|
|
Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů
Hlaváčová, Veronika ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Hlaváčová Školitel: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů Cílem této práce bylo vyvinout analytickou metodu pro analýzu hlavních obsahových látek doplňku stravy, ve kterém jsou zastoupeny následující rostlinné extrakty: semeno pískavice řecké seno, kořen rozchodnice růžové, kořen všehoje ženšenového a list pantaly rozkladité. K analýze byla využita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií s vysokým rozlišením (UHPLC-HRMS). Dalším cílem bylo určit, zda v doplňku stravy není přítomen nedeklarovaný testosteron. Měření probíhalo na přístroji ACQUITY UPLC I-Class System. K hmotnostní detekci byl využit kvadrupól ve spojení s analyzátorem doby letu SYNAPT G2-Si. Byla sbírána kontinuální data. Ke sběru dat byla využita metoda datově nezávislého skenu (DIA). Po vytvoření knihovny MS spekter očekávaných látek byly jako majoritní látky identifikovány ginsenosidy. V prvním kroku byla optimalizována příprava vzorků doplňku stravy. Jako rozpouštědlo byla testována voda, acetonitril, methanol, ethanol a ethylacetát. V dalším kroku byla provedena optimalizace...
|
|
|
Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů
Hlaváčová, Veronika ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Veronika Hlaváčová Školitel: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Využití UHPLC-HRMS pro hodnocení doplňků stravy s obsahem ginsenosidů Cílem této práce bylo vyvinout analytickou metodu pro analýzu hlavních obsahových látek doplňku stravy, ve kterém jsou zastoupeny následující rostlinné extrakty: semeno pískavice řecké seno, kořen rozchodnice růžové, kořen všehoje ženšenového a list pantaly rozkladité. K analýze byla využita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií s vysokým rozlišením (UHPLC-HRMS). Dalším cílem bylo určit, zda v doplňku stravy není přítomen nedeklarovaný testosteron. Měření probíhalo na přístroji ACQUITY UPLC I-Class System. K hmotnostní detekci byl využit kvadrupól ve spojení s analyzátorem doby letu SYNAPT G2-Si. Byla sbírána kontinuální data. Ke sběru dat byla využita metoda datově nezávislého skenu (DIA). Po vytvoření knihovny MS spekter očekávaných látek byly jako majoritní látky identifikovány ginsenosidy. V prvním kroku byla optimalizována příprava vzorků doplňku stravy. Jako rozpouštědlo byla testována voda, acetonitril, methanol, ethanol a ethylacetát. V dalším kroku byla provedena optimalizace...
|
|
|
Vývoj metody úpravy vzorku pro stanovení vybraných ochratoxinů v moči pomocí UHPLC-MS/MS
Šejvlová, Barbora ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Bc. Barbora Šejvlová Školitel: Vývoj metody úpravy vzorku pro stanovení vybraných ochratoxinů v moči Cílem práce bylo vyvinout metodu pro stanovení ochratoxinů A, B, C a moči s co nejnižším a následně provést validaci této metody, která by byla aplikovatelná vysokoúčinné kapalinové ci přípravy vzorku b fázi pomocí pipetovacích špiček PT), metoda ředění (DAS), extrakce z nosiči (SLE) a jako poslední extrakce Byla hodnocena výtěžnost metody, interference matrice a také limit kvantifikace dané Následně byla provedena validace na koloně ACQUITY UPLC BEH C18 1,7 μm, 2,1 x rozmezí od 68 do 122 % pro všechny analyty a přesnost metody u všech analytů měla RSD menší než 20 %. Byl stanoven LLOQ, pro OTA byl stanoven 0,01 ng/ml, pro OTB a 0,05 ng/ml. ULOQ byl pro všechny analy testování matricových efektů, kdy podmínky byly splněny pouze pro OTA na obou koncentračních hladinách 5 a 20 ng/ml a OTB pouze u 5 ng/ml. Pro řádech stove Klíčová slova: ochratoxiny, moč, příprava vzorku k
|
|
|
Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze
Lejnarová, Michaela ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Nováková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Lejnarová Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze Diplomová práce se zabývá porovnáním dvou metod vyhodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze za použití ionizace elektrosprejem a trojitého kvadrupólu. Konkrétně se jednalo o porovnání metody využívající směrnic kalibračních křivek a metody post-extrakčního přídavku, kdy hlavní cílem bylo posoudit, zda získané hodnoty matricových efektů spolu korelují, či nikoli. Případně objasnit důvody rozdílných výsledků a definovat podmínky umožňující aplikaci obou metod tak, aby byly získány správné a přesné výsledky. Na základě fyzikálně-chemických vlastností jako jsou molekulová hmotnost, acidobazické vlastnosti a rozdělovací koeficient byla vybrána skupina 28 různorodých látek. Vlastnímu hodnocení matricových efektů předcházel výběr vhodné LC metody, optimalizace jednotlivých parametrů iontového zdroje a zároveň výběr vhodného SRM přechodu a kolizní energie pro každou látku. K hodnocení matricových efektů bylo zvoleno lyofilizované sérum jako matrice a proteinová precipitace pomocí acetonitrilu jako technika přípravy vzorků. Pro obě metody vyhodnocení...
|
|
|
Vývoj UHPLC-MS/MS metody a postupu přípravy vzorků pro stanovení steroidních látek v potkaní plasmě
Hromádko, Jiří ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Jiří Hromádko Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj UHPLC-MS/MS metody a postupu přípravy vzorků pro stanovení steroidních látek v potkaní plasmě Diplomová práce se zabývá vývojem UHPLC-MS/MS metody pro analýzu 37 steroidních látek v potkaní plazmě a optimalizací úpravy vzorku pomocí PP. Analyzované látky zahrnují jak strukturně velmi podobné látky lišící se počtem hydroxylových či ketonických funkčních skupin, tak izomerní a vzájemně izobarické sloučeniny. Protože tyto látky velmi snadno odštěpují molekulu vody, v MS spektru mohou být patrné prekurzorové ionty se stejnou m/z pro různé látky. Z těchto důvodů byla zcela zásadní pečlivá a podrobná charakterizace prekurzorů, následné provedení skenu produktových iontů a výběr vhodných SRM přechodů. Důležitá byla také separace kritických sloučenin se stejnou m/z pro prekurzorové ionty. V první fázi optimalizace byl proveden screening 7 kolon. Bylo využito gradientové eluce mobilní fáze ACN/0,1 % FA v rozsahu 5 - 98 % ACN. Na základě výsledků byla provedena podrobná optimalizace gradientu mobilní fáze. Jako optimální byla vybrána kolona Cortecs C18, kde většina analytů eluovala v gradientu 35 - 60 % ACN. Délka analýzy byla 18...
|
|
|
Studie podmínek separace a stability vybraných fenolických látek
Jandorová, Zuzana ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Zuzana Jandorová Školitel: prof. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Studie podmínek separace a stability vybraných fenolických látek Cílem této diplomové práce bylo zjištění nejvhodnějších podmínek separace pro analýzu deseti fenolických látek pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie s PDA detekcí. Práce je zaměřena zejména na separaci kritického páru isorhamnetin a tamarixetin. Dalším cílem bylo zjištění krátkodobé stability všech testovaných látek po dobu 24 hodin. Analýzy probíhaly s využitím chromatografického systému ACQUITY UPLC systém s PDA detektorem při vlnové délce 275 nm. Prvním krokem studie separačních podmínek byl screening 17 kolon od několika různých výrobců. Byly testovány kolony: ACE Excel C18, BEH C18, CSH C18, Arion Plus C18, Ascentis Express C18, Atlantis Premier BEH C18 AX, BEH Shield RP18, Cortecs Shield RP18, Ascentis Express RP-Amide, BEH Phenyl, CSH Phenyl-Hexyl, Kinetex Biphenyl, ACE Excel C18-AR, ACE Excel C18-PFP, CSH Fluoro-Phenyl, Ascentis Express F5 a Kinetex PFP. Během screeningu byly testovány 3 organické modifikátory (acetonitril, methanol a acetonitril s methanolem 1:1) v kombinaci se 2 vodnými složkami (0,1% kyselina mravenčí a 0,1%...
|
|
|
Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích
Štětková, Kateřina ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholoušová Havlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Kateřina Štětková Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph. D. Název diplomové práce: Studium vlivu složení mobilní fáze na selektivitu a retenci analytů na HILIC stacionárních fázích Tato diplomová práce se zabývá vlivem koncentrace ACN, pH a koncentrace pufru v mobilní fázi na retenci a selektivitu kolon Atlantis HILIC Silica (3 μm, 2,1 mm x 100 mm) a Luna NH2 (3 μm, 2,0 mm x 100 mm). Ke studii bylo vybráno celkem 35 analytů, které zahrnují látky neutrální, bazické a kyselé. Detekce byla provedena pomocí PDA detektoru při vlnové délce 245 nm. Všechna měření probíhala za podmínek izokratické eluce při průtoku 0,4 ml.min-1 s využitím směsi acetonitril/voda (pufr) jako mobilní fáze. Teplota na koloně byla nastavena na 30 řC, teplota autosampleru na 4 řC a použitý nastřikovaný objem byl 2 μl. Pro vyhodnocení výsledků byly z naměřených hodnot sestrojeny grafy a tabulky, které sloužily k hodnocení kolon z hlediska selektivity a retence jednotlivých skupin analytů. Kolona Atlantis HILIC Silica vykazovala chování typické pro HILIC chromatografii, tj. retence stoupala se zvyšující se koncentrací ACN v mobilní fázi a to především od >85% ACN. Kolona Luna NH2 kromě HILIC chování navíc vykazovala silnou retenci...
|
|
|
Vývoj UHPLC-MS/MS metody a postupu přípravy vzorků pro stanovení steroidních látek v potkaní plasmě
Hromádko, Jiří ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Chocholouš, Petr (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Jiří Hromádko Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj UHPLC-MS/MS metody a postupu přípravy vzorků pro stanovení steroidních látek v potkaní plasmě Diplomová práce se zabývá vývojem UHPLC-MS/MS metody pro analýzu 37 steroidních látek v potkaní plazmě a optimalizací úpravy vzorku pomocí PP. Analyzované látky zahrnují jak strukturně velmi podobné látky lišící se počtem hydroxylových či ketonických funkčních skupin, tak izomerní a vzájemně izobarické sloučeniny. Protože tyto látky velmi snadno odštěpují molekulu vody, v MS spektru mohou být patrné prekurzorové ionty se stejnou m/z pro různé látky. Z těchto důvodů byla zcela zásadní pečlivá a podrobná charakterizace prekurzorů, následné provedení skenu produktových iontů a výběr vhodných SRM přechodů. Důležitá byla také separace kritických sloučenin se stejnou m/z pro prekurzorové ionty. V první fázi optimalizace byl proveden screening 7 kolon. Bylo využito gradientové eluce mobilní fáze ACN/0,1 % FA v rozsahu 5 - 98 % ACN. Na základě výsledků byla provedena podrobná optimalizace gradientu mobilní fáze. Jako optimální byla vybrána kolona Cortecs C18, kde většina analytů eluovala v gradientu 35 - 60 % ACN. Délka analýzy byla 18...
|
|
|
Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích
Čapková Maxová, Eliška ; Nováková, Lucie (vedoucí práce) ; Kočová Vlčková, Hana (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Eliška Čapková Maxová Školitel: doc. PharmDr. Lucie Nováková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj a validace UHPLC-MS/MS metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích Cílem této práce byl vývoj rychlé a selektivní metody pro stanovení maraviroku v placentárních perfúzích. Pro separaci byla použita ultra-vysokoúčinná kapalinová chromatografie v systému reverzních fází s kolonou BEH C18 spojená s tandemovou hmotnostní spektrometrií (UHPLC-MS/MS). Byla zvolena gradientová eluce s mobilní fází se složkou A (0,1% vodný roztok kyseliny mravenčí) a B (acetonitril) při průtoku 0,35 ml/min a 40 žC v kolonovém prostoru. Parametry hmotnostního spektrometru byly optimalizovány a následně nastaveny: ionizace elektrosprejem v pozitivním módu; napětí na kapiláře 1,0 kV; napětí na vstupním kuželu 35 V; napětí na extraktoru 3,0 V; napětí na RF čočce 0,1 V; průtok desolvatačního plynu 1000 l/h; teplota desolvatace 450 žC; průtok plynu na vstupním kuželu 100 l/h; teplota iontového zdroje 130 žC. Pro kvantifikaci byl použit SRM mód. Jako metoda přípravy vzorků byla zvolena extrakce z kapaliny do kapaliny (LLE). Nejlepší výtěžnost (>90%) byla získána při použití dichlormetanu. Metoda byla validována v kalibračním...
|
|
|
Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze
Lejnarová, Michaela ; Kočová Vlčková, Hana (vedoucí práce) ; Nováková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Michaela Lejnarová Školitel: RNDr. Hana Kočová Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Porovnání dvou způsobů hodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze Diplomová práce se zabývá porovnáním dvou metod vyhodnocení matricových efektů při LC-MS/MS analýze za použití ionizace elektrosprejem a trojitého kvadrupólu. Konkrétně se jednalo o porovnání metody využívající směrnic kalibračních křivek a metody post-extrakčního přídavku, kdy hlavní cílem bylo posoudit, zda získané hodnoty matricových efektů spolu korelují, či nikoli. Případně objasnit důvody rozdílných výsledků a definovat podmínky umožňující aplikaci obou metod tak, aby byly získány správné a přesné výsledky. Na základě fyzikálně-chemických vlastností jako jsou molekulová hmotnost, acidobazické vlastnosti a rozdělovací koeficient byla vybrána skupina 28 různorodých látek. Vlastnímu hodnocení matricových efektů předcházel výběr vhodné LC metody, optimalizace jednotlivých parametrů iontového zdroje a zároveň výběr vhodného SRM přechodu a kolizní energie pro každou látku. K hodnocení matricových efektů bylo zvoleno lyofilizované sérum jako matrice a proteinová precipitace pomocí acetonitrilu jako technika přípravy vzorků. Pro obě metody vyhodnocení...
|
host ::
RSS.