|
|
Interakce proteinových podjednotek SEC10 a SEC15 poutacího komplexu exocyst
Bartáková, Anna ; Ryšlavá, Helena (vedoucí práce) ; Čermáková, Michaela (oponent)
Exocyst je evolučně konzervovaný poutací komplex zapojený do regulace sekreční dráhy v eukaryotických buňkách. Jakožto efektor malých GTPáz zásadně přispívá ke správnému cílení sekrečních váčků do místa intenzivní exocytózy na plazmatické membráně díky interakci se specifickými fosfolipidy. Komplex exocyst se skládá z osmi podjednotek: SEC3, SEC5, SEC6, SEC8, SEC10, SEC15, EXO70 a EXO84, přičemž každá podjednotka se váže s minimálně dvěma dalšími podjednotkami. Pro funkci exocystu je klíčová interakce SEC10 a SEC15. Otázkou zůstává, jak jsou tyto dvě podjednotky v rámci rostlin funkčně konzervované. Geny SEC10 a SEC15 ze zástupců tří evolučně rozdílných skupin rostlin (zelené řasy - Klebsormidium nitens, mechu - Marchantia polymorpha, krytosemenné - Arabidopsis thaliana) byly klonovány do vektorů kvasinkového dvouhybridního systému pro studium proteinových interakcí. Testování vzájemné interakce SEC10 a SEC15 z odlišných druhů rostlin v kvasinkovém dvouhybridním systému ukázalo, že i přes variabilitu v proteinových sekvencích těchto podjednotek, zůstává jejich interakce napříč evolučními skupinami rostlin velmi dobře zachována.
|
|
|
Detailní enzymová charakterizace modelového zástupce hemových kyslíkových senzorů
Vojáčková, Lukrécie Sophie ; Martínková, Markéta (vedoucí práce) ; Čermáková, Michaela (oponent)
Tato práce je zaměřena na hemové senzorové proteiny detekující kyslík, zejména na fosfodiesterasu z bakterie Escherichia coli, označovanou jako EcDOS. Tento enzym katalyzuje degradaci c-di-GMP, což je důležitá signální molekula bakterií, jež má vliv na určité buněčné pochody, např. na pohyblivost bakterií nebo tvorbu biofilmů. Práce se zabývá detailní enzymovou kinetikou forem proteinu v různých redoxních a ligandových stavech iontu železa hemu [Fe(III), Fe(II) a Fe(II)-O2] a věnuje se také mutantní formě tohoto enzymu (EcDOS H77A), která neváže hem. Jedním z výsledků práce bylo potvrzení toho, že forma EcDOS WT Fe(II)-O2 vykazuje vyšší hodnoty kcat než forma EcDOS s iontem železa hemu v redukovaném stavu. Překvapením bylo zjištění, že aktivita enzymu je ovlivněna nejen stavem iontu železa hemu, ale i přítomnými dvojmocnými kationty kovů a jejich koncentracemi. Přítomnost kationtu kovu je pro funkci enzymu esenciální a vhodnými ionty kovů, které stimulují enzymovou aktivitu, jsou Mg2+ , Mn2+ a Zn2+ nebo jejich směsi, jež působí na aktivitu enzymu za zvolených podmínek synergicky. Analýza pomocí ICP-MS také prokázala, že kationty Zn2+ jsou přirozenou součástí enzymu. Tudíž by pro další kinetické studie bylo vhodné využít Zn2+ nebo směsi iontů kovů, které jsou fyziologické pro E. coli, z níž EcDOS...
|
|
|
Studium energetického metabolismu u pacientů s poruchou mitochondriální translace
Hýbl, Martin ; Hansíková, Hana (vedoucí práce) ; Čermáková, Michaela (oponent)
Mitochondrie jsou semiautonomní organely obsahující vlastní DNA. Lidská mitochondriální DNA (mtDNA) kóduje celkem 37 genů: 13 podjednotek komplexů systému oxidační fosforylace (OXPHOS), 22 molekul transferových RNA (tRNA) a 2 molekuly ribosomální RNA (rRNA). Patogenní mutace v genech spojených s mitochondriální translací jsou častou příčinou vzniku mitochondriálních onemocnění. Tyto mutace mohou být nalezeny v mtDNA, nebo v jaderných genech kódujících ribosomální proteiny, iniciační, elongační a terminační faktory, enzymy modifikující mitochondriální tRNA a aminoacyl-tRNAsynthetasy. Mitochondriální aminoacyltRNAsynthetasy (mt-aaRS) jsou enzymy katalyzující připojení jednotlivých aminokyselin ke specifickým tRNA. Cílem bakalářské práce bylo seznámení se s prací v laboratoři tkáňových kultur. V rámci přípravy vzorků pro následující experimenty byly kultivovány kožní fibroblasty od pěti pacientů s poruchou mt-aaRS (AARS2, DARS2, NARS2, SARS2) a kontrolních linií v glukosovém a galaktosovém médiu. Následně byl optimalizován postup pro stanovení rovnovážného množství vybraných podjednotek komplexů systému OXPHOS, který byl aplikován při analýze fibroblastů od pěti pacientů s poruchou mt-aaRS. Při kultivaci buněk v glukosovém mediu bylo u čtyř pacientů pozorováno snížení hladin některých podjednotek...
|
|
|
Příprava vazebné domény proteinu B7-H6 s vysokou afinitou
Jeníček, Jakub ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Čermáková, Michaela (oponent)
Přirozeně zabijácké buňky jsou součástí přirozené imunity a hrají důležitou roli při ochraně organismu. Zásadní jsou v obraně před nádorovými onemocněními a případně v protinádorové terapii. Proto jsou tyto buňky dlouhodobě předmětem mnoha výzkumů, neboť nádorová onemocnění představují celosvětově jednu z nejčastějších příčin úmrtí. Léčba těchto onemocnění bývá často složitá a invazivní, a proto je výhodné hledat nové terapeutické přístupy, které by využívaly již existující obranné mechanismy. Jedním z klíčových mechanismů, který NK buňky využívají pro rozpoznávání nádorových buněk a jejich eliminaci je receptor NKp30. Tento receptor může po vazbě aktivačního ligandu vyvolat cytotoxickou odpověď, která vede k likvidaci nádorové buňky. Jedním z aktivačních ligandů tohoto receptoru je protein B7-H6, jenž se přirozeně vyskytuje na povrchu buněk některých nádorů. Přesná podstata interakce B7-H6 a NKp30 však není dosud dokonale popsána. Tato práce se zabývá různými metodami přípravy fluorescenčně značené domény B7-H6, která by umožňovala vizualizaci receptoru NKp30 na povrchu buněk, čímž by přispěla k lepšímu popisu interakce těchto molekul. KLÍČOVÁ SLOVA NK buňky, NKp30, B7-H6, sortasa A, HEK293
|
|
|
Vliv pH a dalších faktorů na metabolické přeměny tyrosinkinasových inhibitorů.
Čillíková, Olívia ; Indra, Radek (vedoucí práce) ; Čermáková, Michaela (oponent)
Cílená protinádorová terapie je novodobým efektivním přístupem k léčbě nádorových onemocnění. Tento typ léčby zahrnuje několik skupin protinádorových léčiv. Druhou nejčastěji využívanou skupinou cílených chemoterapeutik jsou inhibitory tyrosinkinas. Jedná se o nízkomolekulární látky, které cíleně zasahují do určitých signalizačních drah nádorové buňky a tím inhibují její růst, proliferaci a angiogenezi. Zástupci této skupiny léčiv jsou např. vandetanib a sunitinib. Vandetanib se primárně využívá k léčbě medulárního karcinomu štítné žlázy a sunitinib byl schválen pro léčbu gastrointestinálního stromálního tumoru a pro léčbu pokročilého renálního karcinomu. Předkládaná diplomová práce se zabývá vlivem pH a teploty na in vitro metabolismu sunitinibu a vandetanibu pomocí enzymů v první fázi biotransformace. Při experimentech byly použity různé jaterní mikrozomy z premedikovaných a kontrolních potkanů. Pro porovnání byly využity lidské a potkaní rekombinantní cytochromy P450. Primárním účelem experimentů bylo nalezení experimentálního pH a teplotního optima jejich in vitro metabolismu. V rámci těchto experimentů byl zkoumán i vliv pH a teploty na samotná léčiva a jejich stabilitu. Ovlivnění metabolismu vandetanibu a sunitinibu pomocí pH a teploty bylo analyzováno pomocí vysokoúčinné kapalinové...
|
|
|
Analýza systému vzdělávání v organizaci
Čermáková, Michaela ; Svobodová, Zuzana (vedoucí práce) ; Kursch, Martin (oponent)
Předmětem této práce bude popsat a zhodnotit současný vzdělávací systém ve vybrané organizaci a analyzovat vzdělávací potřeby zaměstnanců, jejich motivaci a bariéry pro další vzdělávání. Práce bude rozdělena do dvou částí. Jedná se o teoretickou část a empirickou část. Teoretická část popíše základní pojmy spojené s personálním řízením, úkoly a strategií řízení lidských zdrojů a významem vzdělávání pro organizaci. Dále se bude věnovat významu motivace zaměstnanců k dalšímu vzdělávání a bariérami, které ve vzdělávání zaměstnancům brání. Řešena bude problematika cílů a filozofie vzdělávání, systému vzdělávání, procesu vzdělávání a metod vzdělávání. Text bude čerpat z tuzemské, ale i zahraniční literatury. Další kapitola se bude věnovat analýze systému vzdělávání zaměstnanců ve vybrané organizaci, která se bude opírat o případovou studii a následně interpretaci získaných dat. Výzkum bude realizován v první fázi formou dotazníkového šetření, následovanou druhou fází a sice přímými rozhovory se zaměstnanci dané pobočky organizace a jejich vedoucím pracovníkem zodpovědným za oblast vzdělávání. V závěru budou shrnuta veškerá zjištění plynoucí z výzkumu, zhodnocena míra dosažení stanovených cílů a samozřejmě zde budou uvedena i doporučení řešení případných nedostatků ve vzdělávání zjištěných při výzkumu....
|
|
|
Financování neziskové organizace v kulturní oblasti
ČERMÁKOVÁ, Michaela
Teoretická část této práce popisuje neziskový sektor, neziskovou organizaci a také typy neziskových organizací. Práce klade velký důraz na popis konkrétních způsobů financování neziskových organizací zejména v oblasti kultury. Praktická část charakterizuje vybranou neziskovou organizaci a provádí finanční analýzu této organizace. Popisuje finanční zdroje organizace a porovnává je v čase. Na základě získaných výsledků je zkoumána efektivnost využití finančních zdrojů, nalezen dominantní zdroj a také je posouzeno celkové finanční hospodaření. Na závěr je doporučeno několik návrhů pro získání dalších finančních zdrojů.
|
|
| |
|
|
Rekombinantní exprese receptoru myších NK buněk NKR-P1C
Rudenko, Anastassiya ; Vaněk, Ondřej (vedoucí práce) ; Čermáková, Michaela (oponent)
NK buňky (z angl. Natural Killers) představují buňky stojící v první řadě obrany organismu proti různým nebezpečím, jakými jsou například viry nebo rakovinné buňky. NK buňky mají schopnost rozpoznat a zničit nežádoucí buňky několika různými způsoby, které se hodně liší od obranných mechanismů například u T- nebo B-lymfocytů. NK buňky nesou na svém povrchu širokou škálu různých aktivačních a inhibičních receptorů, pomocí kterých dokážou rozlišit zdravé buňky od škodlivých, či infikovaných buněk. NKR-P1 (z angl. natural killer receptor-protein 1) je první objevená rodina NK buněčných receptorů podobných lektinům C-typu, do které patří jak aktivační, tak inhibiční receptory. NKR-P1C je aktivační receptor, který je schopen tvorby homodimerů na povrchu NK buněk. Hlavními ligandy NKR-P1 rodiny receptorů jsou imunoenvasiny myšího cytomegaloviru a jiné molekuly strukturně odlišné od MHC glykoproteinů I. třídy. Tato práce se zabývá rekombinantní expresí receptorového proteinu NKR-P1C. Pomocí plazmidu pUT7 byla systémem PiggiyBac připravena stabilně transfekovaná linie buněk HEK293T nesoucí gen pro expresi extracelulární části NKR-P1C spojenou s Fc fragmentem IgG, které mezi sebou nesou zásahovou sekvenci pro štěpení TEV proteasou. Protein byl purifikován pomocí afinitní a gelové permeační chromatografie a...
|
|
|
Strukturované drama jako prostředek k prevenci šikany
Čermáková, Michaela ; Svobodová, Radmila (vedoucí práce) ; Holemá, Irena (oponent)
Diplomová práce se věnuje metodě strukturovaného dramatu a její pomoci v prevenci šikany, konkrétně pochopení role mlčícího svědka jako osoby, která může zamezit šikaně, pokud z ní vystoupí. Teoretická část vymezuje termín šikana, popisuje formy, příčiny a charakteristické znaky šikanování mezi žáky prvního stupně základní školy. V této části práce je rovněž definována zvolená metoda strukturovaného dramatu, její postupy a techniky. Součástí praktické části je vytvořené strukturované drama a jeho reflexe. Pomocí dotazníkového šetření je zkoumán postojový posun u vybraných žáků v rozhodnutí vystoupit z role mlčícího svědka. Výchozí a koncovou fází zkoumaného posunu je období bezprostředně před realizací strukturovaného dramatu a doba několika měsíců po jeho realizaci. KLÍČOVÁ SLOVA: Strukturované drama, dramatická výchova, metody a techniky, šikana, mlčící většina, prevence, první stupeň ZŠ, rozhodování
|
host ::
RSS.