|
|
Izolace DNA s použitím nově syntetizovaných magnetických nosičů
Machan, Radoslav ; Španová, Alena (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
Teoretická časť práce bola zameraná na poskytnutie prehľadu základných vlastností magnetických častíc, ich morfológie, základných spôsobov ich syntézy, interakcie s DNA a aplikácie v oblasti biotechnológií a biomedicíny. Cieľom praktickej časti práce bolo overiť použitie novo navrhnutých magnetických častíc pri izolácii laktobacilovej DNA a DNA z teľacieho týmu. Na izoláciu DNA boli použité dva druhy magnetických nosičov: hypersieťované poly(glycidyl methakrylát-co-[2-(methakryloyloxy) ethoxy]octová kyselina-co-ethylen dimethakrylát) mikročastice pokryté amínovými skupinami - P(GMA-MOEAA-EDMA)-NH2 a magnetické neporézne magnetické poly(2-hydroxyethyl methakrylátové) mikročastice pokryté karboxylovými skupinami – P(HEMA-co-GMA)-COOH. Pre každý typ častíc boli testované dva odlišné postupy prípravy separačnej zmesi a dve rôzne koncentrácie poly(etylénglykolu) 6000 (PEG 6000) ako kondenzačného činidla. Medzi oboma typmi magnetických častíc boli zistené rozdiely pri izolácii DNA. Pri oboch typoch častíc bolo dokázané, že za podmienok izolácie pri koncentrácii PEG 6000 8 % sú vhodné na izoláciu DNA v kvalite vhodnej pre PCR.
|
|
|
Izolace DNA s použitím nově syntetizovaných magnetických nosičů
Machan, Radoslav ; Španová, Alena (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
Teoretická časť práce bola zameraná na poskytnutie prehľadu základných vlastností magnetických častíc, ich morfológie, základných spôsobov ich syntézy, interakcie s DNA a aplikácie v oblasti biotechnológií a biomedicíny. Cieľom praktickej časti práce bolo overiť použitie novo navrhnutých magnetických častíc pri izolácii laktobacilovej DNA a DNA z teľacieho týmu. Na izoláciu DNA boli použité dva druhy magnetických nosičov: hypersieťované poly(glycidyl methakrylát-co-[2-(methakryloyloxy) ethoxy]octová kyselina-co-ethylen dimethakrylát) mikročastice pokryté amínovými skupinami - P(GMA-MOEAA-EDMA)-NH2 a magnetické neporézne magnetické poly(2-hydroxyethyl methakrylátové) mikročastice pokryté karboxylovými skupinami – P(HEMA-co-GMA)-COOH. Pre každý typ častíc boli testované dva odlišné postupy prípravy separačnej zmesi a dve rôzne koncentrácie poly(etylénglykolu) 6000 (PEG 6000) ako kondenzačného činidla. Medzi oboma typmi magnetických častíc boli zistené rozdiely pri izolácii DNA. Pri oboch typoch častíc bolo dokázané, že za podmienok izolácie pri koncentrácii PEG 6000 8 % sú vhodné na izoláciu DNA v kvalite vhodnej pre PCR.
|
|
|
Plasmidové DNA vakcíny
Machan, Radoslav ; Chroboková, Maria (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
Plazmidové DNA vakcíny predstavujú novú generáciu vakcín s veľkým potenciálom pri prevencii mnohých ochorení. Súčasné štúdie a klinické testy sa zameriavajú na prevenciu pred rakovinou, hepatitídou, maláriou, HIV, chrípky a inými chorobami. Hlavné výzvy týkajúce sa plazmidových DNA vakcín sú v súčasnosti spojené s optimalizáciou jednotlivých krokov výroby a najmä v purifikačných krokoch umožňujúcich výrobu pDNA v množstvách až niekoľkých kilogramov. Hlavnými purifikačnými technikami sú v súčastnosti chromatografické metódy, ale výzkum a vývoj poukazuje aj na potenciálne využitie iných metód, napríklad dvojfázových vodných systémov a magnetických nosičov. V experimentálnej časti bola prevedená izolácia plazmidu pUC 19 z kultúry buniek Escherichia coli JM 109 (pUC 19) metódou alkalickej lýzy. Izolácia bola overená agarózovou gélovou elektroforézou. Izolované vzorky boli purifikované chloridom lítnym a magnetickými nosičmi a miera purifikácie overená spektrofotometricky. Jednotlivé vzorky boli znovu vizualizované agarózovou gélovou elektroforézou a výsledky porovnané.
|
host ::
RSS.