|
Zobrazování měkkých tkání pomocí mikro-CT
Patzelt, Matěj ; Rosina, Jozef (vedoucí práce) ; Vránová, Jana (oponent) ; Fiala, Pavel (oponent)
Rentgenové snímkování je neinvazivní zobrazovací technika pro zobrazení vnitřní struktury zkoumaného objektu. V posledních letech získává na popularitě zobrazování biologických vzorků v mikro-CT. Nevýhodou této techniky je snížená schopnost zobrazovat měkké tkáně jako jsou například svaly, tuková tkáň nebo nervová tkáň, pro jejich nízký vnitřní kontrast. Cílem této práce bylo upravit komerční mikro-CT MARS, tak aby bylo schopné kvalitně zobrazovat měkké tkáně a vytvořit protokol jednoduché a levné fixace ex-vivo měkkých tkání pro zobrazování v mikro-CT. V práci bylo použito modifikované mikro-CT MARS osazené photon counting detektorem Timepix Quad s rozlišením 30µm. Mikro-CT bylo následně otestováno na fantomu i reálných měkkých tkáních. Pro snímání ex-vivo měkkých tkání v mikro-CT byla vyvinuta etanolová metoda fixace. Srdce a plíce laboratorních myší byly fixovány buď v 97% etanolu, 50% etanolu nebo ve vzestupné řadě koncentrací etanolu. Vzorky byly snímané buď po 72 hodinách, 168 hodinách, nebo po 336 hodinách. Výsledné snímky byly porovnány navzájem a se snímky nativních vzorků. Dále byla tato metoda fixace vyzkoušena na zdravých mozcích laboratorních myší za účelem zhodnocení přínosu zobrazování mozku v mikro-CT ve výzkumu centrálního nervového systému. Modifikované mikro-CT bylo úspěšně...
|
|
Využití spektrální analýzy pro léčbu paroxysmální či perzistující fibrilace síní
Veselá, Jana ; Rosina, Jozef (vedoucí práce) ; Hána, Karel (oponent) ; Vančura, Vlastimil (oponent)
Úvod: Fibrilace síní (FS) patří mezi nejčastěji se vyskytující setrvalé arytmie, která je charakteristická svojí rychlou a neorganizovanou aktivací srdečních síní. Její výskyt vzrůstá s věkem pacienta. Toto onemocnění zvyšuje mortalitu, morbi- ditu či výskyt tromboembolických příhod u pacientů. Nalézt způsob, jak vyléčit tuto arytmii, zůstává stále předmětem mnoha výzkumů. Tato práce se zabývá vy- užitím analýzy variability srdeční frekvence (HRV) v léčbě fibrilace síní. Výsledky z časové, frekvenční a nelineární analýzy byly použity ve dvou případech. Prvním z nich bylo využití v léčbě u pacientů léčených hybridním způsobem pro fibrilaci síní, kdy pacienti podstupují nejprve kardiochirurgický zákrok, na který v od- stupu času navazuje elektrofyziologický výkon (studie 1). Cílem bylo odhadnout vliv ablace gangliových plexů na autonomní nervový systém. Ve druhém případě jsme se zaměřili na predikci předoperačních parametrů získaných z analýzy va- riability srdeční frekvence, které by mohly mít spojitost s výskytem pooperační fibrilace v časném stádiu po kardiochirurgickém zákroku (studie 2). Metodika: Studie 1: Do studie byly zahrnuti pacienti s paroxysmální, perzis- tentní a dlouhodobě perzistentní fibrilací síní. Všichni zařazení pacienti podstou- pili elektrofyziologické vyšetření s následnou...
|
|
Intelligent nanofibres functionalized with growth factors and blood derivatives for dermatology applications
Vocetková, Karolína ; Amler, Evžen (vedoucí práce) ; Rosina, Jozef (oponent) ; Arenberger, Petr (oponent)
Krevní deriváty jsou výborným zdrojem přirozených růstových faktorů. V tkáňovém inženýrství a regenerativní medicíně již našly řadu uplatnění. Cílem této práce bylo optimalizovat podmínky buněčné kultury za použití destičkového lyzátu, a dále vyvinout mikro- a nanovlákenné nosiče funkcionalizované krevními destičkami, které by mohly sloužit jako systém řízeného dodávání přírodních růstových faktorů. Mikro- a nanovlákenné nosiče byly připraveny elektrostatickým a centrifugačním zvlákňováním PCL. Připravené nosiče byly funkcionalizovány povrchovou adhezí krevních destiček nebo jejich enkapsulací do vnitřní části nanovláken emulzní technikou. V rámci studie kultivačních podmínek kožních buněk bylo zjištěno, že suplementace media 7% destičkovým lyzátem je dostačující pro nahrazení 10% FBS v kultuře keratinocytů a fibroblastů. Dále byl povrch PCL nanovláken připravených elektrostatickým zvlákňováním funkcionalizován krevními destičkami. Při kontaktu s nanotopografií nanovlákenného povrchu došlo k aktivaci destiček a následně k vytvoření fibrinové sítě, která sloužila jako rezervoár růstových faktorů. Díky tomu došlo k prodloužení poločasu uvolnění EGF až na 1.7 dní. Takto funkcionalizované nanovlákenné nosiče podporovaly proliferace a metabolickou aktivitu keratinocytů, fibroblastů a melanocytů. Při...
|
| |
|
Vývoj scaffoldů pro regeneraci kostních defektů
Prosecká, Eva ; Amler, Evžen (vedoucí práce) ; Rosina, Jozef (oponent) ; Gášková, Dana (oponent)
Výsledkem in vitro a in vivo studií je nový, biokompatibilní, biodegradabilní, osteokonduktivní a osteoinduktivní 3D scaffold s vysokým potenciálem pro klinické použití. Scaffold složený z 0.5% kolagenu typu I s 50 % hydroxyapatitu s velikostí pórů v průměru 400 μm, je vhodný pro buněčnou migraci, proliferaci, diferenciaci a vaskularizaci. Následně přidaná poly-ɛ-kaprolaktonová nanovlákna zlepšila mechanické vlastnosti scaffoldu. Scaffold byl dále obohacen mesenchymálními kmenovými buňkami a trombocytárním koncentrátem jako přírodním zdrojem růstových faktorů. Tento funkcionalizovaný scaffold byl postupně nahrazen novou kostní tkání po implantaci in vivo, a to v celém objemu defektu, v kondylu femuru králíka za jeho postupné biodegradace. Pro výrobu tohoto scaffoldu byly navíc použity materiály a výrobní postupy splňující podmínky Evropské lékové agentury pro humánní použití. V průběhu experimentů byl též vyvinut slibný systém pro dodávání bioaktivních látek pro regeneraci kostní tkáně založený na koaxiálních nanovláknech z poly-ɛ-kaprolaktonu a polyvinylalkoholu.
|
|
Rizikové faktory, možnosti prevence a časné diagnostiky maligního melanomu
Kulichová, Daniela ; Čelko, Alexander (vedoucí práce) ; Rosina, Jozef (oponent) ; Dohnal, Karel (oponent)
Souhrn Cíl práce Za jeden z nejdůležitějších environmentálních rizikových faktorů při vzniku maligního melanomu je považováno ultrafialové záření. Z tohoto důvodu je rozšiřování informací o rizikových faktorech a metodách prevence maligního melanomu zcela zásadní ve snižování incidence melanomu a jeho časné diagnostice. Cílem práce je ověřit frekvenci a zjistit příčiny zvýšeného trendu nemocnosti a úmrtnosti na maligní melanom v České republice a v Německu. Dále by studie měla přispět nejen z hlediska veřejného zdravotnictví, ale také z histopatologického hlediska ke zvýšené informovanosti o rizikových, diagnostických a prognostických faktorech spojených s tímto novotvarem. Výsledky studie budou sloužit i jako materiál pro zvýšení povědomí o faktorech způsobujících předčasné stárnutí, poškozování kůže a vznik nádorových onemocnění. Budou zde zdůrazněny hlavní rizikové faktory vzniku melanomu, jeho prevence a časný záchyt. Metoda zpracování Tato práce byla realizovaná na dvou význačných dermatologických pracovištích Evropy, na Dermatovenerologické klinice Fakultní nemocnice Královské Vinohrady v Praze a na Klinice a poliklinice pro dermatologii a alergologii v Mnichově v Německu. Jedná se o retrospektivně prospektivní studii zaměřenou na detekci a analýzu rizikových faktorů a možnosti časné diagnostiky...
|
|
Detekce a vizualizace nativních a artificiálních chrupavčitých tkání biofyzikálními technikami
Rampichová, Michala ; Amler, Evžen (vedoucí práce) ; Rosina, Jozef (oponent) ; Kolářová, Hana (oponent)
Tkáňové inženýrství je rychle se vyvíjející obor využívající nosiče z přírodních nebo syntetických materiálů kombinovaných s buňkami a stimulačními látkami pro náhradu poškozené či chybějící tkáně. Při testování nosičů je potřeba dobře zhodnotit jejich kvality nezbytné pro růst buněk a jejich mechanickou podporu na místě určení. Cílem práce bylo vytvoření vhodného nosiče pro růst chondrocytů, jeho funkcionalizace a detekce buněk a proteinů mezibuněčné hmoty pomocí metod fluorescenční a konfokální mikroskopie. Vhodný nosič měl být otestován na velkém animálním modelu. V této práci bylo připraveno několik nosičů jak z přírodních, tak ze syntetických materiálů, a to ve formě mikrovláken, netkaných textilií, gelů a pěn. Nosiče byly osazeny buňkami a byla sledována buněčná adheze, proliferace a syntéza proteinů mezibuněčné hmoty. K vizualizaci buněk a mezibuněčné hmoty bylo použito metod fluorescenční a konfokální mikroskopie a druhé harmonické (SHG). Jako nosič pro implantaci do osteochondrálního defektu mini prasete byl použit gel na bázi fibrinu a hyaluronanu. Připravené nosiče vykazovaly biokompatibilitu, chondrocyty k nim dobře adherovaly a produkovaly proteiny mezibuněčné hmoty. Mikrovlákenný nosič z PHEMA byl navíc obohacen o liposomy obsahující fetální bovinní sérum. Tento systém řízeného dodávání látek...
|
|
Identifikace změn mechanických vlastností axiálního systému člověka v důsledku zátěžového a relaxačního režimu
Van der Kamp Kloučková, Kateřina ; Jelen, Karel (vedoucí práce) ; Maršík, František (oponent) ; Rosina, Jozef (oponent)
SOUHRN Problém: V současné době je věnována velká pozornost bezpečnosti řízení a možnosti registrace únavy řidičů automobilu. Jízda v automobilu je monotónní statická a vibrační zátěž, která po nějaké době vyvolává změny v axiálním systému, dyskomfort a únavu. Hypotéza: Prostřednictvím metodiky TVS je možné prokázat změnu mechanických vlastností axiálního systému. Použitím metody TVS před a po různém typu zátěže nebo před a po relaxaci je možné detekovat změny viskoelastických vlastností axiálního systému na základě změny přenosu vlnění axiálním systémem. Metodu TVS je možné využít i u těhotných subjektů. Cíl: Ověřit využitelnost metodiky TVS pro registraci změn viskoelastických charakteristik axiálního systému. Metoda: Metodou detekce byla TVS (transfer vibration through spine). Ta spočívá v aplikaci buzení γ pulzy o pološířce 5ms a posléze harmonického buzení plynule se měnícího od 5 Hz do 160 Hz na obratle C7 a L5. Toto vlnění se přenáší podél axiálního systému a akcelerometrickými snímači je snímáno zrychlení všech trnových výběžků obratlů, kterými se vlnění šíří mezi C7 až S1. Na základě naměřených dat (vstupního buzení a jeho snímané odezvy na trnových výběžcích obratlů) lze vyhodnotit změnu celkových viskoelastických parametrů páteře před a po monotónním nebo jiném zatížení páteře nebo před a po...
|
|
Charakterizace funkcionalizovaných vlákenpro jejich osídlení mezenchymálními kmenovými buňkami a diferenciaci těchto buněk
Greplová, Jarmila ; Amler, Evžen (vedoucí práce) ; Rosina, Jozef (oponent)
Modifikace vláken za účelem funkcionalizace je aktuální trend v problematice tkáňového inženýrství. Polyvinylalkohol (PVA) je netoxický, biodegradabilní polymer vhodný k přípravě nanovláken metodou elektrostatického zvlákňování. Jeho nevýhodou je však velká rozpustnost ve vodě, která vede k okamžité degradaci vláken. Jako výhodné se pak ukazuje jeho chemické složení, kdy je možné modifikovat volné hydroxyskupiny PVA. Pro modifikace byla připravena PVA nanovlákna metodou elektrostatického zvlákňování z hladiny. Metodou acylace se podařilo navázat na povrch nanovláken linker tvořený z polyetylenglykolu (PEG) zakončený molekulou biotinu (PEG-b). Tato modifikace nenarušila vlákenný charakter PVA vrstvy. Vazbou linkeru PEG-b na PVA nanovlákna (PVA-PEG-b) došlo ke zvýšení stability vláken ve vodném prostředí a to až po dobu 41 dní, což je výrazné zvýšení oproti nemodifikované formě. Stabilita vláken ve vodném prostředí se zvyšuje s množstvím linkeru a metoda tedy umožňuje připravovat PVA nanovlákna o různé rozpustnosti. Výsledná modifikace se ukázala jako biokompatibilní pro mezenchymální kmenové buňky (MSC) i chondrocyty. Proliferace buněk na nosiči však byla nízká a kultivace obou typů buněk vykazovala postupný úbytek buněk, pravděpodobně z důvodu velké hydrofility nosiče. Z tohoto důvodu byly navrženy...
|
|
Fyzikální faktory ovlivňující vznik poškození rohovky králičího oka UV zářením
Čejka, Čestmír ; Rosina, Jozef (vedoucí práce) ; Štípek, Stanislav (oponent) ; Amler, Evžen (oponent) ; Salminen, Lotta (oponent)
Cíl práce: Cílem disertační práce "Fyzikální faktory ovlivňující poškození králičí rohovky UV zářením" bylo a) vyšetřit propustnost světla králičí rohovkou ozářenou UVB paprsky měřením fyzikálních hodnot absorbance A a transmitance T jako funkce vlnové délky ; b) vyšetřit absorpční koeficient jako funkci vlnové délky ; c) zhodnotit významnost tohoto koeficientu pro absorpci světla v rohovce; d) vyšetřit absorpci světla v rohovce ozářenou UVA paprsky měřením fyzikálních hodnot absorbance A a transmitance T jako funkce vlnové délkky (porovnat účinek UVA záření s UVB zářením). Materiál a Metoda: Pro dosažení jednotlivých cílů byla vypracována nová spektrofotometrická metoda, umožňující kvalitativně i kvantitativně hodnotit absorpci světla v rohovce a byly provedeny následující experimenty: a) Opakované ozařování králičí rohovky UVB paprsky (denní dávka 1.01 J/cm2 v průběhu pěti dnů); b) Opakované ozařování králičí rohovky UVA paprsky (1.01 J/cm2, nebo 2.02 J/cm2 v průběhu pěti dnů); c) Opakované ozařování králičí rohovky dávkou 1.01 J/cm2 jedenkrát denně po dobu 1 až 4 dnů a v jednotlivých časových intervalech vyšetření změny absorpce světla rohovkou a změny hydratace; d) Opakované ozařování králičích rohovek UVB zářením v denních dávkách 0.5 J/cm2, 1.01 J/cm2, v průběhu 4 dnů. V průběhu ozařování byl na pravé...
|