molecular mechanisms of tumor pathogenesis of Hedgehog signaling pathway in selected tumor types
Kreisingerová, Kateřina ; Vachtenheim, Jiří (vedoucí práce) ; Macůrek, Libor (oponent) ; Uldrijan, Stjepan (oponent)
Předkládaná dizertační práce se zaměřuje na roli signální cesty Hedgehog (HH) v nádorové patogenezi. Signální dráha HH je evolučně velmi konzervovaná signální dráha, která hraje zásadní roli v embryonálním vývoji. V dospělosti je její aktivita silně omezená, aktivovaná je především v kmenových a progenitorových buňkách například mozku, plic, kůže nebo prostaty. Důležitou roli hraje v udržování homeostázy tkání a v jejich regeneraci. Aberantně aktivovaná dráha HH je klíčová v progresi nádorů. Cílem předkládané práce bylo objasnit nové detaily týkající se signalizace HH dráhy. Podařilo se nám identifikovat nový cílový gen HH dráhy - anti-apoptotický protein survivin, jehož exprese je považována za významný nádorový marker spojovaný se špatnou prognózou pacientů. Prokázali jsme, že inhibitor GANT61, který blokuje koncové proteiny HH dráhy GLI1 a GLI2, snižuje hladinu survivinu v nádorových buňkách. Následně jsme GANT61 spolu s inhibitorem BCL2 proteinové rodiny obatoclaxem použili k inhibici růstu melanomových buněk. Tato kombinace se ukázala velmi efektivní v eradikaci melanomových buněk. Prokázali jsme také, že GANT61 spouští v melanomových buňkách proces apoptózy. Zjistili jsme také, že signální dráha Hedgehog je aktivovaná u velkého množství buněčných kultur odvozených od různých typů nádorů. Dále...
|
|
|
Studium epitelově mezenchymových interakcí v nádorech vycházejících z dlaždicových epitelů
Kodet, Ondřej ; Lacina, Lukáš (vedoucí práce) ; Borovanský, Jan (oponent) ; Ehrmann, Jiří (oponent)
Tato dizertační práce je tematicky věnována epitelově mezenchymovým interakcím v nádorech vycházejících z dlaždicových epitelů a to včetně minoritní buněčné populace (melanocytů) zastoupené v tomto epitelu. Navazuje také na předchozí studie na téma glykobiologie, resp. studium endogenních lektinů, galektinů, v dlaždicobuněčných karcinomech hlavy a krku. Galektiny reprezentují v současném pojetí buněčné a zejména pak nádorové biologie molekuly s nezanedbatelným potenciálem. Účastní se kromě regulace pre- i postnatální homeostázy v normálních tkáních také mnoha dějů patologických, jako jsou autoimunitní reakce či maligní bujení. V této práci jsme prokázali přítomnost galektinu-1 a -2 a jejich glykoligandů v interfazických a mitotických jádrech, kde se mohou podílet na regulaci buněčného cyklu. Dále jsme prokázali galektin-9 jako poměrně citlivý znak přechodu normálního epitelu v dysplastický dlaždicový epitel v oblasti hlavy a krku. Epitelově mezenchymové interakce reprezentují mechanizmy odpovídající za dynamické udržování homeostázy organizmu jak během prenatálního vývoje, postnatálního růstu, tak i během cyklické obměny některých tkání. Účastní se i fáze hojení, ale také hrají významnou úlohu v procesu nádorové transformace, progrese a metastazování. Tyto interakce napomáhají utvářet specifické...
|
|
|
Analýza exprese cytokinů u MeLiM prasečího modelu regredujícího melanomu
Miltrová, Veronika ; Skalníková, Helena (vedoucí práce) ; Krulová, Magdaléna (oponent)
Kožní melanom je velmi agresivní nádorové onemocnění se stále se zvyšující incidencí. Vzniká maligní transformací kožních pigmentových buněk (melanocytů). Největší podíl na vzniku melanomu má sluneční UV záření a opakované spálení. Přibližně v 10 % případů melanom vzniká na dědičném podkladě. Pacienti s kožním melanomem diagnostikovaným v časném stádiu bez založených metastáz mají velmi dobrou prognózu a k léčbě mnohdy stačí pouze chirurgické odstranění primárního nádoru. Oproti tomu pokročilá stádia kožního melanomu jsou jen těžko léčitelná a často dochází k progresi onemocnění. Kožní melanom je označován jako imunogenní nádor, který je často infiltrován buňkami imunitního systému. Nádory s infiltrací imunitními buňkami mají lepší prognózu. Může docházet i ke spontánní regresi. Během několika posledních let byl v léčbě melanomu zaznamenán pokrok v terapii s využitím tzv. checkpoints molekul (anti-CTLA-4 a anti-PD-1) k aktivaci pacientova imunitního systému k rozeznání nádorových ložisek. V nádorovém mikroprostředí hrají důležitou roli cytokiny, umožňující komunikaci mezi buňkami a regulující jejich proliferaci a migraci a tím vývoj nádoru. Cytokiny mohou být využity v podpůrné terapii (IL-2, IFNα). Tato práce sledovala hladiny exprimovaných cytokinů za využití prasečího modelu dědičného kožního...
|
|
|
Mezibuněčné interakce v kožních nádorech.
Kučera, Jan ; Smetana, Karel (vedoucí práce) ; Masařík, Michal (oponent) ; Kovář, Marek (oponent)
Tato disertační práce je zaměřená na studium mezibuněčných interakcí u kožních nádorů. Je založena na 5 původních publikacích, které se věnují několika tematickým okruhům. Věnovali jsme se studiu původu nádorově asociovaných fibroblastů ve vztahu k primární nádorové populaci. Prokázali jsme pomocí myšího modelu, že nádorově asociované fibroblasty vzniklé v okolí implantovaného tumoru byly původem hostitelského organismu, a tedy že nevznikly transformací přímo z nádorových buněk. Dále jsme experimentálně sledovali vztah mezi nádorově asociovanými fibroblasty a keratinocyty. Prokázali jsme, že nádorově asociované fibroblasty z melanomu ovlivňují keratinocyty, které pod jejich vlivem získávají znaky typicky pozorované u migrujících buněk a u buněk podléhajících epitelově mezenchymálního přechodu. Studovali jsme interakce mezi zdravými fibroblasty a nádorovými buňkami. Prokázali jsme, že fibroblasty odebrané ze zdravé kůže u pacienta postiženého melanomem se signifikantně odlišují od kontrolních fibroblastů zdravých dárců v expresním profilu. Změny v distálních fibroblastech podporují pohled na melanom jako na systémové onemocnění. Dále jsme prokázali, že na rozdíl od BRAF pozitivních melanomových buněk, melanom asociované fibroblasty nenesou BRAF mutaci, a tedy nevznikly přechodem z melanomu....
|
|
|
Examination of the Spatial Structure of Pigs' Melanoma in Tissue Sections Based on Histology and Mass Spectrometry
Anýz, J. ; Vysloužilová, L. ; Horák, Vratislav ; Štěpánková, O. ; Vaculovič, T. ; Adam, V.
We examine the spatial structure of the melanoma in tissue sections. The pigs melanoma was examined in 10 tissue samples obtained from animals of age between 4 and 22 weeks. The tissue sections were measured by light microscopy and Laser Ablation Ion Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry to obtain spatial metal (Cu, Zn) distribution. The exploratory analysis of the tissue sections indicates there is clearly a pattern in the spatial structure. Different projections of the spatial structure of the melanoma are obtained by the different measurement methods. The spectral clustering on the data was utilized to describe the structure in the data. According to the clustering results, there are distinct clusters of observations in the histological data. The spatial elemental distribution of the metals Cu and Zn cannot be clustered -the data form one compact cluster. The clustering of the histological images produces clusters which are related to the annotation of the biological samples in broader terms -the differences between fibrous and cancerous tissue.
|
|
|
Diagnostika nádorových a pigmentových afekcí kůže
TICHÁ, Lea
Kůže je největším orgánem lidského těla. Je ochranným štítem proti nadměrnému teplu, světlu, poranění a infekci, reguluje tělesnou teplotu, slouží jako zásobárna vody a tuku a je i smyslovým orgánem. Velmi často se na kůži odráží celkový zdravotní stav člověka. Existuje celá řada pigmentových kožních lézí a kožních nádorů, pro jejichž určení je zásadní správné provedení diagnostiky. Včasná detekce rakoviny kůže umožňuje včasnou léčbu a zlepšuje klinický výsledek. Množství metod používaných k diagnostice rakoviny kůže v posledních desetiletích roste, histologické vyšetření však stále zůstává zlatým standardem. Histopatologie zahrnuje mikroskopické vyšetření biologických tkání za účelem pozorování výskytu poškozených buněk ve velmi jemných mikroskopických detailech, díky čemuž lze rozlišit hlavní typy a modifikace pigmentových kožních lézí a kožních nádorů. Teoretická část práce popisuje hlavní typy pigmentových kožních lézí a kožních nádorů z hlediska morfologie, výskytu a dalších důležitých aspektů. Popisuje také faktory, které ovlivňují tvorbu a vývoj nádorových onemocnění kůže a dále způsoby prevence proti rakovině kůže. Empirická část je zaměřena na histopatologické postupy, od příjmu vzorku tkáně až po stanovení diagnózy. V práci jsou též zahrnuta statistická data, která shrnují výskyt kožních lézí a kožních nádorů za pět let (2013-2017) a data z Evropského dne melanomu 2018 na základě shromážděných excizí kůže.
|
|
|
Zavedení vyšetření mutace V600E v genu BRAF v klinické laboratoři
VÍTKOVÁ, Markéta
Rakovina kůže patří v dnešní době k velmi častým nádorovým onemocněním. Dokázáno je, že slunce a rakovina kůže spolu maximálně souvisí, a tak může postihnout kohokoliv, ale vyšší náklonnost vykazují lidé "světlých typů" s blonďatými nebo zrzavými vlasy, světlou kůží a velkým množstvím pih. Nejčastější lokalizace kožních nádorů je na místech, která jsou dlouhodobě vystavená slunečnímu záření oční víčka, nos, tváře, šíje, ramena a ruce. Nejčastějšími druhy rakoviny kůže jsou bazaliom, melanom a spinaliom. Cílem mé bakalářské práce bylo osvojení si teoretických poznatků ohledně rakoviny kůže, především o maligním melanomu. Maligní melanom se na rozdíl od ostatních epiteliálních nádorů jako je bazaliom nebo spinaliom nevyznačuje lokálním destruktivním růstem, ale nebezpečím časného hematogenního nebo lymfogenního metastazování. Maligní melanom metastázuje nejčastěji do lymfatických uzlin, ale vzdálené metastázy se mohou objevit i v kůži, plicích, mozku a gastrointestinálním traktu, převážně v tenkém střevě. Za biologickou příčinu maligního melanomu můžeme považovat přítomnost mutací. Jednou z nejvýznamnějších a nejvíce popisovaných mutací v souvislosti s maligním melanomem je mutace genu BRAF V600E, která se vyskytuje v pozici 1799 v oblasti kodonu 600. Mutace kodonu GTG>GAG vede k záměně valinu za kyselinu glutamovou. Aktivace mutovaného BRAF proteinu je výsledkem konformačních změn v jeho struktuře. Mutované V600E BRAF buňky nepodléhají apoptóze a stárnutí, což má za následek nekontrolovatelný replikační potenciál buněk. V600E BRAF mutovaný melanom pak uniká imunitní odpovědi organismu. V praktické části mé bakalářské práce bylo cílem osvojit si základní molekulárně biologické metody v genetické laboratoři. Především izolaci genomové DNA z bukálního stěru i periferní krve, přípravu a provedení PCR reakce, přípravu agarózového gelu a detekci PCR produktů pomocí gelové elektroforézy. Vyšetření mutace V600E v genu BRAF jsem prováděla pomocí metody PCR-ARMS. Principem této metody je použití čtyř různých primerů schopných detekovat mutovanou i nemutovanou sekvenci DNA během jednoho experimentu. Metodika byla převzata z práce Huang et al. (2013) a následně upravena pro potřeby laboratoře.
|
|
| |
|
|
The Role of the Tumour Microenvironment on Melanoma Cell Invasiveness
Jobe, Njainday ; Rösel, Daniel (vedoucí práce) ; Kořínek, Vladimír (oponent) ; Bušek, Petr (oponent)
Invazivita a metastázování patří mezi určující vlastnosti buněk zhoubných nádorů. Je nyní již zjevné, že v invazivitě a metastázování nádorových buněk má důležitou roli nádorové mikroprostředí. Nádorové buňky mohou invadovat buď individuálně, s využitím améboidního nebo mezenchymálního způsobu invazivity, nebo kolektivně. Prvním cílem této disertační práce bylo analyzovat roli NG2 v améboidně- mezenchymálním přechodu (AMT) a signalizaci přes dráhu Rho/ROCK. Zjistili jsme, že NG2 podporuje améboidní morfologii nádorových buněk a zvyšuje invazivitu prostřednictvím Rho/ROCK dráhy. V druhé části disertační práce jsme analyzovali úlohu jedné z hlavních složek nádorového mikroprostředí - s nádory asociovaných fibroblastů (CAFs) na invazivitu melanomových buněk. Zjistili jsme, že interakce CAFs a melanomovými buňkami vede ke zvýšení hladin interleukinů IL-6 a IL-8 a následně ke zvýšené invazivitě melanomových buněk. Současné blokování signalizace přes IL-6 a IL-8 s pomocí specifických neutralizačních protilátek inhibuje zvýšení invazivity melanomových buněk indukované pomocí CAFs. Následná analýza další důležité složky nádorového mikroprostředí u melanomů - keratinocytů - ukázala důležitost nádorového niche pro invazivitu. Naše výsledky ukazují, že nádorové buňky jsou vysoce plastické a nádorové...
|
host ::
RSS.