|
|
Refraktometrická studie lipoproteinu o velmi nízké hustotě (VLDL)
Šinglárová, Simona ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Staňková, Barbora (oponent)
Znalost chemického složení lipoproteinů má široký význam. Pří stanovení velikosti částic lipoproteinových frakcí je nutná předběžná separace pomocí ultracentrifugace v hustotních roztocích. Obvykle se samotné stanovení provádí elektroforeticky či gelovou filtrací s vhodnou detekcí, která výsledek zkresluje. Lepší řešení nabízí nový detektor, tzv. Light Scattering Detector, který detekuje ohyb laserového paprsku na molekulách či částicích v roztoku. Pro výpočet velikosti částic vyžaduje závislost indexu lomu na koncentraci dn/dc. Koncentrace je stanovena gravimetricky a indexy lomu metodou refraktometrickou. Závislosti nejlépe vyhovuje polynomická funkce. Zda koreluje s chemickým složením lipoproteinu VLDL je možné určit na základě studia většího počtu vzorků.
|
|
|
Analysis of amino acids and polyamines by HPLC and CZE
Kubíčková, Anna ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Flieger, Miroslav (oponent)
(CZ) V rámci této diserta ní práce byly studovány dv skupiny amin . První z nich tvo í deriváty cyklického polyaminokarboxylátu DOTA (kyselina 1,4,7,10- tetraazacyklododekan-1,4,7,10-tetraoctová), které jsou významnými reak ními meziprodukty p i syntéze kontrastních látek pro magnetickou rezonanci (MRI). Výsadní postavení mezi t mito deriváty zaujímá tBu3DO3A (1,4,7,10- tetraazacyklododekan-1,4,7-tris(tert-butylacetát). Vedle tBu3DO3A byly detailn studovány dva typické vedlejší produkty syntézy tBu3DO3A, tj. tBu4DOTA (1,4,7,10-tetraazacyklododekan-1,4,7,10-tetrakis(tert-butylacetát) a tBu2DO2A (tBu2DO2A, i.e. 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-1,4-bis(tert-butylacetát). Ke studiu výše zmín ných látek byla použita kapalinová chromatografie v reverzním módu (RP-HPLC) a kapilární zónová elektroforéza (CZE) s UV-VIS detekcí. Vyvinuté metody byly prakticky otestovány na analýze realných reak ních sm sí. Lze konstatovat, že ob metody p edstavují rychlé, ú inné a jednoduché ešení pro sledování syntézy nov vyvíjených MRI kontrastních látek, nebo mohou být použity p ímo, bez jakékoli další p edúpravy vzork reak ních sm sí. Druhá ást této práce se v nuje problému detekce polyamin a aminokyselin b žnou UV-VIS spektrometrií. Byl vyvinut a otestován nový "solid-phase" reaktor na bázi oxidu m natého vhodný pro...
|
|
|
Characterization of modern HPLC columns and their application potential
Janečková, Lucie ; Tesařová, Eva (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Flieger, Miroslav (oponent)
(CZ) Cílem předkládané disertační práce byla charakterizace moderních HPLC kolon z hlediska jejich interakčních možností a ukázka jejich aplikačního potenciálu. První část disertační práce je zaměřena na alternativní reverzní HPLC kolony na bázi oxidu zirkoničitého. Tyto kolony vykazují vysokou chemickou stabilitu a rozšířený interakční mechanismus, který přináší řadu výhod při vývoji analytických metod. Detailní studie chromatografického chování biologicky aktivních nonapeptidů potvrdila značný vliv složení mobilní fáze na retenční mechanismus. Pro rozpoznání interakcí podílejících se na separačním procesu byly následně využity různé přístupy. Základní vlastnosti (hydrofobicita a polarita) kolony na bázi oxidu zirkoničitého s polystyrenovou stacionární fází byly zjištěny pomocí jednoduchých chromatografických testů. Model lineárních vztahů volných energií popsal interakce převládající v různých separačních systémech se zirkoniovou kolonou. Aplikace sady bazických látek vedla k odhalení iontově- výměnných interakcí, které se mohou významně podílet na separačním procesu v systémech se zirkoniovými kolonami. Druhá část práce se věnuje novým chirálním stacionárním fázím na bázi derivatizovaných cyklofruktanů. Strukturně odlišné chirální látky (binaftylové deriváty a některá chiralní léčiva) byly...
|
|
| |
|
|
Applications of capillary electrophoresis in life sciences
Křížek, Tomáš ; Coufal, Pavel (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Tůma, Petr (oponent)
Tomáš Křížek: Využití kapilární elektroforézy ve vědách o životě (Disertační práce) ABSTRAKT Tato práce se zabývá využitím kapilární elektroforézy ve dvou významných oblastech "věd o životě", konkrétně v proteomice a stanovení aktivity enzymů. V první části jsou studovány vlastnosti polymeru Pluronic F-127 jako separačního média v kapilární gelové elektroforéze. Byl zkoumán vliv termoasociace Pluronicu F-127 na selektivitu separace peptidů a aminokyselin, přičemž při teplotách pod, uvnitř a nad oblastí termoasociace žádný rozdíl v selektivitě pozorován nebyl. Funkce Pluronicu F-127 v kapilární gelové elektroforéze byla porovnána s dextranem, jakožto běžně používanou gelovou matricí. Výsledky ukazují, že Pluronic F-127 je výhodnějším médiem pro separace nízkomolekulárních bílkovin, protože poskytuje větší separační sílu při zachování nižší viskozity základního elektrolytu. Tato nižší viskozita usnadňuje výměnu základního elektrolytu po každém měření, což vede k výrazně vyšší opakovatelnosti pokusů. Dextran je na druhé straně díky své vyšší viskozitě vhodnější pro separace peptidových štěpů bílkovin, při kterých je zásadním parametrem vysoká účinnost separace. Druhá část práce je zaměřena na elektroforetická stanovení aktivity enzymů. Byla vyvinuta nová metoda separace N,N',N''-triacetylchitotriosy,...
|
|
|
Využití kapilární a čipové elektroforézy pro klinický výzkum
Pavlíček, Václav ; Tůma, Petr (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent) ; Dlouhý, Pavel (oponent)
Předkládaná dizertační práce na téma "Využití kapilární a čipové elektroforézy pro klinický výzkum" je rozdělena na dvě samostatné části. První kapitola shrnuje problematiku vývoje velmi rychlého stanovení kyseliny močové a kreatininu v lidské moči a séru prostřednictvím kapilární elektroforézy s UV detekcí, kdy bylo vyvinuto zcela originální řešení pro provádění desetivteřinové elektroforetické separace na komerčním elektroforetickém přístroji Agilent HP3D CE. Separace byly prováděny v laboratorně sestavené kapiláře vytvořené spojením 9,7 cm dlouhé analytické kapiláry s vnitřním průměrem (d) 25 m a 22,9 cm dlouhé pomocné kapiláry s d 100 m. Vlastní elektroforetická separace probíhá na krátké separační dráze o délce 8,3 cm při současné aplikaci elektrického separačního pole o vysoké intenzitě cca 2,3 kV.cm-1 (při většině elektroforetických separací nepřekračuje intenzita hodnotu 1,0 kV.cm-1 ). Spojená kapilára byla testována při praktických klinických stanoveních: i) stanovení kreatininu v lidské moči prováděné v základním elektrolytu - o složení 20 mM kyselina citronová / NaOH, pH 3,0; ii) stanovení kyseliny močové v lidské moči v základním elektrolytu, 20 mM MES / NaOH, pH 6,0. Za těchto experimentálních podmínek bylo dosaženo velmi krátkých migračních časů, 12,2 s pro kreatinin a 8,6 s pro...
|
|
|
Optimalizace SPE pro stanovení perfluorovaných organických kyselin
Ševčík, Václav ; Čabala, Radomír (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent)
Práce se zabývá optimalizací úpravy vodných vzorku životního prostředí pro stanovení perzistentních polutantů - perfluorovaných organických kyselin, které jsou potenciálně škodlivé pro živé organismy. Cílem práce je optimalizovat podmínky pro SPE prekoncentraci těchto látek pro jejich stanovení metodou GC-MS. Jako analyty byly zvoleny perfluorované organické kyseliny s uhlíkovým řetězcem od C6 do C12. Při optimalizaci SPE postupu byly studovány vlivy pH vzorku, typu a objemu elučního činidla, přídavku indiferentní soli a iontově párového činidla. Výsledky ukázaly, že účinnost extrakce je závislá na délce uhlíkového řetězce analytu a dosahuje hodnot od 75 do 110 % pro C6 - C8 a od 55 do 95 % pro C9 - C12. Výsledkem optimalizace bylo zvýšení účinnosti extrakce, které je nejmarkantnější pro kyseliny s krátkým řetězcem (C6 až 10 x), zatímco u kyselin s delším řetězcem došlo jen k mírnému zvýšení.
|
|
|
Imobilizace proteasy V8 na magnetických částicích pro použití k proteolytickému štěpení pepsinu A
Čepa, Adam ; Pacáková, Věra (vedoucí práce) ; Tichá, Marie (oponent)
Tato bakalářská práce navazuje na dlouholetý výzkum v oblasti diagnostiky onemocnění žaludku, který je založen na mapování žaludečního enzymu pepsinu A. Bylo zjištěno, že určité fosforylace v primární struktuře tohoto enzymu mohou sloužit jako marker počínající karcinogenity. Tato bakalářská práce je zaměřena na imobilizaci proteasy V8 izolované z mikroorganismu Stafylococcus aureus na agarosových magnetických kuličkách. Proteasa V8 je vhodným kandidátem pro tvorbu peptidové mapy pepsinu A. Byl studován vliv pH, teploty a reakční doby na aktivitu enzymu a určeny optimální podmínky pro hydrolytickou katalýzu tvorby peptidických fragmentů pepsinu A.
|
|
|
Studium vlivu 17β-estradiolu a 17α-ethynylestradiolu na kapacitaci myších spermií in vitro.
Adamusová, Hana ; Bosáková, Zuzana (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent)
Mezi polutanty vyskytující se v životním prostředí patří také látky nazývající se endokrinní disruptory (EDC). Ty působí změny ve funkci endokrinních orgánů a mimo jiné mezi ně patří i estrogenní hormony, a to jak přirozené, tak syntetické. EDC se mohou vázat na receptory endogenních hormonů nebo bránit jejich syntéze. 17β-Estradiol je přirozený estrogenní hormon patřící do skupiny endokrinních disruptorů, ve větší míře jej vylučují ženy, avšak u mužů je produkován také. Mezi EDC patří také syntetický estrogen 17α-ethynylestradiol, který je hlavní složkou hormonální antikoncepce a spolu s ostatními estrogenními endokrinními disruptory je nejspíš zodpovědný za feminizaci samců u živočichů žijících v blízkosti čistíren odpadních vod. Účelem této práce bylo vyvinout metodu pro stanovení koncentrace volného 17β-estradiolu (BE2) a 17α-ethynylestradiolu (EE2) dostupného pro kapacitující spermie. Pro stanovení BE2 během kapacitace myších spermií in vitro bylo použito vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) s tandemovou hmotnostní detekcí (MS/MS). Separační systém v reverzním módu se sestával z kolony SunFire C18 a jednoduché binární mobilní fáze složené z ACN a vody v poměru 40/60 (v/v), obě složky mobilní fáze obsahovaly 0,1% roztok mravenčí kyseliny. Za optimalizovaných separačních a kvantifikačních...
|
|
|
Charakterizace poly(1,4-diethynylbenzen)u metodou IGC
Petrášová, Sabina ; Sedláček, Jan (vedoucí práce) ; Pacáková, Věra (oponent)
Cestou et zové koordina ní polymerizace katalyzované komplexem [Rh(NBD)acac] byl 1,4-diethynylbenzen transformován na poly(1,4-diethynylbenzen) (polymer -konjugovaného typu) ve form nerozpustné polymerní sít . Termodynamické vlastnosti a acidobazické charakteristiky p ipraveného poly(1,4-diethynylbenzen)u byly studovány metodou inverzní plynové chromatografie (IGC) v teplotním rozsahu 80-100 řC. Reten ní data vybraných testovacích látek byla použita ke stanovení sorp ních Gibbsových energií, sorp ních entalpií, jejich acidobazických a disperzních složek a dále pak ke stanovení disperzní složky povrchové energie a parametr KA, KD, ANHPS a DNHPS kvantifikujících acidobazický charakter studovaného polymeru. Výsledky ukázaly, že poly(1,4-diethynylbenzen) interaguje ochotn ji s Lewisovými bázemi než Lewisovými kyselinami. Experimentáln zjišt né hodnoty sorp ní entalpie byly použity ke stanovení parametr KA a KD, které poly(1,4-diethynylbenzen) adí mezi materiály s mírn kyselým charakterem. Tento záv r potvrzuje i metoda podle H. P. Schreibera využívající ke stanovení acidobazických vlastností materiálu parametry ANHPS a DNHPS ur ené z primárních reten ních dat. Pomocí infra ervené spektroskopie bylo dokázáno, že poly(1,4-diethynylbenzen) obsahuje nezanedbatelné množství postranních nezreagovaných...
|
host ::
RSS.