|
|
Microbial characterization of yoghurts and probiotic foods.
Kocourková, Hana ; Burdychová, Radka (referee) ; Španová, Alena (advisor)
Zvýšená konzumace fermentovaných mléčných výrobků v posledních letech vede k zavádění nových výrobků na trh. Funkční a probiotické produkty jsou v dnešní době také hojně rozšířeny. Cílem diplomové práce bylo posoudit mikrobiální kvalitu komerčních jogurtů a nefarmakologických probiotických výrobků. Bylo zkoumáno 24 vzorků jogurtů a 8 vzorků probiotických mléčných výrobků. Pozornornost byla zaměřena zvláště na kvantifikaci mikroorganismů v jednotlivých výrobcích a na sledování viability buněk. Většina mléčných produktů obsahovala počty odpovídající minimální požadované hodnotě 1x107cfu/ml. Nicméně byly objeveny produkty, které neobsahovaly živé bakterie nebo obsahovaly jen jejich menší množství. To platí zejména pro běžné jogurty. Probiotické mléčné výrobky v zásadě obsahovaly větší množství bakterií než jogurty, protože je u nich navíc požadováno 1x106cfu/ml minimálního množství specifických bakterií jiných než jogurtových startovacích kultur. Isoláty z fermentovaných mléčných výrobků byly identifikovány jako Streptococcus thermophilus and Lactobacillus spp. Isoláty byly poté rozlišeny na jednotlivé kmeny pomocí RAPD použitím tří různých primerů. Byla zjištěna velká různorodost mezi kmeny rodu Lactobacillus spp. používaných různými podniky.
|
|
|
Probiotics in food products
Silná, Renata ; Trachtová, Štěpánka (referee) ; Španová, Alena (advisor)
Probiotics are living microorganisms with a positive effect on the consumer when they are added to food in adequate amount. The best known probiotic are lactic acid bacteria and yeast Saccaromyces cerevisiae var. boulardii. The theoretical part of the thesis is focused on using probiotics microorganisms in food. In the experimental part of the thesis were prepared crude lysates from three food products and the presence of bacterial DNA was proved by PCR method.
|
|
|
Fermentation of different cereals by the probiotic bacteria Lactobacillus plantarum 299v
Hamalová, Sabina ; Španová, Alena (referee) ; Prof.Siv Ahrne (advisor)
Počet obyvatel trpících různými infekčními, zánětlivými a alergickými nemocemi stejně jako výskyt laktózové nesnášenlivosti a vysoké hodnoty krevního cholesterolu, má narůstající tendenci. Některé z těchto zdravotních problémů jsou způsobeny nevyváženou střevní mikroflorou. Probiotika jsou pak chápána (nejen) jako potravní komponenty, které přispívají k ustanovení mikrobiální rovnováhy (Parker, 1974) mezi zdraví prospěšnými a škodlivými bakteriemi. Z tohoto důvodu, terapie založená na podávání probiotik pacientům přitáhla zájem ze strany vědců. Vhodný probiotický kmen se pak volí v závislosti na požadovaném zdravotním účinku (příp. zdravotním problému, který má být probiotickou terapií léčen). Lactobacillus plantarum 299v již prokázal své blahodárné účinky na lidech a zároveň byla i potvrzena jeho zdravotní bezpečnost, díky čemuž může tato bakterie být kategorizována jako probiotický kmen (Probi AB, Sweden). I díky tomu je Lactobacillus plantarum 299v ve značné oblibě přidáván do mnoha fukčních potravin a prodáván na trhu pod různými jmény, probiotický nápoj ProViva je jedním takovým příkladem. Cílem této práce bylo studovat fermentační proces na žitném, ječmenném a sojovém substrátu pomocí kmene Lactobacillus plantarum 299v, přičemž zvýšená pozornost byla věnována právě soji a ječmeni jako potenciálně novým substrátům pro výše uvedenou bakterii. Hlavními záměry bylo zkoumání růstu a metabolické aktivity bakterie Lactobacillus plantarum 299v v asociaci s různými cereálními substráty, a později bylo studováno totéž také ve směsi fermentované cereální komponenty s běžně dostupným ovocným džusem. K tomu, aby se dosáhlo optimálních podmínek fermentace, je třeba vzít v úvahu několik aspektů. Hlavní role při konceptování nového fermentovaného produktu patří především zpracování a taktéž kompozici surového materiálu, růstové kapacitě a produktivitě bakteriální kultury a stabilitě finálního produktu během skladování (De Vuyst, 2000). Tyto parametry jsou důležité hlavně ze strany výrobců. Krom toho jsou tu ale i zákazníci, pro něž je přijatelnost produktu založena z velké části na organoleptických vlastnostech finálního probiotického produktu, tj. aromatu a chuti. Přítomnost a dostupnost různých jednotlivých nutrientů, která byla obsažena ve fermentačním médiu výsledkem rozdílných použitých cereálních substrátů, pravděpodobně vyústila v odlišnosti metabolických drah, což pak později mohlo způsobit rozdíly v organoleptických vlastnostech finálního produktu.
|
|
|
Optimization of recombinant protein production in animal cell culture
Kyselá, Hana ; Španová, Alena (referee) ; Ševčík,, Mojmír (advisor)
V této diplomové práci je popsána přechodná transfekce buněk 293 HEK adaptovaných na růst při suspenzní kultivaci bez přítomnosti séra za použití polyethyleniminů (PEI). Buňky byly transfekovány plasmidem pcDNA5/SEAP, který exprimuje sekretovanou formu lidské placentální alkalické fosfatázy. K porovnání účinnosti jednotlivých transfekcí byla měřena koncentrace exprimované fosfatázy v buněčném supernatantu. Cílem této práce bylo optimalizovat různé faktory ovlivňující účinnost transfekcí s důrazem na nalezení optimálního poměru DNA:PEI.
|
|
|
PCR identification of selected bacteria in cheeses
Gregušová, Barbora ; Burdychová, Radka (referee) ; Španová, Alena (advisor)
This work is focused on identification and species specification of a collection of 44 clostridial strains using molecular-genetic methods. DNA of bacteria isolated from late-blowing defected cheeses was used. The purified DNA was diluted to 10 ng/µl and its ability to be amplified was verified by PCR with universal primers. By genus-specific PCR was proved that DNA of all samples belongs to Clostridium genus. Based on species-specific PCR reactions, it was determined that 7 strains belong to C. butyricum and 12 strains belong to C. tyrobutyricum. 15 strains were positively detected in both species-specific PCRs and therefore identified as mixed cultures. Another 10 strains were not classified into tested species. Strains with the gene encoding the enzyme hydrogenase hydA were searched using PCR. Specific PCR products for this gene were detected in 30 strains of the analysed collection. Especially intense were the amplicons by all strains belonging to C. butyricum species.
|
|
|
The monitoring of the lactic acid bacteria in the Moravian wines
Valicová, Markéta ; Španová, Alena (referee) ; Omelková, Jiřina (advisor)
The aim of this Master Degree Thesis was to monitor the total number of lactic acid bacteria occurring in grape must during wine production. The study was performed on the red wine grape variety Cabernet Moravia from organic vineyard and on the white wine grape variety Sauvignon from both organic and integrated vineyards. The isolation of pure cultures of lactic acid bacteria from mixed cultures and subsequently their identification by genus and species-specific PCR was also subject of the thesis. The experimental results show that the number of viable cells of lactic acid bacteria is influenced not only by the wine grape variety, whether it is a variety of red or white wine grape, but also by the way of wine growing. The method of wine growing also had an impact on the species representation of lactic acid bacteria in each variety.
|
|
|
Application of tissue culture test plates for production of recombinant protein in HEK293 cells; determination of optimal conditions
Krzyžanková, Marcela ; Španová, Alena (referee) ; Ševčík, Mojmír (advisor)
Efficient production of the recombinant proteins (r-proteins) must be based on previous testing of an expression of a small amount of the r-proteins. This work focuses on optimizing the expression of the r-proteins in 12-well plates. It includes testing of an appropriate speed of shaking, production and transfection volume. It compares all the current testing vessels (it compares a 50-ml centrifugation tube to new tested plates that can substitute the unsuitable tubes). It also compares these new tested plates to production square bottles in order to compare the r-protein expression in the plates to the r-protein expression in the bottles. It monitors effects of carbon dioxide on a number of vital cells, their viability, a relative frequency of positive cells on GFP in various cultivation vessels (plates, tubes, bottles), and pH of HEK 293 cellular cultivation during the 4-day cultivation process as well. On the basis of the results and statistical processing of the results, we have set the optimal agitation speed of 230 rpm for the 12-well plates. We have also set the appropriate production and transfection volume of 2 and 0.5 ml for the 12-well plates. In order to evaluate variables and compare cultivations in all the vessels, the tubes could be substituted by the plates. There is a statistically significant impact of carbon dioxide on the number of cells, their variability, relative frequency of cells (positive on GFP) and pH of the cellular HEK 293 cultivation in the cultivation vessels. There is the strongest r-protein expression in carbon dioxide conditions. The results of this work allow to employ the 12-well plates when we aim to test the expression of the r-proteins in a small amount and in carbon dioxide conditions. On the basis of the findings, the expression of the r-proteins in the 12-well plates and carbon dioxide conditions can substitute the expression of the r-proteins in the production bottle and in carbon dioxide free conditions.
|
|
|
Probiotics in food products for children
Vozárová, Petra ; Kvasničková, Eva (referee) ; Španová, Alena (advisor)
Despite of the high level of science and medicine, people are trying to return to the nature and use it for their lives. For example, they are using probiotics, which are live cultures able to reside in the human intestine and there can start their role. The teoretical part of this bachelor thesis deals with probiotic bacteria, their properties and those properties which are important in the food industry and the main part focuses on the probiotics used in baby food. The experimental part of the thesis targets on an analysis of two probiotic supplements for children (BioLac Baby and Probacílium+). There was a DNA isolated from these two products by method of phenol extraction and using magnetic media. The whole DNA isolated from these products was amplificated by genus-specific PCR.
|
|
|
Imunomagnetic separation of lactic acid bacteria using magnetic microparticles functionalised by antibodies
Vaňásek, Jakub ; Španová, Alena (referee) ; Trachtová, Štěpánka (advisor)
Immunomagnetic separation is based on binding of antibody with antigen, where antibody is bound to magnetic particle. In this thesis there were used particles of magnetic pearl cellulose with antiLactobacillus and antiBifidobacterium antibodies. Immunomagnetic separation method was optimalized and verified for its efficiency and specifity with bacterial and yeast cells. This cells were identified by polymerase chain reaction. Efficiency of immunomagnetic separation was verified on probiotic meat product, where Lactobacillus cells were isolated. With DNA from isolated Lactobacillus cells the high resolution melting was performed. The results show presence of several bacterial strains of Lactobacillus species.
|
|
|
Study of Probiotic Lactic Acid Bacteria Producing Antimicrobial Compounds
Turková, Kristýna ; Doležal, Petr (referee) ; Rada,, Vojtěch (referee) ; Španová, Alena (advisor)
The sixty-eight strains isolated from breastfed full-term infant feces and from another sources were identified using genus-specific polymerase chain reaction (PCR) for Lactobacillus, species-specific PCRs, multiplex PCR, pheS PCR, rep-PCR, RAPD-PCR and 16S rDNA sequencing into Lactobacillus species or group of species. Seven strains produced antimicrobial proteinaceous substances in the supernatants. Antimicrobial proteinaceous substances of three strains were tested on temperature, pH a detergent stability. All tested strains produced temperature-stable antimicrobial proteinaceous substances. Antimicrobial activity was not influenced by detergents with exception of SDS. Presence of genes for production of bacteriocins (acidocin B, gassericin A, gassericin T, gassericin K7A and gassericin K7B) were detected in DNA of fourteen strains using PCR and DNA/DNA hybridization. Selected PCR products were sequenced and analyzed using BLAST algorithm and CLUSTAL W2 programme. The sequences of specific PCR products in DNA of two strains had 100% similarity with the sequences from the database GeneBank. Selected strains of Lactobacillus acidophilus group were tested for the surveillance in gastrointestinal tract, for the production of antimicrobial substances, for the adhesion on Caco-2 cells and for the presence of genes of antibiotic resistance. DNA of strains was tested using specific primers on the presence of genes for histidine-decarboxylase, tyrosine-decyrboxylase and linoleate isomerase. The gene for histidine-decarboxylase production was detected in DNA of seven strains, for tyrosine-decarboxylase production in DNA of one strain and for linoleate isomerase in DNA of four strains. Imunomagnetic separation of the cells was optimized. Magnetic particles functionalized with streptavidin and the anti-Lactobacillus antidote was used for the separation of the cells of Lactobacillus rhamnosus LOCK 0900 from MRS medium, UHT milk and from the yogurt. The IMS-PCR was used for detection of imunomagnetic separated bacterial cells.
|
guest ::
