|
|
Využití UHPLC v analýze rozkladných produktů tertrakain-hydrochloridu
Horáková, Michaela ; Matysová, Ludmila (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Horáková Školitel: PharmDr. Ludmila Matysová, Ph.D Název diplomové práce: Využití UHPLC v analýze rozkladných produktů tetrakain- hydrochloridu Tato diplomová práce se zabývá využitím UHPLC pro analýzu tetrakain-hydrochloridu a jeho rozkladných produktů, kyseliny 4-aminobenzoové a 4-(butylamino)benzoové. Analýza probíhala na koloně Kinetex 5 µ XB-C18 100A za využití mobilní fáze acetonitril-pufr, kdy pufr obsahoval vodu upravenou kyselinou fosforečnou na pH=2,2, při průtoku 1,7 ml/min. Byla zvolena gradientová eluce, která začínala na 35% acetonitrilu, ve druhé minutě stoupla na 90% organické fáze a poté opět klesla na 35% ve čtvrté minutě. Jako vnitřní standard byl využit ethylparaben. Pro detekci byla zvolena vlnová délka 300 nm pro tetrakain a nečistoty a 240 nm pro vnitřní standard. Validace dokázala, že metoda poskytuje přesné a správné výsledky.
|
|
|
Stanovení tokoferolů v biologickém materiálu (rešeršní práce)
Koutová, Jana ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Sklenářová, Hana (oponent)
Cílem této diplomové práce bylo vytvořit přehled laboratorních metod používaných pro stanovení vitamínu E v biologických matricích. Vitamín E je důležitým antioxidantem a jeho deficit je spojován se závažnými kardiovaskulárními, nervovými a imunitními onemocněními. Četnost jeho stanovení se v posledních letech zvyšuje, u metod je kladen důraz na rychlost, univerzálnost a možnost automatizace. Teoretická část je věnována chemickým, fyzikálním vlastnostem a biologické funkci. Tyto poznatky jsou důležité jako úvod pro pochopení funkce vitamínu v organizmu a jeho chemicko- fyzikální podstata pro volbu metod stanovení. Mezi hlavní metody stanovení je možno zařadit především chromatografické metody (UHPLC, HPLC, GC) a dále metody elektrochromatografické (CEC) a spektrofotometrické. V závěru práce jsou uvedené metody porovnány z různých hledisek. Klíčová slova: tokoferoly, vitamín E, biologický materiál.
|
|
|
Testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systému
Chládková, Gabriela ; Sklenářová, Hana (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Gabriela Chládková Školitel: Doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Konzultant: Doc. RNDr. Miroslav Polášek, Csc. Název diplomové práce: Testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systému Úkolem této diplomové práce bylo porovnání různých podmínek pro testování antioxidační aktivity pomocí luminolového chemiluminiscenčního systém v průtokovém systému a zhodnocení závislosti antioxidační účinnosti na koncentraci. Antioxidační účinnost byla popisována jako závislost zhášení chemiluminiscenčního signálu na použité koncentraci antioxidantu. Byla pozorována antioxidační účinnost tří látek - resveratrol, kyselina p- kumarová a trolox. Trolox se používá jako standard při hodnocení antioxidační aktivity. Chemiluminiscenční systém byl tvořen chemiluminiscenčním činidlem, zde byl použit luminol v roztoku hydroxidu sodného popř. v roztoku uhličitanu sodného s úpravou pH na 10, nebo bez úpravy. Luminol vykazoval chemiluminiscenční záření následně po oxidaci peroxidem vodíku v přítomnosti katalyzátorů. Jako katalyzátor zde byl použit hexakyanoželezitan draselný popř. hexakyanoželeznatan draselný. Během měření bylo nastaveno pracovní napětí 435 mV popř. 750 mV. Celá analýza probíhala...
|
|
|
Vývoj HPLC metody pro stanoveni vankomycinu v klinickém výzkumu
Kučerová, Kateřina ; Kujovská Krčmová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Kučerová Školitel: RNDr. Lenka Kujovská Krčmová, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj HPLC metody pro stanovení vankomycinu v klinickém výzkumu Cílem této diplomové práce bylo vytvořit optimální chromatografické podmínky pro stanovení vankomycinu pro klinický výzkum. K separaci byla využita kolona KinetexTM C18 o rozměrech 50 × 4,6 mm (Phenomenex, USA) s povrchově porézními částicemi o velikosti 2,6 μm. Mobilní fázi tvořil fosfátový pufr o pH 4,5 a acetonitril v poměru 90 : 10. Jako vnitřní standard byl zvolen cefuroxim, který byl spolu s vankomycinem detekován při 220 nm. Po optimalizaci separačních podmínek byla metoda aplikována na biologický materiál. Vzorky byly jednoduše upraveny pouze pomocí precipitačního činidla. Metoda byla částečně validována. Klíčová slova: vankomycin, HPLC-UV, plasma
|
|
|
Stanovení acetylcholinu pomocí LC-MS ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů LC-MS/MS
Vrobel, Ivo ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Ivo Vrobel Školitelé: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc; Katedra analytické chemie, Farmaceutická fakulta, Univerzita Karlova v Praze Prof. Seppo Auriola, MSc.(Chem.) Marko Lehtonen; Katedra farmaceutické chemie, Škola farmacie, Univerzita Východního Finska v Kuopiu Název diplomové práce: Stanovení acetylcholinu pomocí LC-MS/MS ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů Byla vyvinuta nová rychlá a jednoduchá analytická metoda na stanovení acetylcholinu (ACh) ve vzorcích mozkových mikrodialyzátů založena na kapalinové chromatografii spojené s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS), využívající isotopicky značený vnitřní standard. Pentafluorofenylpropylová (PFPP) stacionární fáze spolu s mobilní fází složené z 0.05% vodného roztoku TFA a 4% ACN zabezpečuje dostatečnou retenci ACh a jeho separaci od anorganických solí. Ionizace ACh a vnitřního standardu, odolná vůči použití TFA, byla dosažena pomocí ionizace termosprejem za atmosférického tlaku (APTSI). Detekce ACh a vnitřního standardu byla docílena pomocí selektivního reakčního monitoringu (SRM) v lineární iontové pasti. Křížová validace byla provedena porovnáním nově vyvinuté metody s validovanou metodou rutinně používanou ke stanovení ACh. Soubor...
|
|
|
Stresové zkoušky dimetinden-maleinátu s využitím metody HPLC
Pannyová, Anna ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
ABSTAKT Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Studentka: Anna Pannyová Školitel: PharmDr. Lucie Havlíková, Ph.D Název diplomové práce: Stresové zkoušky dimetinden-maleinátu s využitím metody HPLC Cílem této práce bylo zjistit stabilitu dimetinden-maleinátu pomocí stresových testů a provést optimalizaci metody pro stanovení dimetindenu a jeho nečistot. Stresové zkoušky se provádějí s léčivým přípravkem/léčivou látkou za účelem zjištění jejich stability. Případná nestabilita se může projevit úbytkem účinné látky, ztrátou její farmakologické aktivity nebo vznikem rozkladných produktů. Dimetinden-maleinát je látka s antihistaminickými účinky, působí na H1 receptory histaminu. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) je v současné době jednou z nejpoužívanějších separačních metod sloužících k analýze stability léčivých přípravků a léčivých látek. V průběhu experimentální části práce bylo prokázáno, že zvýšená teplota, voda, acetonitril ani kyselé prostředí nemají vliv na stabilitu léčiva. Zato zásadité prostředí a přítomnost oxidačního činidla vedou k významnému rozpadu dimetindenu za vzniku rozkladných produktů DP1(tR 3,94 min) a DP2 (tR 6,08 min). Rozkladné produkty byly odděleny od píku dimetindenu za použití chromatografické kolony Zorbax SB-CN (4,6...
|
|
|
Metabolomic analysis of plasma samples using ultra performance liquid chromatography and high resolution mass spectrometry
Machová, Karolína ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Karolína Machová Konzultant: Prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Název diplomové práce: Využití ultraúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotností spektrometrií v metabolomické analýze plasmy Metabolomika je nová věda popisující komplexní metody pro určování a měření metabolitů v biologických vzorcích především tělních tekutinách jako je plasma, moč, sérum, sliny, cerebrospinální tekutina, sperma. Popisuje děje probíhající v buňkách a nachází široké uplatnění v diagnostice onemocnění, určování biomarkerů, patofyziologii nemocí a klinické praxi. Hladiny metabolitů jsou v nízkých koncentračních rozmezích, a proto je kladen důraz na vysokou citlivost metody. Důležitá je reprodukovatelnost analytické metody a také příprava vzorku. Metabolomická analýza využívá pro stanovení metabolitů především vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii v kombinaci s hmotnostním detektorem. Další běžné analytické metody jsou nukleární magnetické rezonance a plynová chromatografie. Následující projekt je zaměřen na standardizaci metody identifikace nalezených metabolitů pomocí ultra-účinné kapalinové chromatografie v kombinaci s hmotnostním spektrometrem s využitím počítačového vyhodnocení pomocí databáze známých látek.
|
|
|
Vývoj a validace nových HPLC metod pro stanovení biologicky aktivních látek v klinické praxi
Krčmová, Lenka ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Sochor, Jaroslav (oponent) ; Malíř, František (oponent)
Abstrokt Uníverzita Korlovo v Praze, Formoceutickó fokulto v Hrodci Królové Kotedro: Anolytické chemie Kondidót: Mgr. Lenka Krčmovó školitel' prof. RNDr. Petr Solich, CSc. Nózev diserŤočnípróce: Vývoj o volidoce noých HPLC metod pro stonovení biologicky oktivních lótek v klinické proxi DiserŤočnípróce se zabývá ývojam o volidocí HPLC metod oplikovotelných pro klinický ýzkum o proxi ve Výzkumné loborotoři Kliniky garontologické a metobolické (GMK) ve Fokultní nemocnici v Hrodci Królové. V této próci byly využityněkteré moderní onolytické postupy umožňujícípříprovu valkých sekvencí vzorků biologického moteriólu, sloužícík urychlení seParace onolyzovoných lótek o dosohujícísníženíspotřeby rozpouštědlo i analy zov aného vzor ku, otd. Nově bylo vyvinuto o volidovóno metodo pro stonovení kyseliny 13-cis o oll-Ťrons retinové, retinolu, olfo- o gomo-tokoferolu v lidském séru s vnitřní stondardizocí pro pocienŤy trpící okutní promyaloidní leukémiíléčenékyselinou retínovou. Joko extrokčnípostup byla zvolena extrakce no tuhou Íózi a pro seporoci bylo využito ýhod monolitické stacionórnÍ fóze. Nově bylo toká vyvinuto metodo pro sŤonovení neopterinu, kreotininu, kynureninu o tryptofonu v lidském séru s využitímmonolitíckých stocionórních Íózí.Toto metodo bylo vyvinuto s ohledem na velké série vzorků, kteréje nutno...
|
|
|
Testování vlastností nových "fused-core" analytických kolon v UHPLC systému a porovnání s BEH UHPLC analytickými kolonami
Nežádalová, Jitka ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kujovská Krčmová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Jitka Nežádalová Školitel: PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Testování vlastností nových "fused - core" analytických kolon v UHPLC systému a porovnání s BEH UPLC analytickými kolonami Tato diplomová práce byla zaměřena na testování vlastností nových analytických kolon naplněných povrchově porézními částicemi, tzv. fused-core analytických kolon, v UHPLC systému v porovnání s BEH UPLC analytickou kolonou. Testovány byly kolony Kinetex PFP o velikosti částic 1,7 µm a 2,6 µm (Phenomenex) a Ascentis Express Phenyl-hexyl o velikosti částic 2,7 µm (Sigma-Aldrich), tedy kolony s povrchově porézními částicemi a kolona Acquity BEH Phenyl (Waters) s celkově porézními částicemi o velikosti 1,7 µm. K porovnání vlastností kolon bylo použito 7 estrogenních steroidů za detekce pomocí PDA detektoru při vlnové délce 280 nm. Měření probíhalo za využití isokratické eluce. Mobilní fáze se skládala z ultračisté vody a acetonitrilu. Kolony byly hodnoceny z hlediska účinnosti, symetrie píků, rozlišení a zpětného tlaku, který vznikal na kolonách. Účinnost kolon byla vyjádřená v počtu teoretických pater a znázorněním van Deemterovy křivky. Dále byl sledován vliv rostoucí teploty a průtoků na separaci...
|
|
|
Monolitní stacionární fáze pro HPLC stanovení biologicky aktivních látek I.
Krčmová, Lenka ; Solich, Petr (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
VÝVOJ A VALIDACE HPLC METODY PRO STANOVENÍ ESTERŮ RETINOLU V LIDSKÉM SÉRU S VYUŽITÍM MONOLITICKÉ KOLONY Retinol absorpční test je využíván pro monitorování absorpce ve střevě a součastně slouží jako citlivý indikátor poškození střevní sliznice. V této práci byla vyvinuta jednoduchá, rychlá HPLC metoda pro stanovení retinolu, alfa-tokoferolu, retinyl palmitátu a retinyl stearátu v krevním séru. Tato metoda je využívána pro monitorování poškození střevní sliznice cytotoxickými léčivy po retinol absorpčním testu u pacientů s onkologickým onemocněním. Pro vývoj metodiky byla použita HPLC sestava 200LC Perkin Elmer (Norwalk, USA) s detektorem diodového pole. Analyty byly separovány na monolitní stacionární fázi Chromolith Performance RP-18e, 100 x 4.6 mm (Merck, Darmstadt, Německo). Látky byly sepoarovány pomocí gradientové eluce s následujícími parametry: Průtok: 3 ml min-1 Mobilní fáze 1 methanol:voda (95:5) v 0-2.1 minutě Mobilní fáze 2 methanol:2-propanol (60:40) v 2.1-4.9 minutě. Celkový čas analýzy: 6 minut Nátřik: 20 μl Teplota: 25žC Retinol byl detekován při 325nm, α-tokoferol při 295nm a estery retinolu při 330nm. Metoda byla kompletně validována.
|
host ::
RSS.