|
|
Development of pulse labelling technology for studying the dynamics of protein complexes.
Fiala, Jan ; Novák, Petr (vedoucí práce) ; Preisler, Jan (oponent) ; Sosic, Alice (oponent)
(IN CZECH) Strukturní hmotnostní spektrometrie (MS) je progresivní metoda současné strukturní biologie pro charakterizaci biomolekul. Ačkoli techniky založené na MS poskytují pouze informace "s nízkým rozlišením" ve srovnání s klasickými strukturálními metodami, jako je rentgenová krystalografie, elektronová mikroskopie nebo nukleární magnetická rezonance, její jedinečnost spočívá ve schopnosti snadno získat strukturní informace o různých biomolekulách v jejich nativním prostředí. Využitím různých přístupů, od kovalentního značení proteinů, přes chemické síťování až po iontovou mobilitu, umožňuje strukturní MS pohled na strukturu a dynamiku proteinů a jejich komplexů v čase. Tato práce je věnována vývoji nových přístupů strukturní MS, které jsou založeny na pulzním kovalentním značením a chemickém síťování. S využitím vyvinutého mikrofluidního reaktoru byl proveden "footprinting" povrchu proteinů a proteinových komplexů v časovém rozsahu od několika mikrosekund až po jednotky sekund. V této práci byly konkrétně použity rychlá fotochemická oxidace proteinů (FPOP) a nově vyvinutá technika rychlé fluoroalkylace proteinů (FFAP) pro sledování strukturních změn myoglobinu způsobených uvolněním prostetické skupiny hemu. Dále byly tyto metody úspěšně aplikovány k lokalizaci interakčního rozhraní biologicky...
|
host ::
RSS.