|
|
Separace cytostaticky aktivních sloučenin metodou hydrofilní interakční kapalinové chromatografie
Voborná, Markéta ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Kozlík, Petr (oponent)
Tato diplomová práce se zabývá nalezením optimálních podmínek pro separaci čtyř skupin analytů odvozených od 7-deazaadenosinu (každá skupina obsahovala 4 derivatizované nukleosidy) pomocí hydrofilní interakční kapalinové chromatografie. Všech 16 studovaných analytů bylo syntetizováno jako potenciální cytostatika. Byl testován vliv typu stacionární fáze chromatografické kolony, poměru organické a vodné složky mobilní fáze, pH použitého pufru v mobilní fázi a koncentrace octanu amonného v tomto pufru v rozsahu 5 - 50 mM. Pro separace těchto analytů byly testovány tři různé stacionární fáze, a to čistě silikagelová (kolona Spherisorb® Silica), amidová (kolona TSKgel Amide-80) a nativní cyklofruktanová (kolona Frulic-N). Rozměry všech kolon byly stejné, tj. 2504,6 mm s velikostí částic 5 µm. Během optimalizace separace byl studován i retenční a separační mechanismus v HILIC. Bylo zjištěno, že ve všech testovaných chromatografických systémech se na mechanismu separace podílí jak rozdělování analytů mezi vodnou vrstvu částečně ukotvenou na povrchu stacionární fáze a mobilní fázi, tak i adsorpce analytů na stacionární fázi. Tři skupiny analytů (SK1, SK3, SK4) se podařilo separovat do 3 píků pouze částečně. Náznak separace do 4 píků byl zaznamenán pouze u směsí analytů SK1 a SK2 na koloně Frulic-N při...
|
|
|
Separace fosfolipidů metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Erdeová, Karolína ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Sobotníková, Jana (oponent)
Fosfolipidy jsou součástí buněčných membrán všech živých organismů. Jedná se o nejvýznamnější skupinu polárních lipidů, vyznačující se amfifilními vlastnostmi. Tyto vlastnosti vyplývají z jejich molekulární struktury, která se skládá z hydrofobních mastných řetězců a polární hlavice. Podle polární hlavice se dělí fosfolipidy do příslušných tříd. Poměr fosfolipidových tříd, zastoupených v bakteriální membráně, značně odráží životní pochody mikroorganismu. Pomocí změn v zastoupení těchto tříd lze sledovat vliv vnějšího prostředí, čehož se využívá v mikrobiologickém výzkumu. Pro sledování fosfolipidového složení vyšlechtěného kmene Bacillus subtilis, který je intenzivně zkoumán pro produkci antibiotik, se stále využívá tenkovrstvá chromatografie. Její časová náročnost výzkum značně zpomaluje, a proto byly podmínky tohoto uspořádání přeneseny na HPLC. Pro tyto účely byla metoda optimalizována formou nelineárního gradientu. Vhodnost metody byla testována na vzorku bakteriálních membránových lipidů, který obsahoval pět fosfolipidových tříd, z čehož dvě majoritní. Jejich poměrné zastoupení lze stanovit, nicméně je nutno pečlivě volit objem nastřikovaného vzorku, aby se zabránilo překročení úzkého koncentračního rozsahu metody. Klíčová slova: fosfolipidy, HPLC, optimalizace, validace, HILIC, NP-HPLC
|
|
|
Separace peptidů na nové stacionární fázi na bázi cyklofruktanu, charakterizace separačního systému
Šímová, Veronika ; Kalíková, Květa (vedoucí práce) ; Janečková, Lucie (oponent)
Hydrofilní interakční kapalinová chromatografie se používá k separaci polárních látek jako alternativa k reverznímu módu HPLC, ve kterém jsou tyto látky obtížně separovatelné nebo mají velmi nízké retence. V současné době existuje mnoho komerčně dostupných stacionárních fází a další se stále vyvíjí. V této práci byly porovnávány separační a interakční vlastnosti chromatografických systémů se silikagelovou stacionární fází a se stacionární fází na bázi isopropylovaného cyklofruktanu za podmínek hydrofilní interakční kapalinové chromatografie. Byly optimalizovány metody pro separace směsí čtyř pentapeptidů a pěti nonapeptidů na těchto dvou stacionárních fázích. Následně byly studovány interakce, které se významně uplatňují v optimalizovaných separačních systémech modelem lineárních vztahů volných energií. Interakce významně ovlivňující retenci analytů na obou stacionárních fázích jsou interakce prostřednictvím vodíkové vazby a na stacionární fázi na bázi isopropylovaného cyklofruktanu také disperzní a elektrostatické interakce. Klíčová slova: peptidy, cyklofruktan, LFER, HILIC
|
|
|
Metody sledování profilu karnitinových metabolitů v moči a jejich využití v klinické diagnostice
NOVÁKOVÁ, Martina
Tato práce se zabývá sledováním profilu karnitinových metabolitů v moči pacientek s diagnostikovanou rakovinou prsu. L-karnitin je látka velice významná pro metabolismus tuků, a proto některé současné výzkumy ukazují, že by mohl sloužit jako podpůrný prostředek pro léčbu rakoviny postihující různé orgány či tkáně. V teoretické části se práce zabývá obecnou charakteristikou a obecným popisem L-karnitinu a jeho účinkem na organismus. Tato část je rozdělena do kapitol, které shrnují různé informace o L-karnitinu a acylkarnitinech, například se zabývá metabolismem, dále různými účinky v organismu včetně popisu reakcí organismu na nedostatek těchto látek, či jakými metodami a z jakých biologických materiálů můžeme sledovat jejich hladinu. Metody sledování L-karnitinu jsou v práci popsány podrobněji a byly mezi sebou porovnávány na základě dříve publikovaných vědeckých výsledků. Autoři různých vědeckých prací uvádějí postupy a výhody či nevýhody jimi navržených metod pro stanovení L-karnitinu a acylkarnitinů, které byly v této práci podrobně zkoumány a analyzovány a na jejich základě byla navržena mnou prezentovaná metoda pro stanovení karnitinových metabolitů v moči. Závěrem této části je stručný popis nejčastěji používané metody pro stanovení karnitinových metabolitů, kterou je kapalinová chromatografie s hmotnostní detekcí (LC/MS). Pozitivní výsledky studií této metody mě motivovaly k použití této analytické metody i pro mou práci. Výzkumná část zahrnuje vlastní popis práce při přípravě vzorků a celkové nastavení parametrů důležitých pro provedení metody. Vzorky pro výzkum byly získány od pacientek s diagnostikovanou rakovinou prsu z českobudějovické nemocnice. V této části je také popsána úprava vzorků před detekcí, použité materiály, přístroje a chemikálie, a to včetně samotného postupu a nastavení přístroje pro analýzu. Metodou byly získány chromatografické záznamy jednotlivých látek a hmotnostní spektra, která byla jednotlivě zpracovávána pro každou látku zvlášť. Při detekci L-karnitinu a acylkarnitinů v moči pacientek s diagnostikovanou rakoviny prsu byly pro porovnání analyzovány i vybrané vzorky poskytnuté kontrolní skupinou zdravých žen, které nám umožnily sledovat možné rozdíly. Pro přehlednost a základní vhled byl sestaven graf, ve kterém je možné sledovat jen nepatrné rozdíly mezi hladinami karnitinových metabolitů u žen s rakovinou prsu versus kontrolní vzorky. Tento rozdíl není statisticky významný, a to zejména proto, že variabilita mezi jednotlivými jedinci je o řád vyšší než samotné rozdíly mezi sledovanými skupinami. Tento výsledek byl způsoben tím, že do studie nebyly zahrnuty další informace o pacientkách, jako například informace o jejich medikaci či zdravotním stylu, celkové kondici organismu atd. Podrobná studie těchto změn vyžaduje systematickou a časově velmi náročnou práci, která nebyla a ani nemohla být cílem mé bakalářské práce.
|
|
|
Stanovení inositolu v léčivých přípravcích pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC)
Rážová, Michaela ; Odehnalová,, Klára (oponent) ; Pazourek,, Jiří (vedoucí práce)
Tato práce se zaměřuje na stanovení inositolu v léčivých přípravcích za využití vysokoúčinné kapalinové chromatografie v HILIC módu. Práce je rozdělena do několika oddílů, probírá základní vlastnosti analyzovaného myo-inositolu i metody stanovení sacharidů. Pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii je v práci vyčleněna samostatná kapitola. Jedním z dalších cílů práce bylo srovnání vlastností chromatografických kolon. V experimentální části jsou dále zahrnuty podmínky měření, metody příprav vzorků, vyhodnocená data a výsledky včetně diskuze. Pro tuto práci byly použity dva reálné vzorky, u nichž byl obsah myo-inositolu deklarovaný výrobcem.
|
|
|
Stanovení palatinosy v potravinových doplňcích
Rážová, Michaela ; Ing.Robert Ulrich (oponent) ; PharmDr.Věra Špačková (vedoucí práce)
Tato práce se zaměřuje na stanovení obsahu palatinosy v potravinových doplňcích za využití HILIC metody. Práce je systematicky rozdělena do několika oddílů. Obsahuje základní informace o sacharidech a metodách jejich stanovení, probírá vlastnosti analyzované palatinosy. Pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii je v práci vyčleněna samostatná kapitola. Experimentální část zahrnuje podmínky měření, metody příprav vzorků, vyhodnocená data a výsledky včetně diskuze. Pro tuto práci byly použity celkem čtyři reálné vzorky, z nichž dva měly deklarovaný obsah palatinosy výrobcem. Z dalších cukrů se nám podařilo identifikovat fruktosu, glukosu a sacharosu.
|
|
|
Moč, její složení a vliv věku na její metabolický obraz
MENHART, Roman
Tato práce je zaměřená na sledování vlivu věku na složení moči. Korelace věku se složením moči byla zkoumána cíleným výzkumem čtyř vybraných analytů - kreatininu, acetylkarnitinu, karnitinu a alaninu u anonymizované skupiny lidí ve věku 15, 25, 35, 45 a 55 let. V teoretické části je obecně popsána anatomie a funkce ledvin, je zde definováno co je to moč, jaké organické a anorganické látky obsahuje. Popsány jsou faktory, které se podílejí na změnách složení moči, jako je index tělesné hmotnosti, barva pleti a především věk, který je hlavním předmětem zkoumání této práce. Dále jsou uvedeny metody používané v klinické praxi, ale i ve výzkumu, sloužící k analýze moči. Metodická část zahrnuje postupy odběru, uchování a předanalytické přípravy moči. Je zde uveden seznam všech chemikálií, pomůcek, vnitřních standardů, standardů a přístrojového vybavení, použitých pro přípravu a analýzu vzorků, a také popis HPLC/MS metody. Výstupní data z použité LC/MS metody byla zpracována v počítačovém programu XcaliburTM. Jedná se o chromatogramy a hmotnostní spektra kreatininu, acetylkarnitinu, karnitinu a alaninu získaných analýzou padesáti vzorků močí lidí různých věkových skupin, které proběhly ve třech opakováních. Pomocí tabulek a přehledných grafů byly zpracovány hodnoty ploch píků pro jednotlivé látky, které následně byly přepočítané na plochu píku kreatininu z důvodu jejich normalizace. Řešené téma je velice komplexní a nelze ho celé obsáhnout v rámci mé bakalářské práce.
|
|
|
Silica-based monolithic capillary columns modified to zwitterionic stationary phase for hydrophilic interaction liquid chromatography
Moravcová, Dana ; Planeta, Josef ; Kahle, Vladislav ; Horká, Marie ; Roth, Michal
Zwitterionic monolithic capillary columns intended for isocratic gradient hydrophilic interaction chromatography (HILIC) separations are introduced. Silica-based capillary columns (150 mm x 0.1 mm) were prepared by acidic hydrolysis of tetramethoxysilane in the presence of polyethylene glycol and urea. The modification by a 3-(trimethoxysilyl)propyl methacrylate and then by a zwitterionic [2-(methacryloyloxy)ethyl]-dimethyl-(3-sulfopropyl)-ammonium hydroxide to HILIC stationary phase bearing sulfoalkylbetaine groups on its surface followed. Prepared columns were characterized in HILIC separation mode employing mobile phase containing 10% (v/v) of 5 mM ammonium acetate pH = 4.5 in acetonitrile. Comparison with the commercially available ZIC-HILIC® column (Merck SeQuant®) under the same separation conditions using a mixture of aromatic carboxylic acids as a sample was done on the basis of separation efficiency of tested columns as well as retention factors and peak asymmetry of individual solutes.
|
host ::
RSS.