|
|
Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze
Lejnarová, Michaela ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Nováková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Lejnarová Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze Diplomová práce se zabývá porovnáním dvou metod vyhodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze za použití ionizace elektrosprejem a trojitého kvadrupólu. Konkrétně se jednalo o porovnání metody využívající směrnic kalibračních křivek a metody post-extrakčního přídavku, kdy hlavní cílem bylo posoudit, zda získané hodnoty matricových efektů spolu korelují, či nikoli. Případně objasnit důvody rozdílných výsledků a definovat podmínky umožňující aplikaci obou metod tak, aby byly získány správné a přesné výsledky. Na základě fyzikálně-chemických vlastností jako jsou molekulová hmotnost, acidobazické vlastnosti a rozdělovací koeficient byla vybrána skupina 28 různorodých látek. Vlastnímu hodnocení matricových efektů předcházel výběr vhodné LC metody, optimalizace jednotlivých parametrů iontového zdroje a zároveň výběr vhodného SRM přechodu a kolizní energie pro každou látku. K hodnocení matricových efektů bylo zvoleno lyofilizované sérum jako matrice a proteinová precipitace pomocí acetonitrilu jako technika přípravy vzorků. Pro obě metody vyhodnocení...
|
|
|
Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích
Čapková Maxová, Eliška ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Eliška Čapková Maxová Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích Cílem této práce byl vývoj rychlé a selektivní metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích. Pro separaci byla použita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie v systému reverzních fází s kolonou BEH C18 spojená s tandemovou hmotnostní spektrometrií (UHPLC-MS/MS). Byla zvolena gradientová eluce s mobilní fází se složkou A (0,1% vodný roztok kyseliny mravenčí) a B (acetonitril) při průtoku 0,35 ml/min a 40 žC v kolonovém prostoru. Parametry hmotnostního spektrometru byly optimalizovány a následně nastaveny: ionizace elektrosprejem v pozitivním módu; napětí na kapiláře 1,0 kV; napětí na vstupním kuželu 35 V; napětí na extraktoru 3,0 V; napětí na RF čočce 0,1 V; průtok desolvatačního plynu 1000 l/h; teplota desolvatace 450 žC; průtok plynu na vstupním kuželu 100 l/h; teplota iontového zdroje 130 žC. Pro kvantifikaci byl použit SRM mód. Jako metoda přípravy vzorků byla zvolena extrakce z kapaliny do kapaliny (LLE). Nejlepší výtěžnost (>90%) byla získána při použití dichlormetanu. Metoda byla validována v kalibračním...
|
|
|
Testování stability antivirotik pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Pavlasová, Pavlína ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Pavlína Pavlasová Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Testování stability antivirotik pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Diplomová práce se zabývá stanovením stability pěti antivirotik (ledipasvir, sofosbuvir, tenofovir, monoester a diester tenofoviru) při různých teplotních podmínkách. Byla využita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie s detektorem fotodiodového pole detekcí při 259 nm. Zkoumaná antivirotika jsou nové léčivé přípravky využívané k léčbě při závažných onemocnění jako je AIDS a hepatitida typu C. Byly testovány dva typy stabilit: krátkodobá a dlouhodobá. Krátkodobá stabilita látek byla testována v acetonitrilu a methanolu při 4 řC a 22 řC po dobu 24 hodin. Dlouhodobá stabilita sofosbuviru, monoesteru a diesteru tenofoviru v 50 % acetonitrilu, ledipasviru ve 100 % acetonitrilu a tenofoviru ve vodě byla stanovována při uchovávání látek ve třech teplotních prostředích: - 20 řC, 4 řC a 22 řC, po dobu 28 dnů. Dále byly látky testovány ve fosfátovém pufru po 90 dnů při skladování - 20 řC. Z výsledků testování je možné určit podmínky pro skladování a dobu, po kterou je ještě léčivá látka stabilní. Chromatografické podmínky stabilit byly...
|
|
| |
|
|
Vliv jednotlivých módů TOF analyzátoru na linearitu a citlivost UHPLC-HRMS metody
Halad, Jakub ; Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Khalikova, Maria (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Jakub Halad Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Vliv jednotlivých módů TOF analyzátoru na linearitu a citlivost UHPLC-HRMS metody Tato diplomová práce se zabývá porovnáním čtyř módů (senzitivní mód, rozlišovací mód, mód s vysokým rozlišením a rozšířeným rozlišením) hybridního analyzátoru Q-TOF ve spojení s UHPLC systémem. Pro danou studii bylo zvoleno celkem 10 analytů. Jednalo se o 5 statinů a jejich interkonverzní produkty. UHPLC metoda byla převzata z dříve vyvinuté multistatinové metody, nicméně podmínky iontového zdroje byly znovu optimalizovány. Vyvinutá metoda byla použita pro měření standardní a matricové kalibrační křivky ve čtyřech rozlišovacích módech analyzátoru (senzitivní a rozlišovací mód, mód s vysokým rozlišením a rozšířeným rozlišením). Obohacené lyofilizované sérum upravené pomocí proteinové precipitace bylo použito pro matricovou kalibrační křivku. Na závěr byly jednotlivé módy porovnány na základě linearity a citlivosti. Vliv jednotlivých rozlišovacích módů na korelační koeficient nebyl pozorován. Naopak použití jednotlivých rozlišovacích módů mělo vliv na citlivost metody. V pozitivním módu bylo dosaženo nižších hodnot LOQ u standardní kalibrační křivky...
|
|
|
Vývoj Stage tips-UHPLC-MS/MS metody pro stanovení statinů v lidském séru
Otoupal, Lukáš ; Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Šatínský, Dalibor (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Lukáš Otoupal Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj Stage tips-UHPLC-MS/MS metody pro stanovení statinů v lidském séru. Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody pro stanovení klinicky významných statinů v lidském séru. Pro extrakci statinů byla zvolena a optimalizována extrakce s využití Stage tips pipetovacích špiček. Statiny byly proměřeny na ultra- vysokoúčinné kapalinové chromatografii ve spojení s tandemovým hmotnostním spektrometrem typu trojitého kvadrupólu. Byl optimalizován nejen postup extrakce, ale také základní parametry hmotnostního spektrometru. Chromatografická separace byla převzata z dříve publikované práce. Optimalizace parametrů hmotnostního spektrometru byla započata výběrem prekurzorových iontů, následně optimalizací jednotlivých parametrů iontového zdroje a v konečné fázi volbou vhodného ionizačního módu, SRM přechodu a kolizní energie pro každý analyt. Pro ověření vhodnosti LC-MS metody byla změřena opakovatelnost metody (RSD ≤ 1 pro retenční čas a RSD ≤ 10 pro plochu píku), linearita (korelační koeficient ≥ 0,997) a citlivost (LOQ v rozsahu 5 x 10-10 - 1 x 10-9 g/ml). Při vývoji Stage tips metody byla provedena nejprve optimalizace na směsném...
|
|
|
Optimalization and validation of SPE method for determination of quercetin and its 9 metabolites in biological material
Chrenková, Lucia ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytickej chémie Kandidát: Lucia Chrenková Školiteľka: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Názov diplomovej práce: Optimalizácia a validácia SPE metódy pre stanovanie kvercetinu a jeho 9 metabolitov v biologickej vzorke. Hlavným cieľom tejto diplomovej práce bol vývoj a validácia novej SPE metódy pre stanovenie kvercetinu a jeho 9 metabolitov: floroglucinolu (PG); kyseliny homovanilínovej (HVA); kyseliny 3,4-dihydroxyfenyloctovej (PAA); kyseliny 3-(3- hydroxyfenyl)propionovej (HFP); kyseliny 3-hydroxyfenyloctovej (HFA); kvercetin-3- glukuronidu (Q3Gl); rutinu (RUT); tamarixetinu (TMX) a isorhamnetinu (IRN) v biologickej vzorke. Ako stacionárna fáza pre SPE bola zvolená viacmodálna kolónka MAX. Ako optimálne elučné činidlo bola určená zmes metanolu a vodného roztoku 0,5% kyseliny trifluóroctovej (95/5). Ako premývacie činidlo v prvom kroku bol vybraný pufer - 0,01M mravenčanom amónnym o pH 5,0 a v druhom kroku roztok 1% metanolu riedeným do tohto pufru. Na stanovenie kvercetinu a jeho 9 metabolitov bola využívaná ultra-vysokoúčinná kvapalinová chromatografia s tandemovou hmotnostnou detekciou. Na základe najlepšej selektivity pre kritický pár izomérov (tamarixetin a isorhamnetin) bola ako stacionárna fáza využitá kolóna BEH...
|
|
|
Studium HILIC separačního mechanismu a vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů
Lepáček, Michal ; Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra Analytické chemie Kandidát: Michal Lepáček Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Studium HILIC separačního mechanismu a vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů. Tato diplomová práce se zabývá studiem retence, selektivity a HILIC mechanismů v závislosti na složení mobilní fáze. Pro studii byla zvolena kolona Zorbax HILIC plus (2,1 x 100 mm, 3,5 μm, Aligent Technologies), jedna ze základních druhů HILIC stacionárních fází. Byl testován vliv koncentrace acetonitrilu, pH (3,8, 4,8 a 6,8) a koncentrace pufru (0,5 - 200 mM) na retenci vybraných analytů. Na základě fyzikálně-chemických vlastností (log P a pKa) bylo zvoleno celkem 35 analytů, které zahrnovaly bazické, kyselé a neutrální látky. Byla použita isokratická eluce s průtokem 0,7 ml/min a objem nástřiku 2 μl. Detekce analytů byla provedena pomocí PDA detektoru při vlnové délce 254 nm. Pro snadnější hodnocení byly z naměřených hodnot sestrojeny grafy a tabulky. Vliv procentuálního zastoupení acetonitrilu v mobilní fázi byl hodnocen na základě grafické závislosti k' = f (% ACN), ze které byla patrná zvyšující se retence se zvyšujícím procentuálním zastoupením ACN pro všechny testované analyty. Dále byl pozorován značný vliv pH a...
|
|
|
Využití alternativních mobilních fází pro metodu Hydrofilní interakční chromatografie
Münsterová, Barbora ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Barbora Münsterová Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití alternativních mobilních fází pro metodu Hydrofilní interakční chromatografie Tato diplomová práce se zabývala možnostmi využití 1,3-dioxolanu jako alternativní organické složky mobilní fáze v hydrofilní interakční chromatografii. Byly porovnávány změny v selektivitě a účinnosti separace při použití dioxolanu a acetonitrilu jako organických složek mobilní fáze. Jako vodná složka pro klasickou HILIC byl použit 0,5 % roztok kyseliny octové nebo 50 mM octan amonný pH 3,8, pH 6,8 a pH 9,8. Pro nevodnou HILIC bylo testováno složení mobilní fáze acetonitril- dioxolan, accetonitril-dioxolanový roztok 0,5 % kyseliny octové a acetonitril-dioxolan modifikovaný vodným roztokem 50 mM octanu amonného pH 6,8. Pro měření na koloně ACQUITY UPLC BEH Amide (1,7 µm, 2,1 mm x 100 mm, Waters) bylo využito 5 různých skupin látek, a to fenolických kyselin, purinových a pyrimidinových bází, derivátů pyridinu, vitaminů rozpustných ve vodě a skupiny betablokátorů. Byla hodnocena retence, selektivita a rychlost separace. Měření probíhalo na přístroji ACQUITY Ultra Performance LC za detekce pomocí PDA detektoru při vlnové délce...
|
|
|
Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích
Štětková, Kateřina ; Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Štětková Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph. D. Název diplomové práce: Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích Tato diplomová práce se zabývá vlivem koncentrace ACN, pH a koncentrace pufru v mobilní fázi na retenci a selektivitu kolon Atlantis HILIC Silica (3 μm, 2,1 mm x 100 mm) a Luna NH2 (3 μm, 2,0 mm x 100 mm). Ke studii bylo vybráno celkem 35 analytů, které zahrnují látky neutrální, bazické a kyselé. Detekce byla provedena pomocí PDA detektoru při vlnové délce 245 nm. Všechna měření probíhala za podmínek izokratické eluce při průtoku 0,4 ml.min-1 s využitím směsi acetonitril/voda (pufr) jako mobilní fáze. Teplota na koloně byla nastavena na 30 řC, teplota autosampleru na 4 řC a použitý nastřikovaný objem byl 2 μl. Pro vyhodnocení výsledků byly z naměřených hodnot sestrojeny grafy a tabulky, které sloužily k hodnocení kolon z hlediska selektivity a retence jednotlivých skupin analytů. Kolona Atlantis HILIC Silica vykazovala chování typické pro HILIC chromatografii, tj. retence stoupala se zvyšující se koncentrací ACN v mobilní fázi a to především od >85% ACN. Kolona Luna NH2 kromě HILIC chování navíc vykazovala silnou retenci...
|
host ::
RSS.