|
|
Optimalizace koncentrace chloridu vápenatého pro odstranění polysacharidové kontaminace při izolaci rostlinné DNA
Frnčová, Ekaterina ; Šlosárová, Katarína (oponent) ; Fialová, Lenka (vedoucí práce)
Největší potíž při izolaci DNA je přítomnost kontaminujících látek, které způsobují nežádoucí účinky. V ovoci nejrozšířenějšími kontaminanty jsou polysacharidy. Spolu s dalšími látkami (například proteiny nebo fenolické látky) můžou zkreslovat výsledky při spektrofotometrickém stanovení čistoty nebo působit jako inhibitory při PCR analýze. Cílem této práce bylo zkoumaní vlivu různých koncentrací chloridu vápenatého na proces izolace DNA. V experimentální části byla izolovaná DNA z jablka pomocí různě koncentrovaných roztoků chloridu vápenatého. Izolace byla provedena čtyřikrát a pokaždé byl vzorek upraven různými způsoby. Bylo zjištěno, že použitá izolační metoda funguje jenom na vzorku, který byl předem lyofilizován. Izolace DNA z čerstvého plodu poskytovala velmi nízké výtěžky. Pravděpodobně to bylo způsobeno velkým obsahem vody ve vzorku a podíl pevné složky byl menší. Následně byly provedeny PCR analýza a elektroforéza pro zjištění amplifikovatelnosti izolované DNA. Pro tyto analýzy byly použity dvě sady primerů s různou specifitou. Při použití 100 mM roztoku CaCl2 byla potvrzena amplifikovatelnost pouze při použití primerů specifických pro DNA jabloně. U ostatních vzorků byly prokázány amplifikovatelnost při použití obou typů primerů. Pravděpodobně, vzorky izolovány pomocí 100 mM roztoku CaCl2 měly větší množství inhibitorů, které neovlivňují všechny PCR reakce stejně, což také může ukazovat na malou účinnost tohoto množství CaCl2.
|
|
|
Testování a optimalizace postupů pro odstraňování kontaminujících látek během izolace DNA z květů ibišku
Brabcová, Martina ; Kubalová, Michaela (oponent) ; Fialová, Lenka (vedoucí práce)
Ibišek súdánský (Hibiscus sabdariffa) je hojně využívaná rostlina v potravinářském průmyslu, zejména při výrobě čajů. Květ ibišku je bohatý na polyfenolické látky, které jsou velkým problémem při izolaci DNA. Práce se zabývá úpravou izolačního CTAB protokolu k zajištění dostatečné koncentrace a čistoty pro amplifikaci. DNA izolovaná dle CTAB protokolu neposkytla dostatečnou koncentraci a čistotu pro amplifikaci kvůli vysoké kontaminaci polyfenolickými látkami. K odstranění byl navrhnut postup s dvojitou inkubací rostlinné tkáně v CTAB pufru s 3% obsahem polyvinylpyrrolidonu (PVP). Tyto izoláty byly úspěšně amplifikovány. Dále byl sledován vliv koncentrace PVP (1-5 %) v CTAB pufru na koncentraci a čistotu izolované DNA. Výsledky PCR ukázaly, že dvojitá inkubace s CTAB pufrem měla větší vliv na odstranění polyfenolických látek, než změna koncentrace PVP. Modifikovaný izolační protokol byl následně úspěšně využit i k izolaci amplifikovatelné DNA z komerčních čajových směsí.
|
|
|
Testování primerů pro real-time PCR-HRM analýzu autenticity jednodruhových ovocných výrobků
Boháčová, Barbora ; Dzurendová, Simona (oponent) ; Fialová, Lenka (vedoucí práce)
Stanovení autenticity ovocných výrobků, u kterých často dochází k falšování náhradou části dražšího ovocného druhu levnějším, avšak druhově podobným ovocem, je aktuálním tématem potravinářského průmyslu. Ukázkovým příkladem je ředění výrobků z meruněk broskvovým pyré. Tato práce se zabývá testováním specifických primerů AGS18 a PdCass pro odhalení skutečného podílu meruňkové složky v modelových výrobcích ve směsi právě s broskvovým pyré pomocí PCR analýzy následované HRM analýzou. Testování těchto primerů pro stanovení autenticity odhalilo malou využitelnost primerů AGS18 z důvodu tvorby malého nebo žádného množství specifických produktů při reakcích s ovocnou DNA. Primery PdCass vyžadovaly optimalizaci podmínek PCR, avšak poté s nimi bylo možné amplifikovat specifické sekvence DNA z ovocných listů v dostatečném množství. PCR analýza DNA z modelových výrobků s primery PdCass poskytla specifické produkty v případě vzorků s obsahem meruňky 70 % a méně. HRM analýzou vzorků ani výpočtem GCP nebylo možné odlišit pyré s 0%, 10% a 30% obsahem meruňky. Pyré s 50% a 70% podílem meruňky poskytly křivky tání výrazně odlišné od ostatních vzorků.
|
|
|
Využití techniky PCR pro stanovení přítomnosti probiotických baktérií v komerčním produktu osobní hygieny
Horobets, Yuliia ; Fialová, Lenka (oponent) ; Smetana, Jan (vedoucí práce)
Probiotické bakterie byly tradičně používány v potravinářském průmyslu, avšak v současnosti jsou také široce aplikovány k prevenci a léčbě různých onemocnění. Rostoucí počet důkazů o účinnosti bakterií rodu Lactobacillus v ústní dutině vedl k aplikaci probiotických kmenů tohoto rodu v ústních vodách a jiných produktech osobní hygieny. V rámci této bakalářské práci DNA byla izolována dvěma metodami, následně kvantifikovaná spektrofotometricky a amplifikována pomocí konvenční PCR. Výsledky polymerázové řetězové reakce byly detekovány prostřednictvím gelové elektroforézy. Přítomnost bakterií probiotických druhů Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus plantarum a Lactobacillus pentosus byla ověřená.
|
|
|
Charakterizace cytotoxického efektu kombinovaných nanomateriálů s antimikrobiálním účinkem
Kozlíčková, Hana ; Fialová, Lenka (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Tato diplomová práce se zabývá studiem účinků kombinovaných nanomateriálů na lidské kožní buňky. V diplomové práci byly z hlediska cytotoxicity analyzovány čisté antimikrobiální látky, dva druhy liposomů obohacené o antimikrobiální látky, nanovlákna s antimikrobiálními látkami a v neposlední řadě čtyři druhy kombinovaných nanomateriálů. Analyzovanými aktivními látkami byly eugenol, tymol, kavarkrol, kurkumin, vitamin E a antibiotika streptomycin a ampicilin. V teoretické části práce byla charakterizována buněčná linie humánních keratinocytů, použitá v experimentální části práce pro buněčné testy. Dále byly popsány jednotlivé aktivní látky s antimikrobiálním účinkem a principy jejich biologických účinků, mezi které patří účinky antimikrobiální, antioxidační, cytotoxické a synergické. Dále teoretická část charakterizovala jednotlivé nanomateriály, jejich přípravu a využití v kosmetice a medicíně. Experimentální část byla založena charakterizaci jednotlivých nanomateriálů a na testování vlivu jednotlivých antimikrobiálních látek na proliferaci a životaschopnost humánních buněk typu HaCaT. Pomocí metody DLS byla u připravených liposomů změřena velikost a byl studován vliv obsahu PHB a druhu aktivní látky na jejich velikost. K otestování cytotoxicity jednotlivých látek byly zvoleny testy MTT a LDH. Dále byl proveden „scratch test“ pro sledování vlivu zkoumaných látek na proliferaci a rychlost zacelení rány buňkami. Posledními provedenými testy byly testy imunitní odpovědi, ve kterých byly vzorky testovány z hlediska produkce humánních protizánětlivých cytokinů IL-6 a IL-8. V rámci experimentální části práce bylo zjištěno, že připravené nanovlákenné materiály jsou bezpečné pro použití ve zdravotnictví či kosmetice a do budoucna vhodné pro výrobu nanovlákenných krytů ran obohacených o antimikrobiální látky, které jim dodávají výjimečné vlastnosti.
|
|
|
Charakterizace vybraných komplexních potravinových doplňků
Bandarenka, Andrei ; Fialová, Lenka (oponent) ; Márová, Ivana (vedoucí práce)
Moderní společnost klade velký důraz na zdravý životní styl a vyváženou stravu, díky čemu se zvyšuje zájem o produkty, s vysokým obsahem vitaminů, minerálů a dalších zdraví prospěšných látek. Proto v poslední době roste zájem o různé doplňky stravy, k nimž patří tzv. „greens“ produkty. Tyto doplňky jsou navrženy tak, aby poskytovaly koncentrovaný zdroj živin z různých zelených rostlin a zároveň obsahují vysoký podíl vitamínů, minerálů, antioxidantů a dalších bioaktivních látek. Cílem této diplomové je charakterizace komplexních potravinových doplňků z hlediska jejich složení a obsahu účinných látek pro lepší porozumění mechanismu působení látek zodpovědných za jejich zdraví prospěšný účinek. Teoretická část práci je zaměřena na popis doplňků stravy z legislativního hlediska, včetně jejich charakteristiky a vývoje zájmu o ně v průběhu posledních desetiletí. Dále se teoretická část věnuje popisu základních složek, které se běžně vyskytují v doplňcích, jako jsou vitaminy, rostlinné extrakty, řasy, prebiotika a probiotika. Na závěr jsou popsány metody stanovení těchto složek a nejčastěji používané techniky pro jejich analýzu. V rámci experimentální práce bylo vybráno 12 různých doplňků stravy na rostlinném základě, které spadají do kategorie označované jako „greens“. Pro tyto produkty byl stanoven obsahu fenolických látek, chlorofylů, karotenoidů a dalších antioxidantů. Dále byl zkoumán vliv těchto produktů na růst bakteriálních kultur a metabolickou aktivitu buněk gramnegativních a grampozitivních bakterií. Byla provedena také analýza obsahu vitaminu C a vitaminů skupiny B v těchto doplňcích. Výsledky testů ukázaly, že zkoumané doplňky jsou bohatým zdrojem fenolických látek, chlorofylu, antioxidantů a vitaminu C. Dále bylo zjištěno, že tyto produkty mohou být využity jako prebiotika ve stravě. Na základě provedených testů bylo ověřeno, že potravinové doplňky kategorie "greens" nabízejí širokou škálu zdravotních benefitů a lze je považovat za užitečný příspěvek k vyvážené stravě a zdravému životnímu stylu. Prakticky u všech provedených testů produkty s vysokým obsahem matcha dosahovaly nejlepších výsledků, a proto byla zvolena za jednu z klíčových složek pro vytvoření kvalitních doplňků stravy z rostlinných surovin
|
|
|
Molecular identification of probiotic bacteria in milk products form commercial yoghurt cultures
Horňan, Samuel ; Fialová, Lenka (oponent) ; Smetana, Jan (vedoucí práce)
Lactic acid bacteria are considered as an important group of bacteria with probiotic effects, which are being widely used in the food industry or pharmacology. Identification and characterization of important probiotic strains play an essential role in the validation of probiotic products for commercial purposes. Their identification using molecular-biology techniques (most commonly PCR method) is one of the standard tools in commercial operations and services. The aim of this bachelor thesis is a literature review of probiotics and probiotic strains as well as a summary of current knowledge about the use of molecular biology techniques for identification of these bacteria with probiotic properties in dairy products. The experimental part of this work verifies the presence of probiotic bacteria declared on selected commercial dairy products using the polymerase chain reaction (PCR) method.
|
|
|
Authenticity of natural plant component in cosmetics products
Kubalová, Michaela ; Fialová, Lenka (oponent) ; Němcová, Andrea (vedoucí práce)
The purpose of this thesis was to study the authenticity of selected natural ingredients in cosmetic products. These were specifically cosmetic products that contained citruses, mint or lavender. Commercially available isolation kits were used for DNA isolation. The presence of plant origin DNA was verified by PCR method using primers specific for the ITS2 region of plants. The presence of limonene, a significant allergen contained in said plants, was determined in the samples by PCR method using primers for limonene synthase. At the same time, its presence was verified by HPLC method. In addition, two primers were tested for lavender and monitored for their efficacy, with no significant difference in the usage.
|
|
|
Detection of probiotic bacteria in milk diary food products using PCR technique
Krempaská, Vladimíra ; Fialová, Lenka (oponent) ; Smetana, Jan (vedoucí práce)
Probiotic bacteria play an important role in a healthy lifestyle. They help the consumer maintain the balance of intestinal microflora and prevent the overgrowth of harmful bacteria. Accurate identification and characterization of these probiotic strains is essential for research and the food industry. For exact identification, the use of molecular biological methods is necessary, thanks to which it is possible to validate probiotic products for commercial use. In this bachelor thesis, the DNA of probiotic bacteria was isolated from available dairy products. Two methods of isolation were used to isolate bacterial DNA, both of them provided sufficiently concentrated and high-quality DNA for further analysis by polymerase chain reaction (PCR). The presence of the Bacteria domain, genera Lactobacillus and Bifidobacterium were proved. Finally, the presence of Lactobacillus acidophilus species was also detected in the products.
|
|
|
Vliv typu matrice na stanovení autenticity potravin obsahujících ovocnou složku
Kopková, Pavlína ; Strečanská, Paulína (oponent) ; Fialová, Lenka (vedoucí práce)
Některé druhy potravin, převážně ty dražší, bývají často falšovány za účelem snížení jejich výrobní ceny. Tím se snižuje jejich kvalita a mohou mít i negativní vliv na zdraví konzumenta. Terčem podvodných výrobců jsou i dětské ovocné výrobky, kde je nejčastěji nahrazováno deklarované ovoce levnější variantou. Tato práce je zaměřená na odhalování falšovaných potravin pomocí různých analytických metod, zejména metodou PCR. Teoretická část je zaměřena na problematiku falšování potravin, na analytické metody, které jsou pro odhalování falšování používané a také na mango a banán, které jsou v této práci stanovovány [1]. Cílem práce bylo stanovit vliv typu matrice na stanovení ovocné složky v potravinách metodou PCR. Pro tento účel byly použity tři typy matrice – ovocné pyré, smoothie a tyčinky. Důležitým úkolem bylo optimalizovat izolaci DNA, aby bylo dosaženo odpovídající čistoty a koncentrace DNA. Poté byla stanovena amplifikovatelnost získané DNA. Tato DNA byla následně analyzována pomocí duplex PCR s primery specifickými pro banán a mango. Výsledky byly ověřovány agarózovou gelovou elektroforézou. Následně bylo možné určit, že nejlépe se stanovuje ovocná složka v tyčinkách a čerstvém smoothie, a naopak problematické stanovení je u pyré. Instrumentální část byla zaměřena na stanovení fenolických látek ve výrobcích metodou HPLC. Pro tento účel byla nutná optimalizace extrakce fenolických látek. Touto metodou se podařilo detekovat přítomnost manga ve všech vzorcích.
|
host ::
RSS.