|
|
Structural and functional studies of signaling molecules in axon guidance
Knapp, Kryštof ; Rozbeský, Daniel (vedoucí práce) ; Novák, Petr (oponent)
V této práci jsme se zaměřili na studium autoinhibičního mechanismu proteinů z rodiny MI- CAL pomocí biochemických, biofyzikálních a bioinformatických metod. MICAL proteiny patří do skupiny flavinových monooxygenas a sehrávají nezbytnou roli v řadě buněčných pro- cesů zejména skrze regulaci dynamiky cytoskeletonu. MICAL-1 je dlouhodobě studován pro svou roli v mechanismu navádění axonu jako efektor repulzivně signalizačních drah, kde pů- sobí destabilizaci aktinových vláken pomocí své oxidační aktivity. Nedávno zveřejněné studie poukazují na to, že MICAL-1 může působit také jako signalizační molekula skrze lokalizo- vanou produkci peroxidu vodíku, která reguluje funkci dalších proteinů. Navzdory tomu, že je dlouhodobě zřejmé, že aktivita MICAL-1 proteinu musí být přísně regulována, přesný mechanismus této regulace dosud není znám. Na základě studia reakční kinetiky a simu- lací molekulové dynamiky MICAL-1 proteinu z křepelky japonské a jeho zkrácené verze bez C-terminální domény, předkládáme nový model pro autoinhibiční mechanismus MICAL-1 proteinů. Domníváme se, že regulace aktivity MICAL-1 proteinů je zprostředkována skrze interakci mezi C-terminální a monooxygenasovou doménou, která brání plné katalytické ak- tivitě. Dále předkládáme důkazy o tom, že regulace aktivity proteinu není ovlivněna...
|
|
|
Vliv 17α-ethinylestradiolu na aktivitu cytochromů P450 podrodiny 2B a 2C
Knapp, Kryštof ; Dračínská, Helena (vedoucí práce) ; Kukačka, Zdeněk (oponent)
17α-ethinylestradiol (EE2) je syntetickým derivátem endogenního estrogenu 17β-estradi-olu široce rozšířeným ve zdravotnictví jednak jako složka ženské hormonální antikoncepce a jed- nak jako léčivo v postmenopauzální hormonální terapii. Díky své značné chemické odolnosti, schopnosti bioakumulace a silné estrogenicitě se jedná o významnou perzistentní organickou látku. V organismech podléhá oxidačnímu metabolismu katalyzovanému enzymy z ro- diny cytochromů P450. Je známo, že se EE2 chová jako účinný inhibitor některých isoforem cytochromů P450. Cílem této práce bylo studium vlivu EE2 na aktivitu lidských isofororem CYP2B6, CYP2C9 a jejich potkaních orthologů CYP2B1 respektive CYP2C6. U všech zkoumaných reakcí byla pozorována snížená aktivita enzymu při expozici EE2 in vitro. Největší pokles aktivity byl pozorován u reakce O-depentylace resoru nu kata- lyzované CYP2B1 s hodnotou IC50 = 9,6 µM. Pro hydroxylaci bupropionu, selektivní reakci isoforem CYP2B1 a CYP2B6, se EE2 jevil jako účinnější inhibitor CYP2B6 s hodnotou IC50 = 60 µM. Inhibice stejné reakce katalyzované CYP2B1 způsobená EE2 byla výrazně slabší. Při 200µM koncentraci EE2 tvořila aktivita CYP2B1 oproti kontrolní aktivitě enzymu stále více než 50 %. Pro určení inhibičního vlivu EE2 na CYP z podrodiny 2C byla použita markerová reakce...
|
host ::
RSS.