|
Příprava STAT3-knockoutované buněčné linie glioblastoma multiforme pomocí metody CRISPR-Cas9
Papinčáková, Dominika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Laštovičková, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králová Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Dominika Papinčáková Školiteľ: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Príprava STAT3-knockoutovanej bunkovej línie glioblastomu multiforme pomocou metódy CRISPR-Cas9 Glioblastoma multiforme (GBM) je jedným z najčastejších primárnych nádorov mozgu u dospelých a jedným z najfatálnejších nádorových ochorení u ľudí. Kľúčovým onkogénom vo vývoji a progresii GBM je signálny transduktor a aktivátor transkripcie 3 (STAT3), ktorý je jedným z mediátorov tumorgenézy. V GBM je permanentne aktivovaný, čo vedie k zvýšenej bunkovej proliferácii, invazivite a angiogenéze. Cieľom tejto práce bolo vytvoriť bunkovú líniu GBM STAT3-knockout (STAT3-KO). Na tento účel sa použila bunková línia U87MG a metóda na knockoutovanie génov CRISPR- Cas9. V prvom kroku sme skúmali možnosť tlmenia expresie STAT3 pomocou siRNA a vhodnosť tohto typu buniek na presné dourčenie mechanizmu na editáciu génov CRISPR do bunky. V druhom kroku sme transfekovali bunky pomocou súpravy na knockoutovanie génu STAT3 (CRISPR) a testovali úspešnosť knockoutu. Vo vytvorenej STAT3-KO GBM bunkovej línii sme potvrdili STAT3-KO na úrovni DNA, RNAa proteínu. Následne sme na bunkovú líniu U87MG a U87MG-STAT3-KO pôsobili temozolomidom...
|
|
Sledování přestupu albendazolu z trusu ovce domácí do pícnin pomocí LC-MS
Sochová, Andrea ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Matysová, Ludmila (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Andrea Sochová Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph. D. Název diplomové práce: Sledování přestupu albendazolu z trusu ovce domácí do pícnin pomocí LC-MS Léky mohou být obecně významným zdrojem znečištění životního prostředí, zejména léky s vysokou perzistencí. Albendazol (ABZ) patří mezi benzimidazolová anthelmintika hojně užívaná k léčbě a profylaxi parazitárních infekcí u zvířat. S exkrementy zvířat se ABZ dostává do životního prostředí a může mít negativní účinek na necílové organismy. Laboratorní experimenty prokázaly, že rostliny mohou absorbovat, a dokonce biotransformovat ABZ, avšak není dosud známo, zda k těmto jevům dochází i v reálných polních podmínkách. V této studii jsme proto sledovali přenos ABZ a jeho transformačních produktů z trusu léčených ovcí do běžných pícnin jako jsou vojtěška setá (Medicago sativa) a jetel luční (Trifolium pratense). Zajímalo nás, zda existuje možnost přenosu těchto sloučenin z exkrementů do půdy a z půdy do rostlin v reálných polních podmínkách. Naše studie úspěšně odhalila výskyt transformačních produktů albendazolu (ABZ-SO a ABZ-SO2) v obou pícninách. Nejvyšší koncentrace ABZ-SO a ABZ-SO2 byla pozorována 1. a 2. týden po aplikaci trusu. Poté se množství...
|
|
Změny v metabolismu flubendazolu během životního cyklu hlístice
Salvová, Martina ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Prchal, Lukáš (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Martina Salvová Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Změny v metabolismu flubendazolu během životního cyklu hlístice Hlístice vlasovka slezová je infekčním patogenem způsobujícím gastrointestinální haemonchózu přežvýkavců. Svůj životní cyklus má rozdělen do stádia vajíček, larev (fáze L1, L2 a L3) a dospělého jedince. Haemonchóza je časté a velmi rozšířené onemocnění hospodářských zvířat, které celosvětově působí značné ekonomické ztráty. Jelikož je léčba haemonchózy převážně založená na farmakoterapii pomocí anthelmintik, narůstající léková rezistence vlasovky slezové vůči těmto léčivům představuje velký problém. Proto je v popředí vědeckého zájmu studium mechanismů vývoje lékové rezistence u tohoto parazita. Jedním z mechanismů rezistence může být i zvýšená schopnost deaktivace anthelmintika. V případě benzimidazolového anthelmintika flubendazolu dochází k deaktivaci redukcí karbonylové skupiny pomocí enzymů aldo-ketoreduktáz a dehydrogenáz/reduktáz s krátkým řetězcem. Redukcí vzniká metabolit flubendazolu se sníženým anthelmintickým účinkem a hlístice se tak chrání před účinkem anthelmintika. Cílem této diplomové práce bylo sledování redukce flubendazolu u vajíček, larev...
|
| |
|
Metabolismus a účinnost nových potenciálních anthelmintik
Zajíčková, Markéta ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Várady, Marián (oponent) ; Vadlejch, Jaroslav (oponent)
Karlova Univerzita Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidátka: Mgr. Markéta Zajíčková Školitelka: Prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Konzultant: PharmDr. Ivan Vokřál, Ph.D. Název dizertační práce: Metabolismus a účinnost nových potenciálních anthelmintik Přemnožení gastrointestinálních hlístic představuje globální zdravotní a ekonomický problém. Proto je potřeba nalézt vhodné řešení v podobě účinné anthelmintické léčby. Na trhu je k dispozici několik anthelmintik s odlišným mechanismem účinku, avšak rozšířená léková rezistence omezuje jejich účinnost. Proto je důležité najít novou možnou alternativu. V této disertační práci byla vybrána nová potenciální anthelmintika a byl zkoumán jejich účinek proti modelové parazitické hlístici Haemonchus contortus. Studie zahrnovaly tři odlišné přístupy v oblasti vývoje léčiv: identifikace nových molekulárních entit a modifikace struktury, změna indikace již schváleného léčiva a screening léčivých rostlin. Předmětem našeho zájmu byly nově syntetizované sloučeniny označené jako BLK127, HBK4 a deriváty BLK127, dlouhodobě používané antipsychotikum sertralin (SRT) a extrakty z osmi evropských druhů kapradin rodu Dryopteris, Athyrium a Blechnum. Pro screening anthelmintické účinnosti byla použita dvě vývojová stádia, vajíčka a dospělci,...
|
|
Diagnostic potential of piwi-RNA molecules in the process of in vitro fertilization
Šeršeň, Dominika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Raisová Stuchlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Dominika Šeršeň, DiS. Školiteľ: doc. RNDr. Lenka Skálová, PhD. Konzultant: doc. RNDr. Miroslava Rabajdová, PhD. Názov diplomovej práce: Diagnostický potenciál piwiRNA molekúl v IVF procese Neplodnosť je v súčasnej dobe veľkým zdravotným problémom, ktorý postihuje milióny párov v reprodukčnom veku na celom svete a využitie techník in vitro oplodnenia sa celosvetovo každoročne zvyšuje. Pre úspešné in vitro oplodnenie je nevyhnutné vybrať kvalitné embryo. Napriek pokrokom pri in vitro fertilizácii je stále nedostatočné množstvo neinvazívnych a spoľahlivých biomarkerov na selekciu embryí s najvyšším vývojovým a implantačným potenciálom. Ako vhodný biomarker sa ukazujú malé nekódujúce RNA, konkrétne piwiRNA (piRNA) a mikroRNA (miRNA), secernované do extracelulárneho prostredia, ktorým je kultivačné médium. Táto práca popisuje hodnotenie kvality embryí, ich morfologické znaky v jednotlivé dni ako aj samotný anotačný systém pomocou TimeLapse systému. V ďalších kapitolách je popísané zloženie médií, ktoré sú vhodné ku kultivácii embryí, a ich analýza na omickej úrovni so zamerením na piRNA a miRNA. Hlavným cieľom tejto práce je preukázať diagnostický potenciál malých nekodujúcích RNA molekúl v in vitro...
|
|
Působení fenbendazolu na biotransfromační enzymy vlasovky slezové
Šulcová, Kateřina ; Matoušková, Petra (vedoucí práce) ; Skálová, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Bc. Kateřina Šulcová Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Působení fenbendazolu na biotransformační enzymy vlasovky slezové Vlasovka slezová (Haemonchus contortus) je hlístice parazitující v gastrointestinálním traktu přežvýkavců. U napadených zvířat způsobuje nemoc nazvanou hemonchóza. Ta se projevuje anémií, úbytkem na hmotnosti a celkovým neprospíváním. V mnohých případech může dojít až k uhynutí jedince. K léčbě se používají látky, obecně nazývané anthelmintika, působící proti různým parazitům, především helmintům. Celosvětovým problémem je už řadu let rezistence parazitů vůči všem skupinám těchto léčiv. To je nejspíše následkem častého a neadekvátního používání anthelmintik, kdy dochází k vystavení parazitů sub-letálním dávkám těchto léčiv. Mechanismy rezistence se liší v závislosti na skupině anthelmintika, a jeho mechanismu účinku. Tato práce se zabývá studiem rezistence H. contortus vůči fenbendazolu, anthelmintiku ze skupiny benzimidazolů. Jedním z mechanismů by mohla být změna exprese genů některých biotransformačních enzymů a efluxních transportérů. V této práci byla sledována exprese vybraných genů biotransformačních enzymů a transportérů ze skupin cytochromů P450...
|
|
Diagnostic potential of piwi-RNA molecules in the process of in vitro fertilization
Šeršeň, Dominika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Raisová Stuchlíková, Lucie (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Dominika Šeršeň, DiS. Školiteľ: doc. RNDr. Lenka Skálová, PhD. Konzultant: doc. RNDr. Miroslava Rabajdová, PhD. Názov diplomovej práce: Diagnostický potenciál piwiRNA molekúl v IVF procese Neplodnosť je v súčasnej dobe veľkým zdravotným problémom, ktorý postihuje milióny párov v reprodukčnom veku na celom svete a využitie techník in vitro oplodnenia sa celosvetovo každoročne zvyšuje. Pre úspešné in vitro oplodnenie je nevyhnutné vybrať kvalitné embryo. Napriek pokrokom pri in vitro fertilizácii je stále nedostatočné množstvo neinvazívnych a spoľahlivých biomarkerov na selekciu embryí s najvyšším vývojovým a implantačným potenciálom. Ako vhodný biomarker sa ukazujú malé nekódujúce RNA, konkrétne piwiRNA (piRNA) a mikroRNA (miRNA), secernované do extracelulárneho prostredia, ktorým je kultivačné médium. Táto práca popisuje hodnotenie kvality embryí, ich morfologické znaky v jednotlivé dni ako aj samotný anotačný systém pomocou TimeLapse systému. V ďalších kapitolách je popísané zloženie médií, ktoré sú vhodné ku kultivácii embryí, a ich analýza na omickej úrovni so zamerením na piRNA a miRNA. Hlavným cieľom tejto práce je preukázať diagnostický potenciál malých nekodujúcích RNA molekúl v in vitro...
|
|
Změny v expresi karbonylreduktas během životního cyklu hlístice
Ňorková, Kateřina ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Szotáková, Barbora (oponent)
Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové Fakulta biochemických věd Kandidát: Bc. Kateřina Ňorková Školitel: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Název diplomové práce: Změny v expresi karbonylreduktas během životního cyklu hlístice Vlasovka slezová (Haemonchus contortus, z čeledi Trichostrongylidae) je hlístice napadající sliznici gastrointestinálního traktu malých přežvýkavců. Infekce vyvolané touto hlísticí se projevují anémií a edémem. K profylaxi i léčbě těchto infekcí se využívají anthelmintika, tj. léčiva působící proti parazitickým červům. Avšak obrovským problémem je celosvětově narůstající rezistence hlístic na veškerá dostupná anthelmintika. Proto je velmi důležité studovat možné mechanismy vzniku rezistence a faktory, které k vývoji rezistence přispívají. V posledních letech bylo zjištěno, že jedním z mechanismů vzniku rezistence vůči anthelmintikům může být zvýšená exprese a aktivita některých enzymů metabolizujících léčiva. Tato práce se zabývala sledováním změn v expresi vybraných genů z nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem (SDR). Exprese 20 SDR genů byla stanovena pomocí metody kvantitativní PCR ve všech vývojových stádiích (vajíčka, larvy, dospělci) hlístice H. contortus, porovnávána mezi kmenem ISE (Inbread Susceptible Edinburgh, MHco3) a kmenem...
|
|
Příprava STAT3-knockoutované buněčné linie glioblastoma multiforme pomocí metody CRISPR-Cas9
Papinčáková, Dominika ; Skálová, Lenka (vedoucí práce) ; Laštovičková, Lenka (oponent)
Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králová Katedra biochemických vied Kandidát: Bc. Dominika Papinčáková Školiteľ: prof. RNDr. Lenka Skálová, Ph.D. Názov diplomovej práce: Príprava STAT3-knockoutovanej bunkovej línie glioblastomu multiforme pomocou metódy CRISPR-Cas9 Glioblastoma multiforme (GBM) je jedným z najčastejších primárnych nádorov mozgu u dospelých a jedným z najfatálnejších nádorových ochorení u ľudí. Kľúčovým onkogénom vo vývoji a progresii GBM je signálny transduktor a aktivátor transkripcie 3 (STAT3), ktorý je jedným z mediátorov tumorgenézy. V GBM je permanentne aktivovaný, čo vedie k zvýšenej bunkovej proliferácii, invazivite a angiogenéze. Cieľom tejto práce bolo vytvoriť bunkovú líniu GBM STAT3-knockout (STAT3-KO). Na tento účel sa použila bunková línia U87MG a metóda na knockoutovanie génov CRISPR- Cas9. V prvom kroku sme skúmali možnosť tlmenia expresie STAT3 pomocou siRNA a vhodnosť tohto typu buniek na presné dourčenie mechanizmu na editáciu génov CRISPR do bunky. V druhom kroku sme transfekovali bunky pomocou súpravy na knockoutovanie génu STAT3 (CRISPR) a testovali úspešnosť knockoutu. Vo vytvorenej STAT3-KO GBM bunkovej línii sme potvrdili STAT3-KO na úrovni DNA, RNAa proteínu. Následne sme na bunkovú líniu U87MG a U87MG-STAT3-KO pôsobili temozolomidom...
|