|
|
Biologické chování a vybrané molekulární charakteristiky epiteliálních buněk propagovaných in vitro z normální a nádorové tkáně mléčné žlázy žen
Krásná, Luboslava ; Veselý, Pavel (vedoucí práce) ; Křepela, Evžen (oponent) ; Červinka, Miroslav (oponent)
Byla vyvinuta kultivační metoda, která dovoluje pravidelně z normální i nádorové tkáně mléčné žlázy žen získávat a in vitro propagovat heterogenní populace epiteliálních buněk. Metoda využívá feeder-layer tvořený ozářenými 3T3 buňkami, který umožňuje klonální růst i jednotlivých izolovaných epiteliálních buněk. Dosahuje proto vysokého procenta úspěšnosti při zakládání kultur ze vzorků všech velikostí, včetně vzorku získaného perkutánní biopsií tenkou jehlou, jehož objem je 0.01 cm3. Kultivované buňky mají vysokou proliferační kapacitu. Profilem exprimovaných cytokeratinů i expresí EMA a ESA proteinů potvrzují příslušnost к luminální a myoepiteliální frakci epiteliálních buněk mléčné žlázy. V kulturách dochází к diferenciaci buněk, která se projevuje změnou jejich morfologie, změnou exprese proteinů a organizací buněk do třírozměrných struktur. Karcinomy mléčné žlázy jsou tvořeny téměř výhradně buňkami fenotypově shodnými s diferencovanými luminálními buňkami, vyznačujícími se především silnou expresí K19. Popsaný kultivační systém jako první umožnil proliferaci luminálních buněk z normální i nádorové mamární tkáně ve více pasážích in vitro, a to i v přítomnosti myoepiteliálních buněk. Bylo zjištěno, že kultivačními podmínkami lze ovlivnit rovnováhu mezi luminálními a myoepiteliálními buňkami, dočasně...
|
|
|
Příprava konstruktů pro transgenní expresi DPP-IV a FAP
Košek, Dalibor ; Bezouška, Karel (vedoucí práce) ; Křepela, Evžen (oponent)
Příprava konstruktů pro transgenní expresi DPP-IV a FAP Bc. Dalibor Košek Abstrakt: Skupina proteinů DASH (Dipeptidylpeptidase IV aktivitou a/nebo strukturou homologní) představuje soubor multifunkčních molekul, z nichž většina vykazuje peptidasovou aktivitu podobnou dipeptidylpeptidase IV (DPP-IV, EC 3.4.14.5, identická s diferenciačním antigenem lymfocytů CD26). Z proteinů i peptidů obecně odštěpují N-terminální X-Pro dipeptid. Tato práce byla zaměřena na dva proteiny, DPP-IV/CD26, kanonického představitele DASH, a fibroblastový aktivační protein alfa (FAP-α). Jedná se o transmembránové proteiny II. typu s rozdílnou tkáňovou distribucí, u nichž jsou však známé i extracelulární rozpustné varianty. Z dosavadních poznatků vyplývá, že oba mají význam v procesech vzniku a rozvoje mnoha nádorových onemocnění a to mechanismy závislými i nezávislými na enzymatické aktivitě. Pro objasnění jejich úlohy v gliomagenesi bylo navrhnuto připravit experimentální model v podobě glioblastomových buněčných linií s definovatelným fenotypem DPP-IV/CD26 a FAP-α. Bude zahrnovat enzymaticky neaktivní formy proteinů i analogy s různým subcelulárním směřováním. Takovýto model dovolí posoudit vliv DPP-IV/CD26 a FAP-α na rozvoj gliálního nádoru, význam jejich enzymové aktivity a subcelulární distribuce v tomto procesu. Experimenty...
|
|
|
Využití elektroforetických a chromatografických metod pro klinický výzkum
Fauknerová Matějčková, Jana ; Samcová, Eva (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Křepela, Evžen (oponent)
disertační práce Řešitel: RNDr. Jana Fauknerová Matějčková Téma: Využití elektroforetických a chromatografických metod pro klinický výzkum Malondialdehyd (MDA) je považován za hlavní biomarker oxidativního poškození biomembrán a jeho zvýšená hladina se projevuje u různých onemocnění. Pro stanovení MDA byla použita HPLC metoda s derivatizací vzorku krevní plazmy 2,4-dinitrofenylhydrazinem. Vzniklý derivát MDA lze snadno oddělit pomocí HPLC od ostatních komponent krevní plazmy a detekovat jej při 307 nm. Doba analýzy MDA nepřesahuje 4,5 min. Citlivost (limit detekce 0,27 mol l-1 ) a opakovatelnost stanovení je dostatečná pro monitorování hladiny MDA v reálných vzorcích krevní plazmy. Ve své práci jsem dále sledovala hladiny nízkomolekulárního sekundárního antioxidantu kyseliny močové, jejíž koncentrace v krvi dosahuje 140 až 340 µmol l-1 a sekundárního enzymatického antioxidantu superoxiddismutázy (SOD). Analýza hladin kyseliny močové byla prováděna metodou kapilární elektroforézy a spektrofotometrickou metodou, přičemž obě metody vykazovaly srovnatelné výsledky. Analýza SOD byla prováděna pomocí spektrofotometrického kitu. Hladiny MDA byly proměřovány u veganů (odmítání jakékoliv živočišné stravy, vegani nekonzumují žádné maso ani vejce a mléčné výrobky) s průměrnou hodnotou MDA 5 mol l-1 , což je...
|
|
|
Expression and function of serpin B9 in lung carcer cells
Roušalová, Ilona ; Křepela, Evžen (vedoucí práce) ; Šedo, Aleksi (oponent) ; Kotyza, Jaromír (oponent)
SOUHRN Úvod: Granzyme B (GrB) je klíčová sekreční proapoptotická proteaza cytotoxických lymfocytů a NK buněk. Specifický proapoptotický efekt GrB v nádorových buňkách může být neutralizován zvýšenou expresí serpinuB9. Gen serpinuB9 může být transkripčně pozitivně ovlivňován účinkem některých cytokinů a estrogenem aktivovaných estrogenových receptorů- α (ERα). Cílem této práce bylo zhodnotit expresi SB9 a vyšetřit jeho aktivitu proti exogennímu aktivnímu GrB v buněčných liniích a tkáních nemalobuněčného karcinomu plic (NSCLC), dále analyzovat expresi GrB mRNA v buněčných liniích a tkáních NSCLC a objasnit roli estradiolu-17β (E2), některých interleukinů a DNA metylace v regulaci exprese SB9 v NSCLC buňkách. Apoptosom je proapoptotická signalizační platforma, která aktivuje iniciátorovou prokaspásu-9. Aktivace apoptosomu je často porušená v různých typech nádorů, avšak molekulární podstata jeho inhibice je neznámá. APIP and UACA/nucling patří mezi endogenní regulátory apoptosomového aparátu. Cílem této práce bylo zjistit, zda DNA metylace může ovlivňovat transkripční regulaci exprese genů těchto dvou proteinů v buněčných liniích a tkáních NSCLC. Metody: Následující metody byly použity v této práci: izolace a kvantifikace celkové RNA, real- time RT-PCR, Western blot analýza, enzymové analýzy, techniky...
|
|
|
Expression of apoptosome pathway regulators and activation of apoptosome apparatus in non-small cell lung carcinoma
Moravčíková, Erika ; Křepela, Evžen (vedoucí práce) ; Kovář, Jan (oponent) ; Kotyza, Jaromír (oponent)
SOUHRN Úvod: Apoptosomový aparát má zásadní význam pro generování a amplifikaci apoptotických signálů a tím pro navození apoptosy v nádorových buňkách, přičemž účinnost protinádorové chemoterapie a radioterapie do značné míry závisí na spuštění apoptosy závislé na apoptosomu. Aktivace nebo funkce apoptosomového aparátu však často selhává. Příčinou mohou být změny v expresi a/nebo získané mutace a/nebo posttranslační úpravy komponentů apoptosomu či jeho regulátorů, které hrají významnou roli v proliferaci nádorových buněk a léčebné resistenci. Proto byla tato práce zaměřena zejména na analýzu exprese faktorů, které mohou regulovat spuštění a průběh apoptosomové kaspasové kaskády a na připravenost aktivace apoptosomového aparátu v buněčných liniích a tkáních nemalobuněčného karcinomu plic. Metody: V této práci byly použity následující metody: izolace a kvantifikace celkové RNA, real-time RT-PCR, izolace bezbuněčného cytosolu a extraktů z buněk a tkání, gelová filtrace, Western blot analýza, enzymové analýzy a techniky kultivace buněčných linií. Výsledky a závěry: Vyšší predispozice nemalobuněčného karcinomu plic k apoptosomem zprostředkované apoptose, v porovnání s normální plicní tkání, je způsobena několika faktory. Za prvé, zvýšenou expresí aktivovatelných apoptosomových komponentů v nádorů, včetně Apaf-1...
|
|
|
Využití elektroforetických a chromatografických metod pro klinický výzkum
Fauknerová Matějčková, Jana ; Samcová, Eva (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Křepela, Evžen (oponent)
disertační práce Řešitel: RNDr. Jana Fauknerová Matějčková Téma: Využití elektroforetických a chromatografických metod pro klinický výzkum Malondialdehyd (MDA) je považován za hlavní biomarker oxidativního poškození biomembrán a jeho zvýšená hladina se projevuje u různých onemocnění. Pro stanovení MDA byla použita HPLC metoda s derivatizací vzorku krevní plazmy 2,4-dinitrofenylhydrazinem. Vzniklý derivát MDA lze snadno oddělit pomocí HPLC od ostatních komponent krevní plazmy a detekovat jej při 307 nm. Doba analýzy MDA nepřesahuje 4,5 min. Citlivost (limit detekce 0,27 mol l-1 ) a opakovatelnost stanovení je dostatečná pro monitorování hladiny MDA v reálných vzorcích krevní plazmy. Ve své práci jsem dále sledovala hladiny nízkomolekulárního sekundárního antioxidantu kyseliny močové, jejíž koncentrace v krvi dosahuje 140 až 340 µmol l-1 a sekundárního enzymatického antioxidantu superoxiddismutázy (SOD). Analýza hladin kyseliny močové byla prováděna metodou kapilární elektroforézy a spektrofotometrickou metodou, přičemž obě metody vykazovaly srovnatelné výsledky. Analýza SOD byla prováděna pomocí spektrofotometrického kitu. Hladiny MDA byly proměřovány u veganů (odmítání jakékoliv živočišné stravy, vegani nekonzumují žádné maso ani vejce a mléčné výrobky) s průměrnou hodnotou MDA 5 mol l-1 , což je...
|
|
|
Expression of apoptosome pathway regulators and activation of apoptosome apparatus in non-small cell lung carcinoma
Moravčíková, Erika ; Křepela, Evžen (vedoucí práce) ; Kovář, Jan (oponent) ; Kotyza, Jaromír (oponent)
SOUHRN Úvod: Apoptosomový aparát má zásadní význam pro generování a amplifikaci apoptotických signálů a tím pro navození apoptosy v nádorových buňkách, přičemž účinnost protinádorové chemoterapie a radioterapie do značné míry závisí na spuštění apoptosy závislé na apoptosomu. Aktivace nebo funkce apoptosomového aparátu však často selhává. Příčinou mohou být změny v expresi a/nebo získané mutace a/nebo posttranslační úpravy komponentů apoptosomu či jeho regulátorů, které hrají významnou roli v proliferaci nádorových buněk a léčebné resistenci. Proto byla tato práce zaměřena zejména na analýzu exprese faktorů, které mohou regulovat spuštění a průběh apoptosomové kaspasové kaskády a na připravenost aktivace apoptosomového aparátu v buněčných liniích a tkáních nemalobuněčného karcinomu plic. Metody: V této práci byly použity následující metody: izolace a kvantifikace celkové RNA, real-time RT-PCR, izolace bezbuněčného cytosolu a extraktů z buněk a tkání, gelová filtrace, Western blot analýza, enzymové analýzy a techniky kultivace buněčných linií. Výsledky a závěry: Vyšší predispozice nemalobuněčného karcinomu plic k apoptosomem zprostředkované apoptose, v porovnání s normální plicní tkání, je způsobena několika faktory. Za prvé, zvýšenou expresí aktivovatelných apoptosomových komponentů v nádorů, včetně Apaf-1...
|
|
|
Expression and function of serpin B9 in lung carcer cells
Roušalová, Ilona ; Křepela, Evžen (vedoucí práce) ; Šedo, Aleksi (oponent) ; Kotyza, Jaromír (oponent)
SOUHRN Úvod: Granzyme B (GrB) je klíčová sekreční proapoptotická proteaza cytotoxických lymfocytů a NK buněk. Specifický proapoptotický efekt GrB v nádorových buňkách může být neutralizován zvýšenou expresí serpinuB9. Gen serpinuB9 může být transkripčně pozitivně ovlivňován účinkem některých cytokinů a estrogenem aktivovaných estrogenových receptorů- α (ERα). Cílem této práce bylo zhodnotit expresi SB9 a vyšetřit jeho aktivitu proti exogennímu aktivnímu GrB v buněčných liniích a tkáních nemalobuněčného karcinomu plic (NSCLC), dále analyzovat expresi GrB mRNA v buněčných liniích a tkáních NSCLC a objasnit roli estradiolu-17β (E2), některých interleukinů a DNA metylace v regulaci exprese SB9 v NSCLC buňkách. Apoptosom je proapoptotická signalizační platforma, která aktivuje iniciátorovou prokaspásu-9. Aktivace apoptosomu je často porušená v různých typech nádorů, avšak molekulární podstata jeho inhibice je neznámá. APIP and UACA/nucling patří mezi endogenní regulátory apoptosomového aparátu. Cílem této práce bylo zjistit, zda DNA metylace může ovlivňovat transkripční regulaci exprese genů těchto dvou proteinů v buněčných liniích a tkáních NSCLC. Metody: Následující metody byly použity v této práci: izolace a kvantifikace celkové RNA, real- time RT-PCR, Western blot analýza, enzymové analýzy, techniky...
|
|
|
Příprava konstruktů pro transgenní expresi DPP-IV a FAP
Košek, Dalibor ; Bezouška, Karel (vedoucí práce) ; Křepela, Evžen (oponent)
Příprava konstruktů pro transgenní expresi DPP-IV a FAP Bc. Dalibor Košek Abstrakt: Skupina proteinů DASH (Dipeptidylpeptidase IV aktivitou a/nebo strukturou homologní) představuje soubor multifunkčních molekul, z nichž většina vykazuje peptidasovou aktivitu podobnou dipeptidylpeptidase IV (DPP-IV, EC 3.4.14.5, identická s diferenciačním antigenem lymfocytů CD26). Z proteinů i peptidů obecně odštěpují N-terminální X-Pro dipeptid. Tato práce byla zaměřena na dva proteiny, DPP-IV/CD26, kanonického představitele DASH, a fibroblastový aktivační protein alfa (FAP-α). Jedná se o transmembránové proteiny II. typu s rozdílnou tkáňovou distribucí, u nichž jsou však známé i extracelulární rozpustné varianty. Z dosavadních poznatků vyplývá, že oba mají význam v procesech vzniku a rozvoje mnoha nádorových onemocnění a to mechanismy závislými i nezávislými na enzymatické aktivitě. Pro objasnění jejich úlohy v gliomagenesi bylo navrhnuto připravit experimentální model v podobě glioblastomových buněčných linií s definovatelným fenotypem DPP-IV/CD26 a FAP-α. Bude zahrnovat enzymaticky neaktivní formy proteinů i analogy s různým subcelulárním směřováním. Takovýto model dovolí posoudit vliv DPP-IV/CD26 a FAP-α na rozvoj gliálního nádoru, význam jejich enzymové aktivity a subcelulární distribuce v tomto procesu. Experimenty...
|
|
|
Biologické chování a vybrané molekulární charakteristiky epiteliálních buněk propagovaných in vitro z normální a nádorové tkáně mléčné žlázy žen
Krásná, Luboslava ; Veselý, Pavel (vedoucí práce) ; Křepela, Evžen (oponent) ; Červinka, Miroslav (oponent)
Byla vyvinuta kultivační metoda, která dovoluje pravidelně z normální i nádorové tkáně mléčné žlázy žen získávat a in vitro propagovat heterogenní populace epiteliálních buněk. Metoda využívá feeder-layer tvořený ozářenými 3T3 buňkami, který umožňuje klonální růst i jednotlivých izolovaných epiteliálních buněk. Dosahuje proto vysokého procenta úspěšnosti při zakládání kultur ze vzorků všech velikostí, včetně vzorku získaného perkutánní biopsií tenkou jehlou, jehož objem je 0.01 cm3. Kultivované buňky mají vysokou proliferační kapacitu. Profilem exprimovaných cytokeratinů i expresí EMA a ESA proteinů potvrzují příslušnost к luminální a myoepiteliální frakci epiteliálních buněk mléčné žlázy. V kulturách dochází к diferenciaci buněk, která se projevuje změnou jejich morfologie, změnou exprese proteinů a organizací buněk do třírozměrných struktur. Karcinomy mléčné žlázy jsou tvořeny téměř výhradně buňkami fenotypově shodnými s diferencovanými luminálními buňkami, vyznačujícími se především silnou expresí K19. Popsaný kultivační systém jako první umožnil proliferaci luminálních buněk z normální i nádorové mamární tkáně ve více pasážích in vitro, a to i v přítomnosti myoepiteliálních buněk. Bylo zjištěno, že kultivačními podmínkami lze ovlivnit rovnováhu mezi luminálními a myoepiteliálními buňkami, dočasně...
|
host ::
RSS.