|
|
Optimalizace izolace močových exozomů pro proteomické vyšetření moči v diagnostice onemocnění ledvin
Ulrychová, Lucie ; Přikryl, Petr (vedoucí práce) ; Kučerová, Zdenka (oponent)
Extracelulární vezikuly (exozomy) jsou předmětem současného nefrologického proteomického výzkumu, neboť se považují za možný zdroj potenciální biomarkerů onemocnění ledvin. Tato práce se zabývá hledáním nejvhodnějšího postupu izolace exozomů z moči. Byly porovnány již popsané metody založené na odlišných fyzikálně-chemických principech izolace: hydrostatická filtrační dialýza (HFD), diferenciální ultracentrifugace, ultrafiltrace přes 100 kDa filtr, nebo srážení vzorku komerční sadou Total Exosome Isolation (from urine). Charakterizace jednotlivých izolovaných exozomálních frakcí byla provedena pomocí metod SDS-PAGE (zhodnocení přítomnosti kontaminujících proteinů), western blot analýzy (detekce exozomálních markerů TSG101, alix), analýzy trajektorie pohybu nanočástic (NTA, velikost a koncentrace vezikul), nebo transmisní elektronové mikroskopie (TEM, morfologie vezikul). Kvůli přítomnosti kontaminujících proteinů ve vzorcích moči, které by mohly zkreslovat výsledky následných proteomických analýz, byly optimalizovány podmínky štěpení nežádoucích proteinů proteinázou K před vlastními izolacemi. Bylo zjištěno, že největší výtěžnost a čistotu izolovaných exozomálních frakcí poskytuje postup kombinující HFD s diferenciální ultracentrifugací po předchozí inkubaci s optimálním množstvím proteinázy K.
|
|
|
Peptidové inhibitory imobilizované na magnetické nosiče a Sepharosu aplikované na separaci žaludečních aspartátových proteinas
Rajčanová, Michaela ; Kučerová, Zdenka (vedoucí práce) ; Fusek, Martin (oponent) ; Pacáková, Věra (oponent)
v češtině Lidská žaludeční šťáva obsahuje hlavně aspartátové proteinasy: pepsin A a pepsin C. Oba pepsiny jsou produkovány v žaludeční sliznici jako inaktivní pepsinogeny a k jejich aktivaci na příslušné pepsiny dochází v kyselém prostředí žaludku. Hladiny pepsinogenů v krevním séru odrážejí morfologický a funkční stav žaludeční sliznice. Téma dizertační práce je součástí projektu zabývajícího se zejména vypracováním metody pro separaci žaludečních aspartátových proteinas, která by byla vhodná pro diagnostické účely. Konkrétním předmětem předkládané práce byla příprava nových typů ligandů, která by umožňovala po imobilizaci separaci aspartátových proteinas. Pro studium vazebných vlastností pepsinů byly syntetizovány čtyři heptapeptidy obsahující D-leucinylový zbytek (Val-D-Leu-Pro-Phe-Phe-Val-D-Leu, Val-D-Leu-Pro-Tyr-Phe-Val-D-Leu, Val-D-Leu-Pro-Tyr- Tyr-Val-D-Leu a Val-D-Leu-Pro-Phe-Tyr-Val-D-Leu). Připravené heptapeptidy imobilizované na agarosové magnetické částice byly použity pro studium jejich interakcí s prasečím pepsinem A a potkaním pepsinem C. Zatímco prasečí pepsin A byl adsorbován na všechny heptapeptidy imobilizované na magnetické částice, potkaní pepsin C se na imobilizované heptapeptidy neadsorboval. Obdobné výsledky byly získány při afinitní chromatografii na heptapeptidech...
|
|
| |
|
|
Pojetí individua ve vztahu k Bohu u Kierkegaarda a Nietzscheho
Kučerová, Zuzana ; Blažková, Miloslava (vedoucí práce) ; Hauser, Michael (oponent)
Práce se zabývá fillosofií Sørena Kierkegaarda a Friedricha Nietzscheho. Soustřeďuje se na problém jejich vztahu k Bohu a náboženství. Cílem práce je dokázat v čem se tito myslitelé shodují a liší ve vztahu k Bohu, křeťanství a proměně hodnot individua. První kapitola je zaměřená na opodstatnění tvorby Nietzscheho a Kierkegaarda. Druhá kapitola kompraruje společné a rozdílné hodnoty. Práce srovnává panskou a otrockou morálku v pojetí Friedricha Nietzscheho a morálku postavenou na autentické víře u Sørena Kierkegaarda.
|
|
|
Proměny hodnot individua Friedrich Wilhelm Nietzsche a Søren Aabye Kierkegaard.
Kučerová, Zuzana ; Blažková, Miloslava (vedoucí práce) ; Hauser, Michael (oponent)
Cílem práce, je ukázat, že se mohou hodnoty proměňovat v evropském a tradičním kontextu. Vybrala jsem dva filosofy F.Nietzscheho a S.Kierkegaarda na kterých mohu tuto proměnu zdokumentovat. Právě oni dva se ukázali velice důležití pro 20.století. V hlavní části práce, jsem postihla vývoj axiologických názorů obou myslitelů a vzájemně ho porovnala. Má studie existencialistických filosofů postihuje pojmy, jako je například svoboda, smysl života, podstata křesťanství, vnímaní člověka. Nietzsche a Kierkegaard jsou filozofové, kteří mají mnoho společného, avšak málokdy by se sebou souhlasili. To co je pojí, jsou stejná témata, ke kterým oba zaujímají rozdílné postoje. Objevují se u nich pojmy existence, nicota síla víry. Kierkegaard se zabývá důkladně existencialismem, skokem do absurdity, zoufalstvím. U Nietzscheho najdeme vůli k moci, nihilistické názory a kritiku křesťanství.
|
|
|
Charakterizace enzymového reaktoru s imobilizovanou alkalickou fosfatázou
Plecitá, Denisa ; Kučerová, Zdenka (vedoucí práce) ; Miarková, Eva (oponent)
Fosforylace patří mezi jednu z nejdůležitějších post-translačních modifikací proteinů. Studium procesu fosforylace a defosforylace je velice důležité, neboť abnormální fosforylace proteinů souvisí s řadou vážných onemocnění lidí. Jedním z metod identifikace míst fosforylace proteinů je porovnání hmotnostních spekter vzorku před a po defosforylaci fosfatázou. Využití imobilizovaných forem fosfatáz má oproti volným formám řadu výhod, např. možnost opakovaného použití a zvýšení stability enzymu po imobilizaci. Cílem této bakalářské práce bylo charakterizovat vlastnosti enzymového reaktoru - imobilizované hovězí alkalické fosfatázy ze sliznice střeva. Alkalická fosfatáza byla imobilizována přes své volné aminoskupiny na magnetické částice obalené celulózou aktivovanou divinylsulfonem. Při stanovení aktivity byl používán jako substrát p- nitrofenylfosfát. Byl porovnán vliv pH a koncentrace Mg2+ iontů na aktivitu volné a imobilizované alkalické fosfatázy. Dále byla sledována skladovací a teplotní stabilita obou forem enzymu a možnost opakovaného využití imobilizované fosfatázy. Klíčová slova: enzymový reaktor vlastnosti alkalické fosfatázy magnetické částice imobilizace enzymů defosforylace
|
|
|
Nové typy magnetických sorbentů pro analýzu fosfoproteinů
Emmerová, Tereza ; Ryšlavá, Helena (oponent) ; Kučerová, Zdenka (vedoucí práce)
Byla vypracována metoda pro studium fosforylačních míst fosfoproteinů. Tato metoda je založena na separaci fosfopeptidů po proteolytickém štěpení fosfoproteinů na nových IMAC magnetických sorbentech s imobilizovanými kovovými ionty a jejich následné identifikaci hmotnostní spektrometrií (MS). Neporézní hydrofilní poly(2- hydroxyethyl metakrylát-co-glycidyl metakrylátové) magnetické částice připravené disperzní kopolymerací a modifikované iminodioctovou kyselinou obsahující imobilizované Fe(III) nebo Ga(III) ionty byly použity k separaci fosfopeptidů z proteolytických směsí peptidů modelových fosfoproteinů: α-kaseinu a prasečího pepsinu A. Optimalizací adsorpčních a elučních podmínek se nám na připravených magnetických sorbentech podařilo selektivně separovat fosfopeptidy z proteolyticky rozštěpeného modelového fosfoproteinu, který obsahoval velké množství kyselých peptidů (prasečí pepsin A). Získané výsledky prokázaly, že připravené magnetické sorbenty jsou vhodné k separaci fosfopeptidů s jednou fosfátovou skupinou i vícenásobně fosforylovaných peptidů. Fosfopeptidy separované z proteolytických směsí peptidů modelových proteinů byly analyzovány MS na principu MALDI-TOF (matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight). Pro imunochemickou separaci fosfoproteinů byla připravena...
|
|
| |
|
|
Separace žaludečních aspartátových proteas pomocí afinitní chromatografie
Frýdlová, Jana ; Kučerová, Zdenka (vedoucí práce) ; Barthová, Jana (oponent) ; Jonáková, Věra (oponent)
Lidská žaludeční šťáva obsahuje zejména aspartátové proteasy - pepsin A a pepsin C. Oba pepsiny jsou produkovány v žaludeční sliznici jako inaktivní pepsinogeny (pepsinogen A a pepsinogen C), které se liší svými fyzikálněchemickými a imunologickými vlastnostmi. Oba pepsinogeny obsahují několik izozymogenů. K aktivaci pepsinogenů na příslušné pepsiny dochází v kyselém prostředí žaludku. (...) Téma dizertační práce je součástí projektu zabývajícího se zejména vypracováním metody pro separaci žaludečních aspartátových proteas, která by byla vhodná pro sledování jejich změn během zmíněných onemocnění. Dizertační práce se konkrétně zabývala přípravou vhodných afinitních sorbentů pro separaci pepsinů a pepsinogenů. Při výběru vhodného afinitního ligandu pro tyto proteasy jsme vycházeli ze známého substrátu N-acetyl-L-fenylalanyl- 3,5-dijod-L-tyrosinu, pomocí kterého lze stanovit aktivitu pepsinu A ve směsi s pepsinem C. Byly připraveny tři afinitní sorbenty: jodovaná L-tyrosin- Sepharosa, 3,5-dijod-L-tyrosin-Sepharosa a N-acetyl-L-fenylalanin-Sepharosa. Připravené sorbenty byly charakterizovány pomocí modelového enzymu (prasečího pepsinu A). Při studiu interakce prasečího pepsinu A a jeho komplexu s pepstatinem A s připravenými sorbenty bylo prokázáno, že se aktivní místo enzymu nepodílí na jeho interakci s...
|
|
|
Dějiny lékáren bývalého okresu Rychnov nad Kněžnou
Symonová, Monika ; Král, Karel (vedoucí práce) ; Kučerová, Zdena (oponent)
Závěr Cílem předkládané diplomové práce bylo podat celkový obraz o historii i současné situaci lékáren na Rychnovsku tak, aby poskytla základní informace nejen dnešním zájemcům o dějiny lékárenství, ale aby též mohla být zdrojem poznatků do budoucna. Na začátku byly stručně zpracovány dějiny Rychnovska ukazující vývoj od dob zemědělství po zavedení průmyslu a rozmach regionu, jako významné a hojně navštěvované kulturní a turistické oblasti. Podrobněji pak byly rozepsány dějiny jednotlivých obcí a měst, kde lze konkrétně vidět postupný vývoj a zejména dnešní situaci jasně ukazující na potřebu lékárny v dané obci či městě. Zachytit historii starých historických lékáren se podařilo na základě studia historických materiálů (metodika zpracování je v předešlé kapitole). Roku 1980 bylo na území bývalého okresu Rychnov nad Kněžnou 9 lékáren. V současnosti existuje v okrese Rychnov nad Kněžnou 24 lékáren. Již tento údaj ukazuje oprávněnost zpracování diplomové práce, navazující na již dříve zpracované materiály. Bez diplomové práce by dějiny 24 lékáren nebyly zachyceny a v budoucnosti by nikdo neznal dějiny lékáren v letech 1989- 2004. Jedná se o historicky velice zajímavé období. Teprve budoucí generace ocení velikost této doby, kdy se prakticky v celé České republice i v jednotlivých regionech počet lékáren...
|
host ::
RSS.